固體培養(yǎng)法和液體培養(yǎng)法檢測在支原體感染診斷中效果分析

鄺兆威 陳艷清 賈建 符宏建

效能支原體是最小的原核細胞型微生物, 分布廣泛、種類眾多, 主要感染機體呼吸道與泌尿生殖系統(tǒng), 且傳染性較強, 嚴重影響患者正常工作生活, 甚至可導致不育不孕等。且支原體感染前期癥狀不明顯, 易造成病情延誤, 影響治療效果。因此, 早期診斷支原體感染十分必要。支原體可在培養(yǎng)基中繁殖生長, 故臨床可通過實驗培養(yǎng)法進行早期診斷。目前, 實驗室培養(yǎng)方法主要有固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)。其中,以固體培養(yǎng)法為診斷支原體屬的金標準。但固體培養(yǎng)法操作繁瑣, 臨床推廣受限。液體培養(yǎng)法操作快捷, 但有研究稱液體培養(yǎng)法易造成誤診［1］。為研究兩種培養(yǎng)法診斷支原體感染的效果, 本研究選取本院881份生殖道標本, 分別進行固體培養(yǎng)法與液體培養(yǎng)法檢測。現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 選取本院2017年5～11月收集的881份生殖道標本, 其中男431例, 女 450例, 年齡 20～59歲, 平均年齡(35.76±7.94)歲。采用無菌拭條取尿道分泌物或宮頸分泌物各2份, 采集后送檢。

1.2 試劑與儀器 分別進行液體培養(yǎng)法和固體培養(yǎng)法。液體培養(yǎng)基：Uu和Mh選擇分離培養(yǎng)、鑒定及藥物敏感性試劑盒(珠海迪爾生物工程有限公司, 粵械注準20162400598號,批號20170331)；固體培養(yǎng)基：Uu和Mh選擇分離固體培養(yǎng)基(眾愛生河北生物科技有限公司, 冀邢械備20140016號,批號1703105)。儀器：上海比朗智能生化培養(yǎng)箱、常州冠軍CHP-160二氧化碳培養(yǎng)箱、普通光學顯微鏡(BX43奧林巴斯)。

1.3 培養(yǎng)方法 固體培養(yǎng)法：采集標本2 h內接種, 以采樣拭條頂端按照“Z”字形劃線涂布接種于固體培養(yǎng)基, 編號后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。液體培養(yǎng)法：對應編號標本拭條插入液體培養(yǎng)基中, 充分擠壓標本, 使標本盡量析出后丟棄, 震蕩混勻液體培養(yǎng)基, 按照試劑說明書將液體接種到微孔鑒定板,滴加液狀石蠟油。編號后使用二氧化碳培養(yǎng)箱, 溫度調節(jié)至35～37℃孵育, 觀察培養(yǎng)情況。若同編號僅液體培養(yǎng)發(fā)生變色,固體培養(yǎng)基中無菌落生長, 取液體培養(yǎng)物10 μl接種于新的固體培養(yǎng)基, 診斷標準以固體培養(yǎng)基菌落生長特征為主。

1.4 觀察指標及判定標準 比較兩種方式診斷Uu、Mh陽性率與污染率, 觀察二次固體培養(yǎng)結果。①固體培養(yǎng)：培養(yǎng)72 h后, 低倍鏡下觀察瓊脂平板上菌落生長情況。Uu陽性為典型圓形棕褐色海膽樣菌落, Mh陽性為煎蛋樣支原體菌落, 同時出現(xiàn)兩種菌落則為Uu、Mh混合陽性, 無典型菌落為陰性。②液體培養(yǎng)：培養(yǎng)72 h后觀察結果, 培養(yǎng)液相應計數(shù)孔、鑒定孔由黃變紅且澄清為陽性；兩孔均變紅且澄清為Uu+Mh陽性；顏色變紅但混濁、沉淀或無顏色變化為陰性。③污染：固體培養(yǎng)污染：顯微鏡下有雜菌并影響觀察結果；液體培養(yǎng)污染：培養(yǎng)液變紅但伴有渾濁或沉淀。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 陽性率 液體培養(yǎng)陽性485例, 陽性率為55.05%, 其中Uu陽性343例(38.93%), Uu+Mh陽性69例(7.83%), Mh陽性73例(8.29%)；固體培養(yǎng)陽性441例, 陽性率為50.06%, 其中Uu陽性332例(37.68%), Uu+Mh陽性44例(4.99%), Mh陽性65例(7.38%)。液體培養(yǎng)陽性率高于固體培養(yǎng)陽性率, 差異有統(tǒng)計學意義 (χ2=4.407, P=0.036＜0.05)。

2.2 污染率 液體培養(yǎng)中71例培養(yǎng)液變紅渾濁判為陰性,污染率為8.06%；固體培養(yǎng)中17例雜菌生長嚴重影響觀察判為陰性, 污染率為1.93%。固體培養(yǎng)污染率低于液體培養(yǎng)污染率, 差異有統(tǒng)計學意義(χ2=34.878, P=0.000＜0.05)。

2.3 二次固體培養(yǎng)結果 液體培養(yǎng)陽性但固體培養(yǎng)陰性48例, 二次固體培養(yǎng)后, 有12例長出支原體典型菌落(Uu 9例、Uu+Mh 3例、Mh 0例)；固體培養(yǎng)陽性但液體培養(yǎng)陰性4例,二次固體培養(yǎng), 均可見典型菌落。

3 討論

支原體是沒有細胞壁的原核細胞微生物, 介于細菌與病毒之間, 感染性支原體對皮細胞親和性極強, 可于人體呼吸道、生殖道黏膜繁殖, 造成局部組織損傷, 引發(fā)感染［2］。人類分離所得感染性較強的支原體主要有Uu與Mh。Uu、Mh均可在無生命培養(yǎng)基中生長繁殖, 故臨床主要采用實驗室檢測診斷支原體感染［3］。

Uu與Mh可在固體培養(yǎng)基上繁殖生長, 形成特征性較強的典型海膽樣菌落、油煎蛋樣菌落, 通過顯微鏡對菌落進行觀察, 能夠準確判斷支原體菌落形態(tài), 避免出現(xiàn)假陽性。且固體培養(yǎng)基添加了支原體繁殖所需營養(yǎng)成分, 并且含有抑菌成分, 可抑制其他微生物生長, 污染率較低［4-6］。但固體培養(yǎng)法操作較為繁瑣, 且藥敏檢測困難, 可作為確診實驗。Mh在生長過程中可分解精氨酸, Uu可分解尿素, Uu、Mh在液體培養(yǎng)基生長過程中可使培養(yǎng)基pH值上升, 導致培養(yǎng)基中指示劑變紅, 以此診斷支原體陽性［7-10］。此診斷方法簡便快捷, 靈敏度較高, 還可附帶陽性標本的藥敏反應結果, 可為臨床合理采用抗菌藥物提供參考。但液體培養(yǎng)法是在培養(yǎng)基中添加不同底物, 以生化反應來判斷支原體屬性, 易受干擾, 培養(yǎng)基中其他微生物生長過程中亦可造成試劑變色,出現(xiàn)假陽性, 造成誤診。本研究結果表明, 液體培養(yǎng)陽性率55.05%高于固體培養(yǎng)陽性率的50.06%, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 與代莉等［10］研究者結果一致, 液體培養(yǎng)法出現(xiàn)假陽性是導致陽性率較高的因素。且液體培養(yǎng)法存在比較嚴重的污染問題, 導致檢測準確率下降。本研究中, 液體培養(yǎng)法污染率為8.06%, 高于固體培養(yǎng)法的1.93%, 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 影響診斷準確率。因此, 液體培養(yǎng)基可作為支原體初期篩選檢測, 確診還需進一步結合固體培養(yǎng)法。

綜上所述, 液體培養(yǎng)法診斷支原體簡單快捷, 但主觀性較強, 誤診率較高, 可作為支原體診斷初步篩選；固體培養(yǎng)法污染率小, 可作為確診實驗, 兩種方法聯(lián)合使用可提高診斷效率與準確性, 合理指導臨床治療。

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