肝脂溶顆粒對非酒精性脂肪肝大鼠胰島素抵抗的影響※

隋曉丹

（長春中醫藥大學附屬醫院肝脾胃病科，吉林 長春 130021）

非酒精性脂肪肝病（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）發病率呈逐年上升趨勢，已成為21世紀全球重要公共健康問題之一。本實驗通過觀察肝脂溶顆粒對NAFLD大鼠胰島素抵抗的影響，及胰島素抵抗在NAFLD中的作用，并探明調節其作用的傳導途徑，為中醫臨床干預治療非酒精性脂肪肝提供理論依據和新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 Wistar大鼠60只，雄性，體質量（200±20） g。

1.1.2 藥物 肝脂溶顆粒：長春中醫學院附屬醫院制劑室，批準文號：長衛制藥字 (96)1367號。多烯磷脂酰膽堿膠囊：賽諾非安萬特（北京）制藥有限公司，批準文號：國藥準字H20059010。

1.2 方法

1.2.1 非酒精性脂肪肝模型復制方法 大鼠適應環境1周后隨機分為正常組9只、高脂組51只。正常組予普通飼料喂養，高脂組予高脂飼料（88%基礎飼料、10%豬油、2%膽固醇）喂養，自由飲水。12周后隨機選出7只大鼠（正常組1只，高脂組6只），處死后取肝臟組織進行HE染色，驗證造模情況。

1.2.2 實驗動物分組及給藥方法 12周后，正常組大鼠普通飼料喂養同時每日生理鹽水灌胃。高脂組大鼠隨機分為模型組、多烯磷脂酰膽堿膠囊對照組（簡稱：對照組）、肝脂溶顆粒高、中、低劑量組（簡稱：高、中、低劑量組）。繼續高脂飼料喂養同時每日給予不同藥物進行灌胃（模型組：生理鹽水灌胃1 mL/100 g；對照組：多烯磷脂酰膽堿膠囊水溶液灌胃，按0.14 g/kg體重給藥；高劑量組：100%濃度肝脂溶顆粒水溶液灌胃，按3 g/kg體重給藥；中劑量組：70%濃度肝脂溶顆粒水溶液灌胃，按2.1 g/kg體重給藥；低劑量組：30%濃度肝脂溶顆粒水溶液灌胃，按0.9 g/kg體重給藥），連續灌胃4周后取材。

1.2.3 血標本采集 以2%戊巴比妥鈉溶液腹腔內注射麻醉，腹主動脈采血4～5 mL，分離血清，置于－20℃冰箱保存備用。

1.3 觀察指標 血清空腹血糖 (FBG)及空腹胰島素(FINS)的檢測；FBG測定：采用全自動生化分析儀；FINS測定：采用放射免疫方法，125I-胰島素放免分析試劑盒。

1.4 血清HOMA-IR計算方法 根據推薦公式計算胰島素抵抗指數：HOMA-IR=FINS×FBG/22.5。

1.5 統計學方法 采用SPSS 16.0統計軟件處理數據，計量資料以均數加減標準差（）表示。

2 結果

實驗16周末各組NAFLD大鼠空腹血糖、胰島素和IR均明顯高于正常組（P＜0.01），差異有顯著統計學意義；而模型組大鼠空腹血糖、胰島素和IR最高，明顯高于各藥物干預組（P＜0.01），差異有顯著統計學意義；高劑量組大鼠空腹血糖、胰島素和IR明顯低于對照組（P＜0.01），差異有顯著統計學意義；中劑量組大鼠空腹血糖、胰島素和IR低于對照組（P＜0.05），差異有統計學意義；低劑量組大鼠空腹血糖、胰島素和IR與對照組相比，差異無統計學意義（P＞0.05）。說明肝脂溶顆粒能夠明顯改善NAFLD大鼠胰島素抵抗水平，療效顯著優于多烯磷脂酰膽堿膠囊。見表1。

表1 各組大鼠16周末血清FBG、FINS、IR比較 （）

注：與正常組相比，*P＜0.01，**P＜0.05；與模型組相比，ΔP＜0.01，ΔΔP＜0.05；與對照組相比，＆P＜0.01，#P＜0.05，##P＞0.05

IR 1.74±0.32 6.98±1.19*5.86±0.51*Δ 1.98±0.48*Δ＆3.91±0.76*Δ#5.34±0.27*Δ##組別 只數 FBG（mmol/L） FINS（uIU/mL）正常組模型組對照組高劑量組中劑量組低劑量組8 9 8 9 8 9 4.63±1.52 12.04±1.47*10.92±0.93*Δ 5.47±0.93*Δ＆8.31±1.75*Δ#10.26±1.84*Δ##7.98±0.45 13.06±0.73*12.07±0.38*Δ 8.48±0.62*Δ＆10.68±0.56*Δ#11.75±0.21*Δ##

3 討論

IR指肝臟、肌肉、外周脂肪組織對胰島素的敏感性及反應性降低，胰島素的生物學效應下降。IR是NAFLD發生過程中的始動因素和重要因素[1]，IR是肝臟脂肪貯積的首要原因，它不僅參與了首次打擊，還參與了二次打擊[2]，并且IR的嚴重程度與NAFLD的病情進展及預后密切相關[3]。

IR主要通過脂肪分解作用和高胰島素血癥兩種機制導致肝細胞脂質沉積。IR可減弱胰島素對脂肪的調節作用，導致外周脂肪的分解增加和血清游離脂肪酸的增多，當肝臟內合成脂肪增加到一定程度，超過了肝細胞氧化利用及合成脂蛋白運送的能力時，便會導致肝細胞內過多脂肪的堆積。脂肪酸具有肝細胞毒性，不僅能夠通過引起線粒體腫脹并增加其通透性，炎性浸潤，肝細胞變性、壞死而誘導細胞凋亡，同時還能夠刺激胰島β細胞增加胰島素的分泌，進而產生或加重高胰島素血癥。

IR時胰島素的生物學效應下降導致高胰島素血癥，引起糖降解和脂肪酸的合成增加、ApoB-100的合成減少而加重甘油三酯的儲積。而各種原因所致的脂肪肝均可以促進胰島分泌胰島素，同時肝細胞脂肪堆積又可以導致胰島素清除率下降，從而形成脂肪肝與胰島素抵抗的惡性循環。此外，IR還可以通過刺激微粒體的脂質過氧化物酶而易使肝臟發生氧化應激。范建高等[4]研究證實幾乎所有NAFLD患者都存在肝臟和外周胰島素抵抗，并且不依賴于肥胖、糖耐量異常和糖尿病。

劉鐵軍教授總結多年治療非酒精性脂肪肝的臨床經驗，依據《臨證指南醫案·濕》云：“而但濕從內生者，必其人膏粱酒醴必度。”非酒精性脂肪肝的發病多因嗜食肥甘厚味導致損傷脾胃，運化失司，濕熱內蘊，傷及肝膽，疏泄失職，導致氣機郁滯，血脈瘀阻，痰濁瘀積，肝臟脈絡受阻，濕熱瘀積互結于肝而成脂肪肝。自研肝脂溶顆粒[5]，由決明子、枳椇子、澤瀉等組成。諸藥合用，消而不伐，補而不滯，寒溫并用，藥性平和，共奏清熱利濕、化瘀消積之功效。本實驗結果表明肝脂溶顆粒能夠提高胰島素的敏感性，改善胰島素抵抗，恢復正常糖脂代謝，而達到預防脂肪肝的目的。其療效與劑量呈正相關，且對胰島素抵抗有治療效果，且顯著優于多烯磷脂酰膽堿膠囊。高脂飲食誘導致NAFLD大鼠血清IR顯著增高，這可能是大鼠引起非酒精性脂肪肝的機制之一，肝脂溶顆粒顯著降低了血清IR，因此，肝脂溶顆粒對非酒精性脂肪肝的防治作用，可能是通過改善胰島素抵抗而完成的。