羊水細胞培養污染危害及避免污染的策略

馬 涔

（蘇州大學附屬第一醫院，江蘇 蘇州 215006）

產檢前的染色體疾病篩查的方法是羊水細胞培養和染色體制備，對于妊娠安全的保證非常關鍵。羊水檢查屬于創傷取樣，標本制備帶有難度，孕婦難以接受二次羊水穿刺，因此羊水細胞的一次性成功培養非常重要[1]。羊水細胞培養具有操作難度大、技術要求高、培養時間長、易被污染等特點，綜合性要求高，無菌環境下的培養至關緊要。本文分析了羊水細胞培養污染損害的原因和應對方法，提出避免污染的措施，為臨床檢驗提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取我院在2016年3月～2018年3月進行產前檢查的高危孕婦180例進行檢驗分析，產婦中經產婦50例，初產婦130例，產婦年齡在26～32歲之間，平均（30.5±0.2）歲；孕周在17～25周之間，平均（20.4±0.6）周。產婦的產前診斷指證如下：高風險妊娠、不良生育史、高齡妊娠、B超異常、夫妻中任何一方為染色體平衡易位攜帶者等。

1.2 檢驗方法

1.2.1 實驗室材料

羊水培養基、15mL一次性無菌離心管、25 mL方形培養瓶、CO2培養箱等。

1.2.2 羊水采集

孕婦取仰臥位，在B超引導下進行定位，用無菌注射器抽取20ml羊水，分別注入一次性無菌離心管中，10 ml/根。

1.2.3 接種培養

將需要送檢的羊水細胞進行離心操作，轉速為1500r/min，離心后放置在超凈臺上進行無菌處理，去掉上清液，每個離心管中留取1ml的沉淀細胞[2]。在培養瓶中分裝4ml羊水培養基，將沉淀細胞接種在培養瓶中，放置在CO2培養箱中培養，溫度設置為37℃。培養7d后取出并在顯微鏡下觀察，傳代培養后及時更換新鮮培養液4 mL，繼續培養至收獲。

1.3 污染后處理方法

羊水污染通常分為細菌污染和霉菌污染。細菌污染易被發現，污染速度較快，表現為培養基活捉，PH值變化，明顯影響到正常細胞的生長。發現細菌污染后，取少量培養液進行涂片染色檢查，證實菌種后加入適量的抗生素。常見的細菌污染為革蘭陽性菌，可進行取樣細菌培養和藥敏試驗。羊水接種后出現污染可應用大劑量廣譜抗生素進行抗菌，若12h培養基渾濁未加重可再加入一次。若連續加入3次后抗菌效果不明顯則要立即更換抗生素，發現有細胞貼壁時更換新鮮培養基，同樣加入抗生素。

2 結 果

本組羊水細胞培養180例中，共成功收獲179例，僅有1例由于細菌污染挽救失敗，培養成功率為99.44%；本次培養收獲時間為（9.2±0.6）d。本次檢驗中被污染的羊水細胞有10例20瓶，均為同批樣本，細菌污染，污染細菌為革蘭陽性菌，成堆出現。發現羊水細胞污染后立即更換培養液，并加入青鏈霉素進行大劑量沖擊處理，污染被顯著控制。僅有1例羊水細胞經過多次換液后仍生長不良，未達到培養要求。取得孕婦理解后再次抽樣檢驗，培養成功。

3 討 論

羊水細胞培養從采集到收獲需要較長的培養過程，涉及到較多的環節，任何一個環節均可能造成羊水細胞或培養液被污染。羊水細胞的采集帶有創傷性，培養的細胞一旦被污染后果嚴重，輕則導致培養的細胞被廢棄，嚴重可污染培養箱內的其他標本甚至實驗室環境，嚴重影響產前檢查和分析工作。發現羊水細胞污染后，首先要進行抗生素沖擊挽救，避免再次采集檢驗。需要注意的是，抗生素雖然能夠抗菌，同時也會影響羊水細胞的生長，加之細菌的耐藥性等，因此要慎重選擇抗生素和沖擊劑量。

為了提升羊水細胞培養成功率，降低污染風險，本次研究中提出以下防范策略，可有效應對污染。首先，要營造無菌實驗室環境，從源頭杜絕污染。導致細菌污染的原因有：實驗室不干凈、操作不規范、超凈臺有菌、培養基不合格或其他器具不合格等。檢驗人員要不斷總結操作失誤的原因，建立規范、完善的檢驗制度，確保檢驗的標準、有序進行，降低污染風險。其次是高標準的環境維護。羊水細胞培養需要較多的無菌培養設備，如超凈臺、倒置顯微鏡、培養箱和離心機等，實驗技術人員需要進行高標準的檢驗環境維護，并從正規途徑購買實驗室產品。其三是遵循無菌檢驗操作程序，包含試驗前后的消毒和試驗中的無菌處理等，檢驗人員的無菌操作直接影響檢驗結果，也是導致污染的一個重要因素。實驗室檢驗師要提升自身檢驗責任感和操作技術，嚴格遵守操作流程，確保檢驗過程中的無菌操作。最后，采用雙線獨立平衡培養體系來降低污染風險[3]，詳細記錄培養過程。

綜上，羊水細胞培養污染危害較為嚴重，可采用抗生素沖擊等方式進行挽救，建立規范的檢驗制度，規范無菌檢驗流程，雙線培養等方式避免細菌污染，提高羊水細胞培養成功率。