多囊卵巢綜合征不孕患者卵泡液同型半胱氨酸水平檢測及與葡萄糖、雌二醇水平的相關性探討

黃娟娟， 張利平， 張 娟， 李 華， 高 霞， 曹 英

（1.延安大學附屬醫院產科，陜西 延安 716000；2.寶雞市婦幼保健院產科，陜西 寶雞 721000）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是常見的女性內分泌疾病之一，在12～45歲的女性中發病率為5%～10%[1]，是導致女性不孕的主要因素。有研究認為，胰島素抵抗和同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）水平升高可能是PCOS患者發生動脈粥樣硬化等心血管疾病的危險因素[2]。Hcy是細胞和組織生長的必需氨基酸，且是蛋氨酸降解的中間產物。血清Hcy水平受多種因素影響，包括年齡、性別、營養、吸煙、慢性炎癥、身體活動和胰島素等[3]。卵泡液中的Hcy水平可能反映了全身的Hcy代謝情況，同時也為卵子的發育提供了重要的微環境[4]。現已證實在接受輔助生殖技術治療的PCOS患者中，血清Hcy水平與卵子、胚胎的質量呈負相關[5]。PCOS患者代謝異常導致血清Hcy水平的變化可能會影響卵泡液中的Hcy水平，從而影響PCOS患者卵子和胚胎的質量。為此，本研究檢測了行體外受精（in νitro fertilization，IVF）治療的PCOS患者的卵泡液Hcy水平，并分析其與卵泡液中葡萄糖（glucose，Glu）、雌二醇（estradiol，E2）水平的關系。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2014年3月—2015年9月在延安大學附屬醫院生殖醫學中心及寶雞市婦幼保健院生殖醫學中心行IVF治療的不孕患者100例，年齡20～42歲。診斷標準：夫妻可完成正常的性生活，且未避孕未育1年以上。其中有50例確診為PCOS患者，入組標準：B超監測每側卵巢有＞10個直徑2～8 mm的卵泡且卵巢間質密度增強，月經稀發（月經周期＞45 d）或閉經，睪酮＞2.2 nmol/L或黃體生成素（luteotropic hormone，LH）/卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）比值≥2；排除患有其他系統性疾病的患者，如全身性炎性疾病、先天性腎上腺皮質增生癥、高泌乳素血癥及甲狀腺疾病等，排除血性的卵泡液。另50例不孕婦女為非PCOS患者，不孕原因主要為男方因素或輸卵管因素。入組標準：月經規律，月經初期卵泡數＜10個且大小正常；基礎激素水平正常。男性不育的診斷參考世界衛生組織（World Health Organization，WHO）2010年標準。所有對象近3個月未服用激素類藥物及葉酸、B族維生素等可能影響Hcy代謝的藥物，且無吸煙、吸毒及酗酒史。該項研究經延安大學附屬醫院及寶雞市婦幼保健院倫理委員會批準，所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 促排卵方案 患者在前一月經周期的20 d左右（黃體中期）注射促性腺激素釋放激素激動劑（商品名為達必佳，0.1 mg/d）。下一個月經周期第3天檢測血清激素水平，當FSH＜5 IU/ L、LH＜5 IU/L、E2＜50 pg/mL、子宮內膜＜5 mm時，給予重組人促卵泡激素或尿促卵泡素（75 U/ 支）進行控制性卵巢刺激。當3個及以上的卵泡直徑達到18 mm時，檢測血清性激素水平，當日20：00—21：00注射5 000～10 000 IU人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin，HCG）。注射HCG 36 h后在在陰道超聲下取卵。

1.2.2 收集卵泡液 9：00—11：00收集患者撿卵后的卵泡液。通過肉眼觀察判斷是否存在血液污染，丟棄渾濁或著色樣本。收集的卵泡液在4 ℃下3 000×g離心15 min，除去細胞成分，隨即-80 ℃凍存，后續進行生化指標和激素檢測。卵泡液從收集到凍存的時間間隔不超過30 min。

1.2.3 各項指標的檢測 Glu采用己糖激酶法檢測。E2和胰島素采用ROCHE MODULAR E170全自動化學發光儀（瑞士羅氏公司）及配套試劑（電化學發光法）檢測。Hcy采用循環酶法，試劑盒由北京九強公司生產，檢測儀器為OLYMPUS AUS 5400全自動生化分析儀（日本奧林巴斯公司）。

1.3 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件進行統計分析。呈正態分布的數據以x± s表示，組間比較采用t檢驗。采用Pearson相關分析評估卵泡液Hcy水平與生殖指標的相關性。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PCOS組和非PCOS組一般資料比較

PCOS組年齡、不孕年限、體重指數、原發性不孕比例、繼發性不孕比例、不孕因素、促性腺激素與非PCOS組比較差異均無統計學意義（P＞0.05），而注射HCG 當日總卵泡數、直徑≥14 mm的卵泡數及平均直徑、直徑＜14 mm的卵泡數、血清E2水平2個組之間差異均有統計學意義（P＜0.05）。

2.2 PCOS組和非PCOS組卵泡液各項指標比較

PCOS組卵泡液Hcy、胰島素水平均明顯高于非PCOS組（P＜0.05），而卵泡液Glu、E2水平2個組之間差異均無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 PCOS組和非PCOS組臨床結局的比較

非PCOS組獲卵數明顯低于PCOS組（P＜0.05），而優質卵率、優質胚胎率及臨床妊娠率均明顯高于PCOS組（P＜0.05）。2個組之間受精率差異無統計學意義（P＞0.05）。見表2。

2.4 卵泡液Hcy水平與生殖指標的相關性分析

Pearson相關分析顯示，PCOS及非PCOS患者卵泡液Hcy水平與體重指數、年齡、獲卵數及卵泡液E2、Glu水平均無相關性（P＞0.05）。見表3。

表1 PCOS組和非PCOS組卵泡液各項指標的比較 （x±s）

表2 PCOS組和非PCOS組臨床臨床結局的比較

表3 PCOS及非PCOS患者卵泡液Hcy水平與生殖指標的相關性分析

3 討論

Hcy是細胞和組織生長必需的氨基酸，同時提供了卵子發育非常重要的微環境。外周循環的環境變化可能會影響Hcy水平。因此，分析Hcy水平有利于了解血清代謝變化的信息。目前，已證實接受輔助生殖技術治療的PCOS患者Hcy水平與卵子及胚胎質量呈負相關[6]，但在接受輔助生殖技術治療的PCOS患者中還未見有卵泡液Hcy與卵泡液E2相關性的報道。

本研究結果顯示，PCOS患者卵泡液Hcy水平明顯高于非PCOS患者（P＜0.05）。有研究結果顯示PCOS患者血漿Hcy水平明顯升高[7]。本研究還發現PCOS患者卵泡液Hcy水平與體重指數、年齡、獲卵數及卵泡液E2、胰島素、Glu水平均無相關性（P＞0.05），提示PCOS患者卵泡液Hcy水平不受這些因素的影響。因此，PCOS患者Hcy水平可能與胰島素抵抗和相對高雄激素血癥有關[8]，但還需要更多的研究來揭示PCOS患者食物或體質效應及高遺傳因素與Hcy的關系。

本研究結果顯示PCOS患者的總平均獲卵數顯著高于非PCOS患者（P＜0.003），但非PCOS患者的臨床妊娠率（50%）明顯高于PCOS患者（33%）。多數研究認為PCOS患者的卵子和胚胎質量較差，受精率低，從而導致妊娠率降低[9]，但有些研究則認為受精率不受影響[10]。在接受輔助生殖技術治療的婦女中，卵泡液Hcy水平與卵子及胚胎質量呈顯著負相關[11]。由此可見，卵泡液Hcy水平可能會影響PCOS患者的妊娠結局。本研究結果還顯示PCOS組和非PCOS組之間卵泡液E2水平差異無統計學意義（P＞0.05），與文獻報道[12]一致。有研究發現在IVF/胚胎移植周期中，PCOS患者與正常排卵的不孕婦女之間卵泡液E2水平差異無統計學意義（P＞0.05）[13]。VOLPE等[14]發現PCOS患者與正常排卵的不孕婦女之間卵泡液E2水平無明顯差異。因此，促性腺激素刺激的PCOS患者卵巢存在正常的芳香化酶活性的固有潛能，PCOS并不是由遺傳性卵巢芳香化酶活性缺陷導致的。

綜上所述，盡管PCOS和非PCOS患者的卵泡液Glu和E2水平是恒定的，但PCOS患者卵泡液Hcy水平明顯升高。

[1]蘇丹，張晉峰，侯麗輝，等. 多囊卵巢綜合征治療研究進展[J]. 中國中西醫結合雜志，2013，33（2）：286-288.

[2]FAUSER B C，TARLATZIS B C，REBAR R W，et al.Consensus on women's health aspects of polycystic ovary syndrome （PCOS）：the Amsterdam ESHRE/ASRM-Sponsored 3rd PCOS Consensus Workshop Group[J]. Fertil Steril，2012，97（1）：28-38. e25.

[3]董燕燕，陳光亮. 高同型半胱氨酸血癥危害及致病機制研究進展[J]. 中國藥理學通報，2014，30（9）：1205-1208.

[4]黃影，王藹明，趙勇，等. 多囊卵巢綜合征患者促甲狀腺激素對同型半胱氨酸水平的影響[J]. 中國婦幼保健，2014，29（9）：1332-1336.

[5]OCAL P，ERSOYLU B，CEPNI I. The association between homocysteine in the follicular fluid with embryo quality and pregnancy rate in assisted reproductive techniques[J]. J Assist Reprod Genet，2012，29（4）：299-304.

[6]孔雯，肖西悅，曾天舒，等. 二甲雙胍對多囊卵巢綜合征患者血清同型半胱氨酸水平影響的系統評價[J]. 華中科技大學學報 （醫學版），2015，59（5）：540-544.

[7]邢艷霞，張美蘭，于翰，等. 非肥胖多囊卵巢綜合征患者血漿同型半胱氨酸水平與頸動脈內膜中層厚度的關系[J]. 中國藥物與臨床，2013，13（8）：1073-1074.

[8]WIJEYARATNE C N，NIRANTHARAKUMAR K，BALEN A H，et al. Plasma homocysteine in polycystic ovary syndrome：does it correlate with insulin resistance and ethnicity[J]. Clin Endocrinol（Oxf），2004，60（5）：560-567.

[9]YILMAZ N，INAL H A，GORKEM U，et al.Follicular fluid total antioxidant capacity levels in PCOS[J]. J Obstet Gynaecol，2016，36（5）：654-657.

[10]CHANG E M，HAN J E，SEOK H H，et al. Insulin resistance does not affect early embryo development but lowers implantation rate in in νitro maturationin νitro fertilization-embryo transfer cycle[J]. Clin Endocrinol（Oxf），2013，79（1）：93-99.

[11]黃影，王藹明，趙勇，等. 多囊卵巢綜合征與高同型半胱氨酸血癥相關性的研究進展[J]. 生殖醫學雜志，2013，22（8）：626-632.

[12]ORIEF Y I，KARKOR T A E，SALEH H A，et al.Comparison between steroid expression in serum and follicular fluid in polycystic ovary patients and unexplained infertility patients undergoing assisted reproductive techniques[J]. Middle East Fert Soc J，2014，19（1）：57-63.

[13]仉燕. 卵泡液和胚胎培養液LIF與IVF--ET結局的關系[D]. 上海：第二軍醫大學，2014.

[14]VOLPE A，COUKOS G，D'AMBROGIO G，et al.Follicular fluid steroid and epidermal growth factor content，and in νitro estrogen release by granulosaluteal cells from patients with polycystic ovaries in an IVF/ET program[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol，1991，42（3）：195-199.