蔬菜農藥殘留快速檢測
——酶抑制法檢測常見問題

鄯善縣七克臺鎮(zhèn)農技推廣站,新疆吐魯番 838203

蔬菜農藥殘留快速檢測作為一種定性的檢測技術，因其快速、簡便、靈敏、經濟，適用于大樣品的篩查檢測，較多地應用于農產品批發(fā)市場、蔬菜生產基地、各大超市以及基層農產品質量安全檢測機構的日常檢測工作。

1 規(guī)范檢測操作環(huán)節(jié)

1.1 檢測室管理

檢測室必須保持清潔、整齊、安靜，禁止在檢測室吸煙、飲食。各種儀器、器皿、試劑標志清晰。所有器具及藥品應分類有序存放，并張貼明顯的標簽。儀器設備、物品使用完畢后，清洗或擦洗干凈歸還原處。嚴格按照標準要求保管好檢測試劑，管理、維護、使用好檢測設備，保持儀器設備始終處于良好狀態(tài)。檢測人員必須嚴謹務實，操作規(guī)范、準確，客觀公正地做好檢測記錄結果，檢測完畢后，必須切斷水、電源，關好門窗后離開檢測室。

1.2 藥品的存放

酶、底物、顯色劑易變質失效（通常藥品的保質期為一年），其中酶是檢測成功的關鍵。酶的種類、活性、純度都會對檢測結果造成很大影響，因此藥品的日常存放非常重要。通常藥品需在冷藏條件下存放，0～5℃為宜。已配置好的液體藥劑（如沒有用完的提取液、底物和顯色劑）也要在此條件下存放，切勿冷凍結冰。另外，建議將配置好的溶液采取分裝制存放，即取即用。

1.3 藥品的配置

提取液（也稱緩沖液）作為其他試劑配制的稀釋劑，它的配置是關鍵的。提取液需用蒸餾水配置，規(guī)定值pH=0.8，在實際配置中應對pH值進行校正。底物用蒸餾水配置，顯色劑用提取液配置。以上三種藥品的配置要嚴格按照試劑瓶上規(guī)定的量加入蒸餾水和提取液，同時注意溫度控制。這三種藥品以及酶試劑需在室溫條件下使用，即藥品的溫度在15～20℃之間為宜。

1.4 樣品的選擇和處理

葉菜類應去爛葉、枯葉、蕊葉;果實類從表皮至果肉1～2 cm處，果肉不宜取過多;含葉綠素和其他色素較高的蔬菜應采取整株（體）浸提，盡量避免過多色素浸出，干擾測定。若實驗室有條件，對色素干擾嚴重的過濾液，可用活性碳脫色處理，過濾或離心后，取清液作為待測液。

蔥（含有揮發(fā)性硫化物）姜（姜辣素）、蒜類（含硫揮發(fā)物，硫化亞磺酸如大蒜素等）、蘿卜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有對酶有影響的植物次生物質，往往由于基質效應引起的干擾產生假陽性。處理這類樣品時，可采取整株（體）浸提，避免次生物質干擾。

1.5 移液器和試劑使用

使用移液器時，必須遵循器具專用原則:吸取酶、顯色劑、底物的移液器貼上專用標簽，移取試劑時一一對應使用，避免混用污染試劑。使用試劑時，嚴格遵循只出不進原則:從酶、顯色劑、底物試劑瓶中移出的試劑，不得返回原試劑瓶中，以免污染原試劑。

2 檢測值常出現(xiàn)的異常問題和解決辦法

2.1 對照值偏小

首先要保證儀器良好的穩(wěn)定性，同時確保提取液和藥品均在室溫狀態(tài)下;其次將顯色劑和底物加入提取液后的時間要嚴格控制，加入底物后應立即檢測（加入底物10 s內即將比色皿放入儀器開始檢測為宜），盡量縮短操作時間，否則對照值會偏小。

2.2 樣品吸光值偏高

這種現(xiàn)象是由于酶本身活性低，樣品待測液顏色深以及反應中化學、物理的干擾造成的。解決辦法:一是將酶和其他藥品的溫度提高至室溫;二是按上面提到的方法對這類蔬菜樣品進行特殊處理。

2.3 檢測結果中抑制率為負值

當樣品出現(xiàn)較小的負值誤差-10%以內，是在允許范圍之內的。這是由檢測員人為因素導致的。酶分解底物，分解物與顯色劑結合的過程很快，檢測員稍有耽擱或不熟練都會產生人為誤差，導致抑制率為負值。

2.4 檢測結果抑制率無效

一是試劑從冰箱取出后，未恢復至室溫即進行檢測。二是對照測試時間與樣品測試時間相隔太久，導致對照與樣品測試溫度條件相差較大。三是被測樣品色素干擾較嚴重。四是反應試劑取用量是否準確。

3 假陽性與假陰性

假陽性是由于酶活性降低或失活，底物不與之反應，從而不能被水解，無法與顯色劑結合顯色。假陰性是因為某些農藥對酶抑制作用很小或無作用而產生的，表現(xiàn)出無農藥殘留的假象。另外，在反應過程中化學、物理干擾都有可能導致假陽性、假陰性的發(fā)生。