干擾素釋放酶聯(lián)免疫法（TB-IGRA）與蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的方法比較

任麗萍

（太原市第四人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，山西 太原 030053）

目前，臨床上對(duì)結(jié)核分枝桿菌采用干擾素釋放酶聯(lián)免疫法（TB-IGRA）與蛋白芯片法進(jìn)行檢測(cè)，詳細(xì)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院收治的80例確診為結(jié)核病的患者進(jìn)行分析，男性為51例，女性為29例，年齡在19～62歲，平均年齡為（38.2±10.2）歲，病程為1個(gè)月～5年，平均病程為（1.6±0.5）年，35例為肺結(jié)核，45例為肺外結(jié)核，排除原發(fā)性免疫缺陷性疾病、檢測(cè)前接受放化療以及免疫抑制藥物的患者，同時(shí)還有合并糖尿病的患者。采集患者外周血進(jìn)行TB-IGRA以及蛋白芯片法檢測(cè)。

1.2 方法

干擾素釋放酶聯(lián)免疫法（TB-IGRA）：采集患者4ml靜脈血進(jìn)行肝素鋰抗凝，在2h內(nèi)將其分裝在對(duì)照培養(yǎng)管（N）、測(cè)試培養(yǎng)管（T）以及陰性對(duì)照培養(yǎng)管（P）中，在37度恒溫條件下培養(yǎng)（22±1）h，在3500r/min轉(zhuǎn)速下離心10min，取出血漿進(jìn)行ELISA檢測(cè)。采用酶標(biāo)儀對(duì)吸光度（A值）進(jìn)行檢測(cè)，其陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為T-N≥14。

蛋白芯片法：清晨空腹情況下采集患者靜脈血，立即將血清分離。在芯片上做編號(hào)進(jìn)行標(biāo)記，在芯片盒窗口滴加4滴試劑A，完全浸濕膜表面，在室溫在放置1min，加入待檢血清100μl。血清完全滲入后依次滴加6滴試劑B、C、D，反應(yīng)結(jié)束0.5h內(nèi)觀察結(jié)果。對(duì)抗結(jié)核菌的特異性細(xì)胞壁脂多糖LAM抗體、38kD抗體以及16kD抗體進(jìn)行測(cè)定，若其中一種為陽(yáng)性則測(cè)定抗結(jié)核分枝桿菌抗體為陽(yáng)性。

1.3 評(píng)價(jià)指標(biāo)

觀察兩組患者的特異度、靈敏性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以及Youden指數(shù)并對(duì)比分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用%表示，進(jìn)行x2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

TB-IGRA法測(cè)定結(jié)核分枝桿菌的特異度為95.00%，靈敏度為91.25%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為97.50%，陰性預(yù)測(cè)值為76.25%，Youden指數(shù)為85.1，蛋白芯片法測(cè)定結(jié)核分枝桿菌的特異度為91.25%，靈敏度為35.00%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為90.00%，陰性預(yù)測(cè)值為28.75%，Youden指數(shù)為24.6，兩種方法的特異度之間差異性不明顯，（P＞0.05）,TB-IGRA法的靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以及Youden指數(shù)顯著優(yōu)于蛋白芯片法，存在明顯差異性，（P＜0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討 論

結(jié)核病近年來在我國(guó)具有較高的發(fā)病率，不利于患者的疾病診斷。結(jié)核分枝桿菌又被稱為結(jié)核桿菌，是結(jié)核病的重要病原菌，其可對(duì)全身器官造成侵犯，其中最常見的是肺結(jié)核。結(jié)核病仍是一種重要的傳染病，嚴(yán)重影響患者的身體健康，危害社會(huì)安定和諧。結(jié)核分枝桿菌為細(xì)長(zhǎng)略帶彎曲的桿菌，大小1～4X0.4um。結(jié)核分枝桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素。其致病性可能與細(xì)菌在組織細(xì)胞內(nèi)大量繁殖引起的炎癥，菌體成分和代謝物質(zhì)的毒性以及機(jī)體對(duì)菌體成分產(chǎn)生的免疫損傷有關(guān)。結(jié)核分枝桿菌的致病物質(zhì)：與莢膜、脂質(zhì)和蛋白質(zhì)有關(guān)。隨著醫(yī)學(xué)水平的不斷發(fā)展，結(jié)核病在臨床上使用蛋白芯片和TB-IGRA進(jìn)行診斷，Th1細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答是結(jié)核分枝桿菌感染的免疫反應(yīng)。TB-IGRA的檢測(cè)原理：結(jié)核分枝桿菌感染患者的外周血中有結(jié)核菌特異性T淋巴細(xì)胞，重組后對(duì)結(jié)核菌特異性T淋巴細(xì)胞進(jìn)行刺激、增殖并釋放IFN-γ。通過對(duì)樣品中IFN-γ含量進(jìn)行檢測(cè)來判斷結(jié)核分枝桿菌的感染情況。蛋白芯片的檢測(cè)原理：載體是微孔濾膜，采用微陣列技術(shù)對(duì)結(jié)核菌的特異性細(xì)胞壁脂多糖抗原LAM以及基因工程DNA技術(shù)生產(chǎn)純化的結(jié)核菌蛋白16kDa和38kDa等抗原進(jìn)行固定，通過微孔濾膜進(jìn)行滲透、濃縮以及凝集，對(duì)樣品中的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)，快速在抗原抗體反應(yīng)上進(jìn)行，將復(fù)合物與膠體金標(biāo)記進(jìn)行作用在膜上形成紫紅色斑點(diǎn)。然后采用芯片對(duì)PBT-X2生物進(jìn)行識(shí)別，對(duì)不同抗原點(diǎn)陣的灰度值采用專門軟件進(jìn)行分析。任何一個(gè)抗體若檢測(cè)結(jié)果顯示陽(yáng)性則判定為陽(yáng)性，若3種抗體檢測(cè)結(jié)果均顯示為陰性則可判定為陰性。蛋白芯片檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便、快捷的特點(diǎn)，但是檢測(cè)靈敏度較低，其原因是結(jié)核病患者血液中的抗原抗體結(jié)合形成復(fù)合物，可降低游離抗體滴度[1]，若顯示的結(jié)果低于疾病的臨界值，可判定為陰性。除此之外還有可能與患者自身免疫功能異常情況，體內(nèi)特異性結(jié)核抗體產(chǎn)生量較少或者是不產(chǎn)生有關(guān)。TB-IGRA法檢測(cè)靈敏度較高，這是因?yàn)門B-IGRA法不需要對(duì)淋巴細(xì)胞進(jìn)行分離，對(duì)設(shè)備以及操作的水平較低，在臨床上得到廣泛性的使用，是目前臨床上對(duì)結(jié)核分枝桿菌的重要診斷方法，但在使用其檢測(cè)時(shí)還需要結(jié)合患者的臨床癥狀以及其他診斷方法如痰菌培養(yǎng)、痰菌涂片以及影像學(xué)診斷技術(shù)等，同時(shí)還需要考慮到患者自身的免疫狀態(tài)。TB-IGRA法測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)假陰性的原因有不正確的標(biāo)本處理方式如劇烈操作是患者細(xì)胞損傷，患者自身免疫系統(tǒng)缺陷如接受免疫抑制治療或者AIDS。TBIGRA法還存在一定的缺點(diǎn)，其重點(diǎn)在于陽(yáng)性對(duì)患者的臨床病變部位沒有相應(yīng)的提示，活動(dòng)性結(jié)核病或潛伏感染者不能采用數(shù)值的高低來進(jìn)行判斷，仍需要結(jié)合臨床癥狀進(jìn)行診斷。本次對(duì)我院收治的80例結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行研究分析，結(jié)果顯示，兩種方法的特異度之間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），TB-IGRA法的靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值以及Youden指數(shù)顯著優(yōu)于蛋白芯片法，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說明結(jié)核分枝桿菌采用TB-IGRA與蛋白芯片進(jìn)行測(cè)定，前者檢測(cè)陽(yáng)性率較高，靈敏度也較高，建議使用在臨床檢測(cè)中。

綜上所述，結(jié)核分枝桿菌采用TB-IGRA檢測(cè)的靈敏度和陽(yáng)性率均顯著高于蛋白芯片，可在臨床上應(yīng)用。

[1] 王 科,代紅瑩,張 銀,等.結(jié)核蛋白芯片法檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌的臨床評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,39(10):776-778.