一起豬弓形蟲和鏈球菌混合感染的診斷與防治

郎利敏，王克領(lǐng)，張立憲，游 一，徐引弟，焦文強(qiáng)，胡德林

（1.河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，河南 鄭州 450002；2.商水縣畜牧局動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，商水 466100）

豬弓形蟲病是由剛第弓形蟲引起的一種人獸共患原蟲病，以高熱稽留、呼吸困難、死亡為主要特征，磺胺類藥物對其有良好的治療效果，其他藥物無效[1]。豬鏈球菌病是由致病性鏈球菌引起的一種急性、敗血癥型、腦膜腦炎型的人獸共患傳染病，以高熱、氣喘、神經(jīng)癥狀、關(guān)節(jié)腫大、皮膚發(fā)紅、急性死亡等為主要特征[2]。

隨著集約化、規(guī)?；B(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展，飼養(yǎng)密度增加，豬免疫抑制性疾病、豬群抵抗力下降等因素的存在，目前豬弓形蟲病和鏈球菌病在豬場時(shí)有發(fā)生，由于這兩種疫病在臨床癥狀、剖檢病理變化方面和豬瘟、藍(lán)耳病、偽狂犬病等有相似之處，很容易發(fā)生誤診；另外近些年由于抗生素類藥物的大量使用，豬鏈球菌對很多抗生素類藥物產(chǎn)生耐藥性，如果不能及時(shí)使用敏感藥物治療，會造成極大的損失。2017年8月，河南開封某肥育豬場發(fā)生一起豬弓形蟲和鏈球菌混合感染疫情，由于未能及時(shí)確診和采取正確的措施，損失嚴(yán)重，現(xiàn)將本次疫情的診斷過程、治療結(jié)果和體會報(bào)告如下。

1 發(fā)病情況

發(fā)病豬場存欄50 kg左右肥育豬600頭，2017年8月初豬群出現(xiàn)發(fā)燒、減食，病豬呼吸困難，皮膚發(fā)紅，有的急性死亡。發(fā)病前期使用替米考星和氟苯尼考治療7 d，未能控制疫情，期間注射了豬瘟疫苗和偽狂犬病疫苗，仍不見好轉(zhuǎn)，然后使用磺胺六甲氧嘧啶拌料，病豬注射復(fù)方長效磺胺，疫情稍有緩解，但每天會出現(xiàn)3～5頭病豬，仍有急性死亡病豬。本次疫情持續(xù)20多天，無法控制，遂來河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物疫病診斷中心就診。

2 臨床癥狀

病豬高熱，體溫41.5～42.0℃，精神沉郁，采食量下降或廢絕，呼吸困難，呈明顯的腹式呼吸，眼結(jié)膜潮紅，發(fā)病初期頭部、四肢、腹下出現(xiàn)紫紅色出血斑，后期全身紫紅色，個(gè)別豬有神經(jīng)癥狀、跛行，有急性死亡，死亡豬口、鼻流出淡紅色泡沫狀液體。

3 剖檢病變

剖檢病死豬3頭，淋巴結(jié)腫大、出血，切面有灰白色干酪樣壞死灶；肺臟紫紅色，彌漫性大葉性肺炎，肺間質(zhì)增寬，充滿黃色膠凍樣水腫液（圖1）；胸腔、心包腔有少量淡黃色透明滲出液；心肌腫大，表面有少量出血點(diǎn)；肝臟腫大，質(zhì)硬，暗紅色，有大量灰白色、灰黃色粟粒大小壞死灶，有鮮紅色出血點(diǎn)（圖2）；脾臟腫大、出血，邊緣有少量梗死灶；有2頭皮下水腫，脂肪黃染，有1頭后肢關(guān)節(jié)腫脹，內(nèi)有黏稠、渾濁關(guān)節(jié)液。

圖1 肺間質(zhì)增寬，充滿膠凍樣水腫液

圖2 肝臟大量壞死灶、出血點(diǎn)

4 實(shí)驗(yàn)室檢測

4.1 弓形蟲檢測

4.1.1 弓形蟲體檢測 無菌操作取病豬的肝、脾、肺門淋巴結(jié)等涂片，干燥固定，經(jīng)姬姆薩氏法染色后，低倍鏡觀察，發(fā)現(xiàn)少量半月形的弓形蟲滋養(yǎng)體，胞漿呈淺藍(lán)色，核呈深藍(lán)紫色，偏于蟲體一端，核與尖端之間有顆粒。

4.1.2 弓形蟲血清抗體檢測 采集病豬血清7頭份、同群健康豬血清6頭份，使用中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)的弓形蟲抗體間接血凝檢測試劑進(jìn)行弓形蟲抗體檢測，結(jié)果發(fā)病豬弓形蟲抗體呈陽性6頭，陽性率 86%，同群健康豬弓形蟲抗體呈陽性只有1頭，陽性率17%。

4.2 細(xì)菌分離、鑒定和藥敏試驗(yàn)

4.2.1 細(xì)菌分離培養(yǎng) 無菌操作取病死豬的心血、肝、脾、淋巴結(jié)等組織分別涂抹接種普通營養(yǎng)瓊脂平板、綿羊鮮血營養(yǎng)瓊脂平板，37℃培養(yǎng)，觀察至24 h后，普通營養(yǎng)瓊脂平板上無細(xì)菌生長，鮮血瓊脂平板上形成半透明、表面光滑濕潤、灰白色露滴樣的小菌落，呈明顯的β溶血。挑取典型菌落，涂片，革蘭氏染色鏡檢，可見革蘭氏陽性球菌或球桿菌，散在或成雙，部分呈短鏈狀排列（圖3）。

圖3 豬鏈球菌菌體形態(tài)

4.2.2 細(xì)菌PCR鑒定 參照文獻(xiàn)[3-4]根據(jù)豬鏈球菌gdh基因序列設(shè)計(jì)引物，上游引物：5-GCAGCGTAT TCTGTCAAACG-3′，下游引物：5-CCATGGACAGAT AAAGATGG-3′，PCR擴(kuò)增的產(chǎn)物為689 bp大小的片段，引物由上海生工生物工程公司合成，按照常規(guī)PCR檢測方法進(jìn)行核酸提取和擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物經(jīng)1.0%瓊脂糖凝膠進(jìn)行電泳，擴(kuò)增出了689 bp大小的預(yù)期目的條帶（圖4），證明本次分離到的為鏈球菌。

圖4 鏈球菌PCR擴(kuò)增結(jié)果

4.2.3 細(xì)菌藥敏試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[5]，采用 K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行試驗(yàn)。將分離鑒定好的細(xì)菌接種于綿羊全血瓊脂平皿，涂勻，選取常用的抗生素的藥敏紙片貼于培養(yǎng)基上，于 37℃培養(yǎng) 24 h，測量抑菌圈直徑，根據(jù)抑菌圈的大小判定分離株對藥物的敏感性。結(jié)果表明，對鏈球菌（SS）高度敏感的藥物有：阿莫西林、頭孢氨芐、頭孢噻肟、利福平、頭孢拉定、恩諾沙星 、頭孢噻呋 ；中度敏感藥物：頭孢他啶、氯霉素；耐藥藥物：林可霉素、氟苯尼考、諾氟沙星、紅霉素、磺胺六甲氧嘧啶、復(fù)方新諾明、多西環(huán)素。

4.3 病毒核酸檢測（PCR）

采集發(fā)病豬的肺臟、脾臟、淋巴結(jié)、腦組織等，應(yīng)用常規(guī)PCR方法，進(jìn)行豬瘟病毒、偽狂犬病病毒、藍(lán)耳病病毒的核酸檢測，均為陰性。

5 綜合防治措施

綜合發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢變化和實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果，確診該起疫情為豬弓形蟲和鏈球菌混合感染。

（1）將病豬隔離、單獨(dú)飼養(yǎng)，部分病程較長、病情嚴(yán)重的豬淘汰并實(shí)行嚴(yán)格的無害化處理。清除糞污，采用3%燒堿水溶液對全場地面及用具進(jìn)行徹底消毒，杜絕貓、狗在豬場活動(dòng)，做好滅鼠工作。

（2）考慮到該豬場磺胺類藥已經(jīng)使用7 d（磺胺類藥物連續(xù)使用不得超過7 d），且剛停止使用該藥，根據(jù)鏈球菌藥敏試驗(yàn)結(jié)果，先全群飼料中添加10%阿莫西林預(yù)混劑1 kg/t飼料、10%恩諾沙星預(yù)混劑2 kg/t飼料、扶正解毒散1 kg/t飼料，混勻，連用7 d后停藥，再飼料添加磺胺氯達(dá)嗪1 kg/t飼料、扶正解毒散 1 kg/t飼料，混勻，連用7 d。飲水中添加優(yōu)質(zhì)電解質(zhì)多維1 kg/t、葡萄糖5 kg/t，自由飲用，連用 15 d。

病豬注射頭孢噻呋，按說明書使用，肌肉注射0.1 mg/kg體重，每天1次，連用4次。期間新發(fā)病豬使用磺胺間甲氧嘧啶注射，采用上述措施3 d后，豬群中新發(fā)病例明顯減少，部分病豬精神、食欲等有所好轉(zhuǎn)；1周后豬群基本正常，有零星發(fā)病豬，使用磺胺藥注射后很快治愈，兩周后豬群全部恢復(fù)正常，期間有17頭嚴(yán)重病豬治療無效，死亡。

6 小結(jié)與體會

（1）當(dāng)前豬場弓形蟲病和鏈球菌病都是較為常見的疫病，相關(guān)病例報(bào)道很多，但有關(guān)兩者混合感染的報(bào)道較為少見。本病例通過采用實(shí)驗(yàn)室檢測、加強(qiáng)飼養(yǎng)管理、交替使用對弓形蟲有效的磺胺類藥物和對鏈球菌敏感的藥物，很快控制了疫情，取得了良好的治療效果，說明對本次疫情診斷正確、治療措施得當(dāng)。

（2）弓形蟲病存在發(fā)病快、死亡率高等特點(diǎn)，只有磺胺類藥物對其有效，如能及時(shí)確診、及時(shí)用藥，能很快得到控制[6]。但是，弓形蟲病和鏈球菌病、豬瘟、藍(lán)耳病、豬肺疫等在臨床癥狀上很相似，難以區(qū)分，生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)誤診，不能及時(shí)采取有針對性的措施而貽誤病情，造成較大的傷亡。因此，豬場出現(xiàn)疫情時(shí)，應(yīng)及時(shí)到專業(yè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，盡早確定發(fā)病原因，采取相關(guān)措施。

（3）磺胺類藥物經(jīng)常被豬場用來治療鏈球菌病，但近年來有文獻(xiàn)報(bào)道鏈球菌已經(jīng)對磺胺類藥物產(chǎn)生了耐藥性[7-9]。本次病例藥敏結(jié)果表明：該場分離的鏈球菌對復(fù)方新諾明、磺胺六甲氧嘧啶均為耐藥，這也是本次病例在發(fā)病期間使用過磺胺類藥物，卻未能控制疫情的原因。伴隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展，抗菌藥物濫用導(dǎo)致細(xì)菌的耐藥性越來越嚴(yán)重，因此豬場應(yīng)在發(fā)生疫情時(shí)，不僅要及時(shí)確診病原，還要在有細(xì)菌性病原感染時(shí)，進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，篩選出對本場菌株敏感的藥物，正確添加，才能及時(shí)控制疫情，減少損失。

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