中藥祛斑合劑對衰老模型小鼠皮膚相關指標的影響

趙文斌+歐陽曉勇+鄭喜

摘要：目的觀察中藥祛斑合劑對D-半乳糖所致衰老模型小鼠皮膚相關指標的影響。方法健康昆明種小鼠60只，隨機分為正常對照組、衰老模型組、祛斑合劑高、中、低劑量（12.0.6.0，3.0 mL/kg）組和維生素E組（陽性對照組），每組10只。衰老模型組、制劑高、中、低劑量組和維生素E組，頸背部皮下注射5%D-半乳糖連續6w，建立小鼠亞急性衰老模型。給藥組同時灌胃給予祛斑合劑和維生素E，正常對照組和衰老模型組給予等體積純凈水。檢測皮膚組織勻漿中超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）、脂褐質（Lpf）、羥脯氨酸（Hyp）含量及皮膚水分含量。結果祛斑合劑可提高皮膚SOD活力，提高Hyp含量及皮膚水分含量；降低皮膚MDA及Lpf含量。結論祛斑合劑具有抗D-半乳糖所致小鼠皮膚衰老的作用。

關鍵詞：中藥祛斑合劑；抗皮膚衰老；抗氧化；動物實驗

中圖分類號：R85.5文獻標志碼：B文章編號：1007-2349（2018）01-0075-02

皮膚是人體最大的器官，是美容的主要對象。皮膚老化常表現為皮膚干燥、粗糙、脫屑、色斑、松弛、皺紋、皮膚萎縮、血管突顯、敏感性和脆性增加等[1]。它不僅影響美觀，還與脂溢性角化、基底細胞癌等多種皮膚病有著病因學的聯系。因此預防和延緩皮膚衰老一直是近些年醫學科學研究的熱點之一。本院皮膚科已故專家（國家級名老中醫學術經驗繼承指導老師、云南省名老中醫）劉復興教授經驗方中藥祛斑合劑（院內制劑），多年來臨床應用于防治黃褐斑、皮膚老化，取得較好療效。筆者采用中藥祛斑合劑對抗小鼠皮膚衰老做了實驗研究，現將結果報道如下。

1材料與方法

1.1實驗動物及材料清潔級健康昆明種小鼠，體重18-22 g，雌雄各半，購自昆明醫科大學實驗動物中心，中藥祛斑合劑由云南省中醫醫院制劑中心提供；超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、脂褐質Lpf試劑盒、丙二醛（MDA）試劑盒、羥脯氨酸（Hyp）試劑盒（武漢博士德生物工程有限公司）；D-半乳糖（上海藍季科技發展有限公司）；維生素E（浙江醫藥有限公司）；其余試劑為市售分析純。 751光柵分光光度計，RF.540熒光分光光度計，MEGAFUGE 1.0R高速臺式離心機。

1.2實驗方法[2-3]

1.2.1動物模型制備、分組、給藥及取材選擇清潔級健康昆明種小鼠60只，體重（20±2）g，雌雄不限，隨機分成6組，每組10只，雌雄分籠飼養，飼養溫度為18～22℃，相對濕度為45%～55%，規律光照，自由飲食，適應性飼養1 W后開始實驗。隨機分為正常對照組、衰老模型組、中藥祛斑合劑高、中、低劑量組和維生素E組（陽性對照組），每組10只，分籠飼養。衰老模型組、制劑高、中、低劑量組和維生素E組，每日經頸背部皮下注射5%D-半乳糖25 mL/kg，建立小鼠亞急性衰老模型[4]，正常對照組每日經頸背部皮下注射等體積的生理鹽水。同時祛斑合劑各組每日灌胃給予祛斑合劑（高12.0、中6.0、低3.0 mL/kg）；維生素E組每日灌胃給予維生素E 500 mg/kg；正常對照組和衰老模型組每日灌胃給予等體積純凈水，各組均連續給藥6 W。第7周處死動物前1 d，所有動物兩肩胛至兩髂骨之間背部皮膚以10%Na2S溶液對稱脫毛（面積為3 cm×3 cm）；第2天處死動物，取背部正中皮膚0.5 cm×0.5 cm大小，留取1 g待測含水量用，其余迅速冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿及測定皮膚羥脯氨酸等指標之用，各指標所選取材部位相同。實驗過程中，每5 d各鼠稱重記錄1次，每日觀察小鼠的皮毛色澤、飲食、飲水、大小便、精神活動情況等。

1.2.210%皮膚勻漿的制備取脫毛皮膚組織0.5 g，經預冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其他結締組織，濾紙拭干，稱重，量筒量取該組織塊9倍質量預冷生理鹽水，用勻漿機制成10%組織勻漿（在低溫環境中使組織細胞完全破碎，顯微鏡下觀察內容物全部游離在液相中）。

1.2.3各項指標的測定皮膚勻漿中Lpf，SOD，MDA.Hyp含量或活力，均根據測試盒所附方法、步驟測定。

1.2.4皮膚中水分含量的測定采用烘干法取1 g皮膚，精密稱取濕重后置烘箱中，于80℃烘干12 h，稱其干重，計算皮膚含水量。

2結果

中藥祛斑合劑能提高衰老模型小鼠皮膚超氧化物歧化酶（SOD）活力及羥脯氨酸（Hyp）含量和皮膚含水量；降低衰老模型小鼠皮膚組織中脂褐質（Lpf）、丙二醛（MDA）含量，且呈現劑量依賴性。提示本品具有延緩皮膚衰老作用（表1）。

3討論

皮膚的衰老是一個復雜的生物學過程，對此有多種解釋，如自由基學說、交聯學說、遺傳學說、免疫學說等，其中自由基學說比較被認同。機體在新陳代謝過程中，不斷產生自由基，自由基攻擊生物大分子，如脂質、核酸、多聚不飽和脂肪酸等，使其交聯或斷裂，導致細胞結構和功能的破壞，形成過氧化脂質，后者與膜脂和膜蛋白聚合，交聯形成脂褐質沉積于組織中，在皮膚上形成色斑；自由基堆積還可使具有合成膠原能力的成纖維細胞受損，細胞內羥化酶失去羥化功能，羥脯氨酸的生成減少，膠原蛋白合成減少，導致皮膚皺紋形成、皮膚松弛[5-6]。

SOD是體內最重要的自由基清除劑，是唯一能特異性清除衰老啟動因子O2-的抗氧化酶，提高SOD活性可抑制脂褐質的沉積[7]。MDA的水平可反應活性氧的損傷效應[8]。皮膚組織中水分含量以及SOD活力和MDA、Hyp、Lpf含量是判定受試動物皮膚衰老程度的重要指標。研究已證明D-半乳糖誘導的亞急性衰老模型是可靠的衰老實驗動物模型。因此，本課題采用D-半乳糖造成小鼠皮膚亞急性衰老模型[9]。

本實驗結果表明，中藥祛斑合劑能提高衰老小鼠皮膚中水分含量、羥脯氨酸（Hyp）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活力，降低衰老小鼠皮膚組織中脂褐質（Lpf）、丙二醛（MDA）含量。表明中藥祛斑合劑具有一定的延緩皮膚衰老的功效。其作用機制可能是通過提高SOD活性，增強機體抗氧化能力即增強清除自由基的能力，進而抑制自由基反應，從而抑制脂質過氧化產物MDA以及Lpf的生成和積聚，減輕了對成纖維細胞和膠原蛋白的損害。endprint

中醫理論認為[10-11]皮膚衰老以及整個機體衰老的直接原因是五臟虛損、氣血失調所致的正氣不足。正氣虛則皮膚不能得到充分的濡養滋潤，防御能力下降，易受外邪的侵襲。且外邪侵襲日久，邪氣盛則正氣虛，可見臟腑功能低下，氣血乏源，脈絡瘀阻，肌膚甲錯，老相叢生。故正虛邪實是皮膚衰老的主要病理機制。因此，中醫延緩皮膚衰老的主要特點就是從五臟氣血論治，即側重于通過滋補五臟、調理氣血、疏通經絡等措施來延緩皮膚衰老。

本院皮膚科已故專家劉復興教授是國家級名老中醫學術經驗繼承指導老師、云南省名老中醫，學術思想精深，臨床經驗豐富，擅于皮膚疾病的診治，我院根據其臨床經驗研制的院內制劑祛斑合劑（主要成分：女貞子、旱蓮草、玉竹、白芍、丹參、柴胡、玫瑰花等），具有滋補肝腎、疏肝解郁、化瘀祛斑之功效。多年來臨床應用于防治黃褐斑、皮膚老化，取得較好療效。本研究通過動物實驗初步揭示其延緩皮膚衰老的作用機制，為臨床應用提供實驗依據。

參考文獻：

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（收稿日期：2017-10-16）endprint