口腔螺旋體鏡檢濕片法與革蘭染色法兩種方法的比較

吳坤

（黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院醫(yī)藥技術(shù)系 貴州 凱里 556000）

口腔螺旋體檢測(cè)，在臨床上為口腔相關(guān)疾病提供有效的輔助診斷，口腔螺旋體檢測(cè)濕片法受到多種因素影響，降低了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，出現(xiàn)檢查誤差，口腔螺旋體檢測(cè)的準(zhǔn)確性是為臨床口腔相關(guān)疾病提供輔助診斷的重要依據(jù)。本文主要對(duì)140例大學(xué)生作為檢測(cè)對(duì)象通過濕片法與革蘭染色法分別檢測(cè)結(jié)果的差異性進(jìn)行比較分析，使其更好的在臨床口腔疾病檢測(cè)中得到廣泛應(yīng)用。現(xiàn)將檢測(cè)方法與檢測(cè)結(jié)果簡述如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

以140例黔東南民族職業(yè)技術(shù)學(xué)院的在校大學(xué)生牙垢樣本作為研究對(duì)象，其中男40例，女100例，年齡l8～22歲 分別用濕片法與革蘭染色法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行口腔螺旋體檢測(cè)觀察，并及時(shí)、準(zhǔn)確記錄檢測(cè)結(jié)果。

1.2 方法

（1）濕片法。載玻片上放一滴生理鹽水用牙簽挑取牙縫中的牙垢制成懸液，置(10×40)倍鏡下觀察口腔螺旋體。

（2）革蘭染色法。待標(biāo)本濕片法觀察完畢后，讓濕片上的牙垢懸液自然干燥，通過酒精燈外焰3次進(jìn)行固定，常規(guī)進(jìn)行革蘭氏染色。染色完畢后，用吸水紙吸于載玻片上的水分，置(10×100)油鏡下觀察計(jì)數(shù)每一視野中的口腔螺旋體數(shù)目，觀察10個(gè)視野，計(jì)算均值。

1.3 判斷標(biāo)準(zhǔn)

陰性(-）：未檢出口腔螺旋體（仔細(xì)觀察300個(gè)視野未發(fā)現(xiàn)口腔螺旋體）；陽性(+)：檢出口腔螺旋體

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，濕片法與革蘭染色法鏡檢口腔螺旋體體結(jié)果差異比較采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

采用濕片法鏡檢口腔螺旋體陽性率為20%；而采用革蘭染色法鏡檢口腔螺旋體陽性率為52%，兩組數(shù)據(jù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見表1。

表1 兩種檢測(cè)法口腔螺旋體檢出水平對(duì)比

3.討論

口腔螺旋體種類較多，其中包括大齒密螺旋體、齒密螺旋體、口腔密螺旋體、奮森氏密螺旋體等[1]，其中奮森疏螺旋體是口腔常居菌叢之一，革蘭染色陰性，菌體細(xì)長呈螺旋狀，螺旋規(guī)則或不規(guī)則，奮森氏螺旋體棲居于口腔齦下菌斑中，過去認(rèn)為無致病性，近年來發(fā)現(xiàn)成年人牙周病患者的齦下菌斑標(biāo)本中，螺旋體為優(yōu)勢(shì)菌群，從而推測(cè)其具有致病性[2]。對(duì)口腔螺旋體的準(zhǔn)確檢測(cè)對(duì)于輔助診斷口腔類疾病有重要意義。

本次檢測(cè)結(jié)果中，采用濕片法鏡檢口腔螺旋體陽性率為20%；而采用革蘭染色法鏡檢口腔螺旋體陽性率為52%，兩組數(shù)據(jù)差異明顯，濕片法鏡檢操作簡便省時(shí)，但易造成誤檢、漏檢，濕片法放大的倍數(shù)相對(duì)較小，只適合在高倍鏡下觀察，容易和牙垢中的食物纖維、細(xì)長物體等相混淆，以致誤判，牙垢食物殘?jiān)煞侄啵鞣N成份相互擠壓重疊，可能遮擋運(yùn)動(dòng)中的口腔螺旋體，加之背景不清晰，都可能造成漏檢，其次口腔螺旋體本身具有運(yùn)動(dòng)活潑的特性，在高倍鏡視野下，運(yùn)動(dòng)速度極快，有時(shí)候來不及識(shí)別，導(dǎo)致漏檢，在次光學(xué)顯微本身也具有缺陷，對(duì)濕片中微生物運(yùn)動(dòng)的觀察效果欠佳，暗視野顯微鏡效果好。綜上多層因素，導(dǎo)致濕片法檢測(cè)口腔螺旋體的陽性率大大降低，不能滿足臨床輔助診斷口腔類疾病的需要，革蘭染色法鏡檢雖然比濕片法增加了干燥、固定、染色的程序但其準(zhǔn)確度高，易辨認(rèn)。口腔螺旋體被染成革蘭陰性，與口腔牙垢中的其它殘?jiān)煞萁缇€清晰，油鏡放大倍數(shù)髙，不會(huì)和牙垢中的其它成分相混淆，易于辨認(rèn)，而且染色后的標(biāo)本，涂片中的口腔螺旋體不在具有運(yùn)動(dòng)性，鏡檢相對(duì)固定，避免了濕片檢測(cè)法觀察的隨機(jī)性，只要仔細(xì)觀察涂片，不會(huì)出現(xiàn)誤檢、漏檢，即使是初學(xué)者也易于掌握，而且成本低廉、簡便、準(zhǔn)確。更適用于廣大基層衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室的開展。為臨床診斷口腔類疾病及亞健康口腔判斷提供有力的輔助依據(jù)。

本次的140例口腔牙垢樣本檢測(cè)中，革蘭染色法檢出口腔螺旋體陽性的標(biāo)本共73例，其中有36例學(xué)生反映經(jīng)常或偶伴有牙齦出血，單純的牙齦腫痛、蛀牙標(biāo)本，口腔螺旋體為陰性，但是牙齦腫痛、蛀牙伴牙齦出血的標(biāo)本，口腔螺旋體為陽性，這可能與口腔螺旋體機(jī)械性穿入破壞致病有一定的關(guān)系，從本次實(shí)驗(yàn)來看，口腔螺旋體每個(gè)油鏡視野檢出數(shù)量較少者，牙齦出血的概率較少，口腔螺旋體每個(gè)油鏡視野檢出數(shù)量較多時(shí)，牙齦出血的概率較高，所以口腔螺旋體的致病性與其存在數(shù)量具有相關(guān)性，如果把口腔螺旋體每個(gè)油鏡視野的檢出分等級(jí)的數(shù)量化，這樣就與牙齦出血等口腔疾病具有明顯的相關(guān)性。鑒于本次口腔螺旋體檢測(cè)的標(biāo)本量有限，口腔螺旋體的量化與牙齦出血還有待擴(kuò)大樣本進(jìn)一步證實(shí)。

綜上所述，建議臨床口腔螺旋體的檢測(cè)普遍用革蘭染色法鏡檢，可以更大程度上提高檢出陽性率，如果把口腔螺旋體每個(gè)油鏡視野的檢出分等級(jí)的數(shù)量化，就與牙齦出血等口腔疾病具有明顯的相關(guān)性，可為臨床口腔相關(guān)疾病提供有效的輔助診斷。為口腔相關(guān)疾病的診斷與治療提供更多有力依據(jù)。

[1]張炳新，楊霖，樊明文，等。螺旋體在口腔疾病中的地位和作用。《國外醫(yī)學(xué)：口腔醫(yī)學(xué)分冊(cè)》1989年第1期13-16，共4頁.

[2]倪語星，尚紅.臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)（第5版）.北京：人民衛(wèi)生出版社，2014年11月：第247頁.