Pax-2、P63在子宮內(nèi)膜病變中的研究

王 冬 馬愛國(guó) 龔晨威 陳 慰 徐祖德

（上海市浦東新區(qū)婦幼保健院病理科，上海 200000）

子宮內(nèi)膜癌在女性中是第六個(gè)常見的癌癥。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌常發(fā)生在圍絕經(jīng)期婦女，危險(xiǎn)因素包括雌激素-孕激素比例不平衡，高齡，未產(chǎn)婦，他莫西芬治療糖尿病和肥胖[1]。Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生一般不受雌激素的影響，發(fā)病年齡較大常發(fā)生于老年患者，侵襲性明顯并較早轉(zhuǎn)移。Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌之前常表現(xiàn)為子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生，通?？杀憩F(xiàn)為子宮內(nèi)膜增生-非典型子宮內(nèi)膜增生-子宮內(nèi)膜樣腺癌的病理過程。本次研究通過Pax-2、P63在各種子宮內(nèi)膜病變中的表達(dá)情況，從而探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料：收集上海市浦東新區(qū)婦幼保健院病理科2004年～2017年刮宮術(shù)活檢標(biāo)本和子宮切除標(biāo)本。其中子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生標(biāo)本20例，36～56歲，平均年齡43歲；子宮內(nèi)膜樣腺癌標(biāo)本18例，年齡40～65歲，平均年齡54歲；Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌10例（包括透明細(xì)胞癌、漿液性腺癌和黏液性腺癌），年齡50～65歲，平均年齡56歲。

1.2 方法：應(yīng)用免疫組化SP法進(jìn)行染色?？贵w為P63鼠抗人單克隆抗體和Pax-2鼠抗人多克隆抗體，均購自廣州深達(dá)生物制品技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)P63的陽性對(duì)照為宮頸鱗癌標(biāo)本，Pax-2的陽性對(duì)照為腎透明細(xì)胞癌標(biāo)本，PBS液代替一抗做為陰性對(duì)照。

1.3 染色評(píng)估Pax-2和P63染色陽性均定位于細(xì)胞核，為棕黃色顆粒。采用染色指數(shù)積分，染色指數(shù)計(jì)算方法如下：①整個(gè)病變細(xì)胞染色百分比從0～1評(píng)分：0～10%染色為0分，11%～15%為0.3分，15%～50%為0.7分，51%～100%為1.0分。②染色強(qiáng)度從0～1評(píng)分：不表達(dá)為0分，弱表達(dá)為0.3分，中表達(dá)為0.7分，強(qiáng)表達(dá)為1.0分。染色指數(shù)=染色細(xì)胞百分?jǐn)?shù)×染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)[2]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：各組之間的差別采用t檢驗(yàn)，并SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

Pax-2主要染色于細(xì)胞核，并且呈現(xiàn)較彌漫染色，在子宮內(nèi)膜癌（內(nèi)膜樣腺癌、漿液性癌）中均表達(dá)不明顯，但在不典型增生具有較強(qiáng)表達(dá)。P63染色也定位于細(xì)胞核，呈現(xiàn)較深的顆粒狀染色，在子宮內(nèi)膜癌中幾乎表達(dá)，在不典型增生中表達(dá)也不明顯，具體數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析如下。

2.1 Pax-2在子宮內(nèi)膜樣腺癌和漿液性腺癌中幾乎不表達(dá)，平均染色指數(shù)均為0，在復(fù)雜-不典型增生中平均染色指數(shù)為（0.38±0.23），經(jīng)比較Pax-2在復(fù)雜-不典型增生的表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌、子宮漿液性腺癌的表達(dá)均有顯著差異（t=7.6，P＜0.01）。在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮漿液性腺癌中比較無差異。

2.2 P63在子宮內(nèi)膜樣腺癌和漿液性腺癌中也幾乎不表達(dá)，染色指數(shù)為0，在復(fù)雜-不典型增生中部分有弱表達(dá)，平均染色指數(shù)為0.04±0.02，與前二者比較，表達(dá)無顯著差異（t=1.7，P＞0.01）。在子宮內(nèi)膜樣腺癌和子宮漿液性腺癌中比較無差異。

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌常見于年齡較大婦女，就診平均年齡約為55歲，一般Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌通常經(jīng)歷由增生到癌的一系列病理過程，區(qū)分子宮內(nèi)膜增生癥和癌仍是一個(gè)較困難的領(lǐng)域。而Ⅱ型子宮內(nèi)膜癌惡性的更高，發(fā)病原因不明，以漿液性癌為多發(fā)。癌癥發(fā)展的過程是一個(gè)多步驟的過程，包括一系列原始細(xì)胞的突變，它包括克隆增生，無控制的生長(zhǎng)，最后的浸潤(rùn)。細(xì)胞的壓力可有很多外部和內(nèi)部影響引起，比如紫外線輻射，電離輻射，低氧，致癌物如黃曲霉毒素，吸煙，氧化應(yīng)激，致癌基因激活。這些可以導(dǎo)致DNA損壞，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。為了恢復(fù)完整性，細(xì)胞執(zhí)行了一些損傷控制機(jī)制。這些機(jī)制比人類物種古老，已經(jīng)在一億年前領(lǐng)鞭蟲的后代和早期多細(xì)胞?？邪l(fā)現(xiàn)[3]。生殖系統(tǒng)保護(hù)進(jìn)化對(duì)物種的繁衍至關(guān)重要。維持體細(xì)胞基因完整性來源于生殖細(xì)胞保護(hù)機(jī)制的進(jìn)化。女性生殖細(xì)胞經(jīng)歷減數(shù)分裂從而產(chǎn)生單倍體細(xì)胞對(duì)繁殖是必需的。這種多重過程當(dāng)細(xì)胞到達(dá)四倍體階段是停止了。這個(gè)階段的長(zhǎng)度延伸會(huì)使不成熟的卵母細(xì)胞更脆弱。這種機(jī)制確保卵母細(xì)胞基因組的完整性。P63作為人類繁殖的保護(hù)者，在p53家族中起著至關(guān)重要的作用。當(dāng)P63維持著保護(hù)女性生殖細(xì)胞的能力時(shí)，p53維持軀體細(xì)胞穩(wěn)定性。這些提示他們有腫瘤抑制功能和調(diào)控細(xì)胞周期的功能[4]。最近幾年，PAX-2在很多癌中表達(dá)，包括腎臟、卵巢、子宮內(nèi)膜和乳腺癌。在將來，PAX-2的表達(dá)在癌癥的發(fā)展中會(huì)作為相當(dāng)關(guān)鍵的因素。PAX-2抑制Caspase-2導(dǎo)致腎臟集合管細(xì)胞凋亡，從而刺激增殖和自我更新。最近研究表明，PAX-2通過刺激AP-1導(dǎo)致CyclinD1的表達(dá)，從而促進(jìn)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖。PAX-2在轉(zhuǎn)移性前列腺癌高表達(dá)，并且表達(dá)在生長(zhǎng)和浸潤(rùn)的細(xì)胞。因此，PAX-2是有惡性細(xì)胞的證明，并建議它也許是癌癥治療的一個(gè)潛在靶向目標(biāo)。然而，PAX-2在癌癥發(fā)展中的作用可能大部分依賴于組織的特殊條件。另外，PAX-2的生物學(xué)重要性在癌細(xì)胞中也有變化[5]。

在這次研究中發(fā)現(xiàn)，Pax-2在子宮內(nèi)膜癌中幾乎不表達(dá)，而在子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生中呈現(xiàn)弱表達(dá)，甚至中強(qiáng)表達(dá)。在一些復(fù)雜-不典型增生的刮宮標(biāo)本中，有的區(qū)域分化較好，有的區(qū)域分化較差，我們發(fā)現(xiàn)，分化好的區(qū)域染色更深一些，越接近癌的區(qū)域染色越淺。這或許表明Pax-2可以指示病變的向惡性分化的程度，進(jìn)而是否可以區(qū)分子宮內(nèi)膜增生性病變和癌的病變。子宮內(nèi)膜增生性病變?cè)诓±砬衅星Р钊f別，病理醫(yī)師診斷有時(shí)難免帶有主觀判斷，而增生性病變進(jìn)而發(fā)展成癌的潛能有多大，從HE切片中很難判斷。這次關(guān)于Pax-2的研究讓我們發(fā)現(xiàn)，就算同樣診斷為復(fù)雜-不典型增生的子宮內(nèi)膜病變，Pax-2的染色指數(shù)也不一樣，甚至同一張片子中，各個(gè)區(qū)域的染色也有深有淺，這也許預(yù)示著病變進(jìn)一步發(fā)展的潛在隱患，染色指數(shù)高的，分化會(huì)更好，將來發(fā)展為癌的可能性更小，而染色深的區(qū)域的腺體，更趨向于良性。

而P63這次的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不是很令人滿意，在子宮內(nèi)膜癌中也幾乎不表達(dá)，在復(fù)雜-不典型增生中有個(gè)別的表達(dá)，而且染色非常淺，經(jīng)過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并沒有顯著差異，在一些刮宮標(biāo)本中帶有正常的子宮內(nèi)膜中染色也不是很明顯，所以在子宮內(nèi)膜病變中，P63并不是一個(gè)有敏感性和特異性的抗體。當(dāng)然，也可能和實(shí)驗(yàn)的環(huán)境和操作誤差有關(guān)，以及這次沒有收集正常子宮內(nèi)膜標(biāo)本，在后續(xù)的研究中我們會(huì)進(jìn)一步探討。

綜上所述，在這次研究中，Pax-2隨著子宮內(nèi)膜病變分化的高低而存在染色差異，分化越好，染色指數(shù)越高，將來可以在子宮內(nèi)膜增生和癌的鑒別診斷中作為一項(xiàng)參考。而P63對(duì)子宮內(nèi)膜復(fù)雜-不典型增生和癌都不敏感，在今后的研究中計(jì)劃加入正常子宮內(nèi)膜增生標(biāo)本進(jìn)一步研究。

[1]Markowska A,Pawa?owska M,Filas V,et al.Does Metformin affect ER,PR,IGF-1R,β-cateninand PAX-2 expression inwomen with diabetesmellitus and endometrial cancer?[J].Diabetol Metab Syndr,2013,5(1):76.

[2]Brazowski E,Dotan I,Tulchinsky H,et al.Galectin-3 expression in pouchitis in patients with ulcerative colitis who underwent ileal pouch-anal anastomosis[J].Pathol Res Pract,2009,205(8):551-558.

[3]Pflaum J.Schlosserand S,Müller M.p53 family and cellular stress responses in cancer[J].Front Oncol,2014,4:285.

[4]Gonfloni S,Caputo V,IannizzottoV.P63 in health and cancer[J].Int J Dev Biol,2015,59(1/3):87-93.

[5]Liu PF,Gao Y,Huan J,et al.Upregulation of PAX2 Promotes the Metastasis of Esophageal Cancer through Interleukin-5[J].Cell Physiol Biochem,2015,35(2):740-754.