葛黃顆粒乙醇滲漉工藝研究

陳玉蘭+魏嵋+蒲清榮

摘要：目的優選葛黃顆粒乙醇滲漉工藝。方法以乙醇提取物中有效成分鳶尾苷含量為指標，通過單因素試驗比較乙醇滲漉法、乙醇超聲法和乙醇回流法，確定葛黃顆粒中醇提藥材的提取方法；運用高效液相色譜法，使用正交設計法，優選葛黃顆粒乙醇提取工藝。結果采用乙醇滲漉法提取，最佳工藝為：8倍量60%乙醇，浸泡12h，流速為1mL·min-1。結論采用該滲漉工藝提取，葛黃顆粒乙醇提取物中鳶尾苷的收率較高且穩定。

關鍵詞：滲漉；正交設計；鳶尾苷；高效液相色譜法；葛黃顆粒

中圖分類號：R283文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2018）01-0069-03

【Abstract】Objective： To optimize the process of ethanol percolation in Gehuang Granule. Methods： By taking the content of tectoridin in the ethanol extract as an index and by single factor test， ethanol percolation method， ethanol ultrasonic method and ethanol reflux method were compared to determine the extraction method of alcohol extraction medicinal material in Gezhong granule. By using HPLC and orthogonal design method， the ethanol extraction process of Gezhong Granule was optimized . Results： The best extraction process was ethanol percolation method. The optimum conditions were as follows， 8 times the amount of 60% ethanol， soaking for 12 hours， with 1mL·min-1 of flow rate. Conclusion： According to the percolation process， the yield of tectoridin of ethanol percolation in Gehuang Granule is high and stable.

【Key words】percolation， orthogonal design， tectoridin， HPLC， Gehuang Granules

葛黃顆粒是本院自制的復方中藥制劑，具有醒酒解毒、健脾疏肝、清熱利濕之功效。處方中有葛花、丹參，主要成分為鳶尾苷、丹參酮ⅡA等脂溶性成分。現代藥理研究表明，葛花中所含的鳶尾苷等異黃酮類化合物具有解酒保肝的作用，可使血中乙醇、乙醛濃度下降，以及降低血尿素氮的升高，從而起到解酒作用。鳶尾苷等異黃酮類成分易溶于乙醇。為最大限度地提取方中有效成分，充分發揮解酒、保肝的功效，本實驗以鳶尾苷含量為指標，通過單因素試驗比較乙醇滲漉法、乙醇超聲法和乙醇回流法對葛黃顆粒中有效成分含量的影響，篩選最佳提取方法，并通過正交設計優選最佳乙醇滲漉工藝。

1材料

儀器與材料：HH—S8水浴鍋；JA203H天平；AUW120D精密天平；JPCT0328超聲機；LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司），SPD-20A紫外可見檢測器，LCsolution色譜工作站。鳶尾苷對照品（中國食品藥品檢定研究院提供，供鑒別用，批號：111632-200602，供含量測定用）。葛花、丹參均購于瀘州市寶光中藥飲片公司，經西南醫科大學莊誠教授鑒定，均符合《中國藥典》2015年版相關項下要求。乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1色譜條件及系統適用性試驗色譜柱：Wonda Sil C18-WR（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.2%磷酸水（20∶80）；流速：1 mL·min-1，檢測波長：265 nm，柱溫：40℃，理論塔板數按鳶尾苷計算應不低于4000。

2.2對照品溶液的制備精密稱取鳶尾苷對照品1.24 mg，置10 mL棕色量瓶中，加入甲醇超聲溶解并定容，即得對照品溶液。

2.3標準曲線的制備依次精密吸取鳶尾苷對照品溶液2.5、5、10、15、20 μL注入液相色譜儀，測定。以峰面積（A）為縱坐標（Y），進樣量（mg）為橫坐標（X），繪制標準曲線，得到回歸方程：Y=4537.6X-5486，r=0.9998（n=5）。見表1和圖1～3。

2.4提取方法比較取葛花、丹參粉碎成粗顆粒（過20目篩），各精密稱取單倍處方量3份，混勻。

2.4.1乙醇滲漉法取1份粗顆粒，加適量60%乙醇浸潤30 min，取脫脂棉一團墊在滲漉筒底部鋪平，裝筒，加入20倍量60%乙醇，加蓋密閉24 h，以1～3 mL·min-1流速進行滲漉，收集滲漉液，減壓濃縮至適量，恒溫干燥，得提取物1。

2.4.2乙醇超聲法取1份粗顆粒，置燒瓶中，加入20倍量60%乙醇浸泡30 min，超聲提取2次，每次1 h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至適量，恒溫干燥，得提取物2。

2.4.3乙醇回流法取1份粗顆粒，置磨口燒瓶中，加20倍量60%乙醇浸泡30 min，加熱回流提取2次，每次1 h，放冷，濾過，收集濾液減壓濃縮至適量，恒溫干燥，得提取物3。

2.5供試品溶液的制備分別取提取物各0.25 g，精密稱定，加入75%乙醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲提取40 min，取出，放冷，補足重量，濾過，取續濾液，過0.45 μm濾膜，濾過，即得。endprint

2.6提取方法比較結果按2.1項下色譜條件測定含量，結果發現鳶尾苷提取量依次為15.10，13.22，10.06 mg·g-1，即乙醇滲漉法提取的鳶尾苷含量最高。

2.7正交試驗樣品的制備選擇乙醇濃度、浸泡時間、乙醇用量、流速為因素，選用L9（34）因素水平表安排正交試驗。各因素水平見表2。按單倍量處方藥材的配比，準確稱取9份樣品，按表2中9種工藝條件組合進行滲漉提取，提取液濃縮成稠膏備用。

2.9方法學考察

2.9.1精密度試驗精密吸取對照品溶液，連續重復進樣5次，每次進樣10 μL進行測定，結果RSD為1.59%（n=5）。表明該方法、該儀器測定鳶尾苷精密度符合要求。

2.9.2穩定性試驗精密吸取對照品溶液10 μL，分別在0，2，4，8，10h進樣，測定各峰面積，其積分面積RSD為0.58%（n=5）。表明鳶尾苷用該方法在該儀器上10 h內測定結果較穩定，符合要求。

2.9.3重現性試驗取1號樣品干浸膏，依法重復提取并測定5次，結果1號浸膏的含量平均值為16.0304 mg·g-1，RSD為2.24%（n=5），表明該方法重現性試驗符合要求。

2.9.4 加樣回收率試驗 精密稱取1號樣品0.075g共6份，分別精密加入一定量的鳶尾苷對照品溶液（精密稱取鳶尾苷對照品10.20 mg于25 mL量瓶中，加75%乙醇超聲溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為0.408 mg·mL-1的對照品溶液）3 mL至樣品中，再精密吸取22 mL 75%乙醇，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，各取10 μL進樣測定，計算加樣回收率。結果見表3。鳶尾苷平均回收率為102.53 %，RSD為2.55 %，表明本方法準確可靠。

2.10樣品的測定取正交試驗干浸膏，按2.5項下制備供試品溶液。按上述色譜條件，進樣10μL，測定峰面積，計算含量。根據各因素對提取工藝影響的貢獻大小給予不同的權重系數：干浸膏得率為20%，鳶尾苷含量為80%，再進行加權求和：綜合評分=（干浸膏收率/干浸膏收率最大值）×20%+（鳶尾苷含量/鳶尾苷含量最大值）*80%。正交試驗結果見表4及表5。

由表4和表5可以看出因素A，即乙醇濃度對鳶尾苷含量有顯著影響（P<0.05），影響因素大小順序為 A>D>B>C，及乙醇濃度>流速>浸泡時間>乙醇用量。優選的工藝為 A2B1C3D1。乙醇用量影響不大，為節約成本，乙醇用量選擇為8倍量，即最佳提取工藝為：處方藥材加8 倍量60%乙醇，浸泡 12h，滲漉速度為 1 mL·min-1。

2.12驗證試驗由于葛黃顆粒醇提工藝的最佳方案沒有在正交試驗因素表內，因此課題組對最佳醇提工藝進行了6次驗證。結果見表6。根據藥材含量，計算鳶尾苷提取率為：71.4119%。

3討論

葛黃解酒顆粒處方來源于名老中醫經驗方，該制劑藥味較多，葛花、丹參的主要有效成分為醇溶性成分，為配合工業化生產的需要，故采用乙醇提取。本文通過粗略比較3種不同的乙醇提取方法，結果滲漉法提取工藝既具有較高的提取率，又能為大生產節約生產成本。

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（收稿日期：2017-10-10）endprint