廣西肝癌高發區人群機體免疫水平與HBV感染的關系

梁新強，寧淑芳，劉海洲，王海燕，唐亞梅，張力圖，崔 英，利基林*

（廣西醫科大學附屬腫瘤醫院，1.實驗研究部；2.教務科，廣西 南寧 530021）

原發性肝癌（primary liver cancer，PLC）是我國甚至全世界最常見的惡性腫瘤之一，據我國2010年腫瘤登記資料統計，廣西肝癌的發病率和死亡率分別為43.76/10萬和38.52/10萬，均高于全國的28.71/10萬和26.04/10萬水平[1]，肝癌的發生是多因素、多步驟的過程，其最主要的生物危險因素是乙型肝炎病毒（HBV）感染[2-3]。在廣西肝癌高發區，我們應用流式細胞術（FCM）檢測715例人員外周血淋巴細胞亞群的表達水平和NK細胞活性，同時以100例健康人作為對照，以了解高發區人群的免疫狀態，對肝癌的防治提供參考依據，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象

715例肝癌高發區人員為廣西扶綏縣城鄉居民，男459例，女256例，28～61歲，平均45.1±8.2歲，其中有HBV感染者574例，無HBV感染者141例。100例健康對照者為同期獻血人員，男61例，女39例，25～55歲，平均42.5±7.9歲。組間性別構成比和年齡，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑

流式細胞儀為Epics XL型，COULTERQ-PREP型自動溶血儀，ABC溶血素，鼠抗人單克隆抗體CD 45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD（16+56）/CD19/CD3，上述儀器與試劑均為美國Beckman coulter公司生產；血清HBsAg檢測使用上海科華生物有限公司生產的試劑盒。

1.3 方法

分別于清晨空腹抽取肘靜脈血5 mL，其中2.5 mL置于含乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）的抗凝管中，另外2.5 mL置于普通生化管中。從抗凝管中吸取100 μl全血分別與熒光素標記的鼠抗人單克隆抗體CD45/CD4/CD8/CD3、CD45/CD（16+56）/CD 19/CD3 20μl混勻、同型對照IgG各20 μL混勻，避光反應（室溫）30 min，溶血后1 h內上機完成檢測。上機后圈出擬測定的淋巴細胞群，每次捕獲取10000個細胞，雙參數分析淋巴細胞表面標記，計算出CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK和CD3+CD19+細胞的百分比含量；……