外周血細胞黏附分子CD11c、CD18的表達與急性缺血性腦卒中預后的相關性分析

李陳辰

【摘 要】目的：探索外周血細胞黏附分子CD11c、CD18的表達在急性缺血性腦卒中（AIS）中的變化及其相關性。方法：采用回顧性分析方法，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例（病例組），出院后隨訪90d，根據改良Rankin評分（mRS）分為預后良好組（mRS≤2分）和預后不良組（mRS≥3）。另選取同期招募的健康體檢者120例（健康對照組）。對不同分組受檢者的外周血中性粒細胞（PMN）和單核細胞（MNL）表面的CD11c、CD18進行測定，隨后對比各組受檢者各項數值的差異和相關性。結果：病例組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量顯著高于健康對照組（P<0.05）。病例組入院第1、3、7、14天各時間段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表達量均顯著高于健康對照組（P<0.05）。病例組PMN表面CD11c、CD18的表達量第1～3天逐漸升高，第3天達到高峰，第7天逐漸下降，但第14天仍高于健康對照組（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表達量第1～7天逐漸升高，第7天達到高峰，第14天逐漸下降，但仍高于健康對照組（P<0.05）。預后不良組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量高于預后良好組（P<0.05）。MRS評分與MNL和PMN表面CD18表達量呈正相關性（P<0.05）；且與MNL和PMN表面CD11c表達量也呈正相關性（P<0.05）。結論：MNL和PMN表面CD11c、CD18表達量與AIS預后密切相關，是AIS患者潛在的預后評估標記物。

【關鍵詞】中性粒細胞；單核細胞；急性缺血性腦卒中；預后；相關性

【中圖分類號】R565.9 【文獻標識碼】A 【文章編號】1005-0019（2018）20--01

急性缺血性腦卒中（acute ischemic stroke，AIS）是一種常見的腦卒中類型，具有患病率高、復發率高、致殘和致死率高等“四高”的特點，占所有類型腦卒中的69.6%-70.8%，不僅嚴重損害了患者的生活質量和生命健康，同時也給患者家庭、國家和社會帶來巨大經濟負擔。近年來，隨著研究的深入，可發現大部分AIS患者在病情發生、發展中，可出現炎癥反應，且在受到外界刺激后，可釋放受損腦組織內氧自由基、趨化因子、細胞因子，此項細胞激活，可誘導外周白細胞粘附分子表達和內皮細胞表達，激活膠質細胞，促進外周白細胞對缺血腦組織的浸潤，從而進一步釋放氧自由基和細胞因子，導致腦組織凋亡、壞死，加重血腦屏障破壞，影響預后[1]。既往研究顯示，外周血中性粒細胞（polymorphonuclear，PMN）和單核細胞（mononuclear leukocyte，MNL）表面的CD11c、CD18在AIS的發生和發展中起到重要作用[2]。為了盡早發現患者病情變化，還需加強臨床外周血細胞炎癥標記物的檢測，從而為治療方案擬定提供科學依據。因此，本研究采用回顧性分析方法，對120例AIS患者實施外周血PMN和MNL表面的CD11c、CD18進行檢測，探討CD11c和CD18的表達量在AIS患者中的變化及其相關性。

1 對象與方法

1.1 對象

本研究經醫院倫理委員會批準，收集2017年6月至2018年6月本中心收治的AIS患者120例（病例組），其中，男71例，女49例；年齡42～76歲，平均（62.18±3.69）歲。入選標準：（1）年齡18-80周歲，性別不限；（2）均符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2018》的診斷標準[3]，且經顱腦MRI或CT確診。（3）臨床首次發病，且發病后72h內入院；（4）均無嚴重抵觸情緒或精神家族史現象；（5）無溝通障礙或語言表達障礙；（6）無慢性感染病史；（7）患者或家屬簽署知情同意書。排除標準：（1）既往卒中或此次合并腦出血的患者；（2）妊娠期或哺乳期婦女；（3）有嚴重的心、肺、肝、腎及腫瘤性疾病；（4）存在自身免疫性疾病；（5）依從性差、不能按研究方案完成隨訪者；（6）正在參加其他臨床試驗。另選取同期招募的健康體檢者120例（健康對照組），其中，男68例，女52例；年齡41～77歲，平均（62.56±3.28）歲。兩組受檢者在性別和年齡方面比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 檢測項目 藻紅蛋白（PE）標記MNL表面CD18的平均熒光強度（MFI）；異硫氰酸熒光素（FITC）標記MNL表面CD11c的MFI；PE標記PMN表面CD11c的MFI；PE標記PMN表面CD18的MFI。

1.2.2 檢測方法 健康對照組在體檢當天，病例組在入院第1、3、7、14天，抽取受檢者空腹靜脈血5ml，首先將其置入抗凝劑的試管中混均，內含有乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝劑，首先將其分別放入含有20ul FITC標記的PE標記、CD11c單抗標記的FITC、PE標記的陰性對照單抗試管以及全血100ul內，混勻，隨后將其放置在常溫避光條件下待檢，孵育30分鐘后，加入2ml專用溶血素，且按照1：10的比例稀釋，除去紅細胞，對其進行血清分離處理，離心5分鐘，保持1000r速度，將上清液丟去，再加入1ml的PBS緩沖液，進行離心處理五分鐘，維持1000r速度，連續進行2次，將上清液丟去后，再加入PBS 0.5ml懸浮細胞，調整白細胞數為1×106個待檢。最后標記好PE標記的陰性對照單抗、FITC標記、PR標記的CD18單抗、PITC標記的CD11c單抗，所有試劑均由美國Caltag公司提供。

1.3 預后評估標準及隨訪

通過門診復診、信件以及電話方式進行隨訪。隨訪時間截止至2018年9月。隨訪90天時采用改良Rankin量表（mRS）評估病例組預后情況[4]：mRS≤2分為預后良好組（100例）；mRS≥3為預后不良組（20例）。

1.4 統計學處理

采用SPSS22.0統計軟件進行數據處理與分析。MNL和PMN表面CD11c、CD18等計量資料以均數±標準差（ ）表示，采用t檢驗；相關性分析采用Pearson直線相關分析法。以P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 2組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量比較

病例組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量顯著高于健康對照組（P<0.05）。見表1。

2.2 2組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量比較

病例組入院第1、3、7、14天各時間段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表達量均顯著高于健康對照組（P<0.05）。病例組PMN表面CD11c、CD18的表達量第1～3天逐漸升高，第3天達到高峰，第7天逐漸下降，但第14天仍高于健康對照組（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表達量第1～7天逐漸升高，第7天達到高峰，第14天逐漸下降，但仍高于健康對照組（P<0.05）。見表2。

2.3 不同預后程度AIS患者MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量比較

預后不良組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量高于預后良好組（P<0.05）。如表3所示：

2.4 相關性分析 相關性分析顯示：MNL和PMN表面CD11c表達量與MRS評分呈線性正相關（r=0.5369，P<0.05；r=0.1785，P<0.05）；而MNL和PMN表面CD18表達量與MRS評分亦呈線性正相關（r=0.1235，P<0.05；r=0.2365，P<0.05）。

3 討論

AIS早期的主要特征為腦組織血流突然性減少，若長時間處于缺血狀態，可導致腦組織所需的氧供中斷和葡萄糖中斷，引起神經功能缺損，一旦治療不及時，還可危及生命安全，具有較高的病死率和致殘率[5]。由于AIS患者在發病期間可激活膠質細胞，引起外周血白細胞粘附分子表達，激活氧自由基，釋放細胞因子，炎癥指標可出現明顯變化，對此還需加強外周血細胞炎癥標記物的檢測，從而對疾病起到預防作用[6]。

CDllc、CDl8在AIS發生中參與了血管內皮損傷、細胞黏附和炎癥反應過程。當腦組織缺血時，可出現穿越血管內皮細胞浸潤和白細胞粘附現象，進而增加趨化因子mR-NA、細胞因子mRNA、粘附分子的分泌[7]。而細胞粘附分子根據功能和基因結構的不同，可分為鈣黏蛋白家族、選擇素家族、免疫球蛋白超家族、整合素家族，以上共同點在于屬于整膜蛋白，是細胞膜分子。其中整合素的功能時細胞外基質和細胞粘附分子的相結合，可增強細胞間粘附，而整合素家族又稱之為膜受體糖蛋白家族，屬于一組糖蛋白反應指標[8]。而MNL和PMN與血管內皮細胞黏附增強，可促使大量活化的PMN粘附于缺血區微血管內皮細胞內，對血管內皮細胞具有較強的粘附性，可促使微血管出現阻塞，在缺血組織灌注中起到“無復流”、“低灌注”等作用，可加重腦組織缺血缺氧狀態[9]。其中MNL可分化為小神經膠質細胞，可穿過血管內皮細胞，游離至缺血區域，進而吞噬幸存神經元。而PMN能夠釋放膠質細胞，從而加重神經組織損傷，釋放神經毒性物質（包括蛋白水解酶、一氧化氮、興奮性氨基酸、氧自由基、細胞因子）。

本研究結果顯示，病例組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量顯著高于健康對照組（P<0.05）。病例組入院第1、3、7、14天各時間段PMN和MNL表面CD11c、CD18的表達量均顯著高于健康對照組（P<0.05）。病例組PMN表面CD11c、CD18的表達量第1～3天逐漸升高，第3天達到高峰，第7天逐漸下降，但第14天仍高于健康對照組（P<0.05）；MNL表面CD11c、CD18的表達量第1～7天逐漸升高，第7天達到高峰，第14天逐漸下降，但仍高于健康對照組（P<0.05）。此外，我們研究發現，預后不良組MNL和PMN表面CD11c、CD18的表達量高于預后良好組（P<0.05）。MRS評分與MNL和PMN表面CD18表達量呈正相關性（P<0.05）；且與MNL和PMN表面CD11c表達量也呈正相關性（P<0.05）。由此說明，MNL和PMN在AIS中具有一定的數值改變，主要是因為MNL和PMN可破壞血腦屏障，造成基底膜損傷和血管內皮細胞損傷，加重腦缺血缺氧癥狀，促進腦水腫形成，且加速細胞因子、細胞粘附分子、白細胞等炎癥介質的釋放，進而形成惡性循環[10]。因此在面對AIS患者，還需加強外周血細胞炎癥標記物的檢測，從而為治療方案擬定提供依據。

總而言之，外周血細胞炎癥標記物具有操作簡單、所需標本量少等特點，用于AIS人群中，可發揮較高的臨床應用價值。

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