不同檢測方法在結核桿菌檢測中的應用研究

歐陽慧 郭桂英 秦旭 黃鑫（通訊作者）

（1樂山市人民醫院檢驗科 樂山 四川 614000（2樂山市人民醫院分子實驗室 樂山 四川 614000）

結核病至今仍為重要的傳染病。估計世界人口中1/3感染結核分歧桿菌。據WHO報道，每年約有800萬新病例發生，至少有300萬人死于該病。中國是全球22個結核病高負擔國家之一,每年新發病例占全球總數的16%。結核病也是發展中國家流行的一種致死性疾病，現已成為世界嚴重公共衛生問題。近些年來，我國的結核病發病率呈緩慢的上升趨勢，該病的傳染性極強，傳染方式簡單，給人們的健康帶來了重大的威脅[1]。一般來說絕大多數的感染在肺部，但皮膚，腦膜，腹膜等位置也可以發生感染[2]。有研究表明，結核病的延遲診斷給患者及親密接觸者造成嚴重不良后果，因此，早期的明確診斷具有重要意義[3]。痰標本簡單，易獲得，是一種常用的檢測樣本。而且檢出痰中含有結核桿菌是臨床診斷肺結核或鑒別與其他肺病的依據。本研究通過比較痰TB-DNA檢測以及傳統的痰抗酸染色對結核桿菌的檢出率，為臨床提供肺結核診療的最佳實驗室檢測方案。

1.資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2015年12月—2016年12月本院診治的202例結核患者(男性患者167例，女性患者35例，漢族患者121例，少數民族患者81例)的臨床資料（詳見表1），依據臨床表現及影像學等檢查確診為肺結核患者。按照不同檢測方式分為PCR組和抗酸染色組。其中PCR組檢測352份樣本，抗酸染色組檢測648份樣本。

1.2 方法

1.2.1 采集痰標本 患者晨起后漱口，咳出1～2口痰至已進行過滅菌處理的無菌杯加蓋送檢，樣本中避免混入唾液。

1.2.2 試劑和儀器 抗酸染色用5%石炭酸復紅，3%鹽酸酒精再加呂氏美蘭液。PCR儀器為DA7600型全自動熒光定量PCR儀。

1.2.3 方法

（1）萋-尼氏抗酸染色法鏡檢，嚴格按照《結核病實驗室診斷檢驗規程》操作。

（2）PCR檢測 使用胰酶懸液消化痰標本。離心棄上清液得沉淀物用于TB-DNA提取，然后按設定程序進行DNA擴增和分析。

1.2.4 統計學處理 采用spss 13.0軟件進行統計學處理，技術資料采用卡方檢驗χ2，P＜0.01為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 PCR法和抗酸染色法在痰抗酸桿菌檢測中陽性率比較結果顯示PCR法檢出痰液里的結核分枝桿菌陽性率明顯高于傳統的涂片抗酸染色法，差異有統計學意義。（詳見表2）

2.2 PCR法和抗酸染色涂片法檢出結核病人陽性率比較202例結核患者中痰PCR檢出陽性為72例，抗酸染色檢出陽性53例，PCR的陽性患者檢出明顯高于抗酸染色。（詳見表3）。

表1 202例確診結核病人基本資料

表2 1000份痰標本兩種不同檢測法比較

表3 202例結核患者痰檢測PCR和抗酸染色結果比較

3.討論

結核病的細菌學檢查是檢測結核桿菌的主要手段，是結核病確診和制定治療方案的的重要依據。傳統的抗酸染色是常用且簡單易行的檢測方法，但是特異性較差，不易區分結核分枝桿菌和非結核分枝桿菌，而且干擾因素多，漏檢率很高，陽性率低。而要在金標準下進行結核桿菌培養，一般需要45天時間，且對培養要求很高，不易用作早期診斷手段，不太適用于臨床。所以需要加入更有效，特異性更高且快速的方法加以輔佐，彌補其部分不足。而近年來有很多新的檢測痰中結核桿菌的技術比如環介導等溫擴增技術（LAMP），免疫磁珠分離技術(immunomagnefic beads separation techniques,IMBS) 等，都反映出能更好的檢測痰中結核桿菌，但是其要用于基層醫院的臨床檢測還需要更長的時間。

目前臨床上應用較好的較成熟的是聚合酶鏈式反應基因擴增（簡稱PCR）對痰結核桿菌進行檢測的方法，該方法的好處是利用較為穩定的痰結核DNA進行檢測，通過對痰樣本中的生物DNA進行提取，并以結核桿菌DNA的特異性寡核苷酸作為引物進行的基因擴增，可以檢測到所提取的DNA提取物中是否含有要檢測的結核桿菌DNA，這種方法大大提高了檢測的準確性和可靠性，可為臨床提供及時，準確的診斷依據，值得在臨床實踐中加以推廣應用。為了廣泛推廣該項技術在臨床的應用，提高臨床醫生對TB-DNA檢測意義的認識。本研究通過比較結核病人痰抗酸染色和PCR兩種檢測方法檢測抗酸桿菌的情況，結果顯示PCR檢測法明顯優于傳統抗酸染色。其操作方法簡便，診斷快速，特異性較高，且檢查結果具有較高的真實度和可靠性，表明PCR法對結核分枝桿菌的快速檢測具有重要的意義。

綜上所述,用PCR技術檢測痰結核分枝桿菌具有較高的陽性檢出率，檢測特異性較高，臨床操作簡潔，耗時短且彌補了其他一些傳統檢測方法的不足，具有臨床實際應用價值，是一種值得推薦和推廣的實驗室診斷技術，但是也有其局限性，就是易受外界干擾，還存在一定程度的不穩定性易產生假陽性。可以和抗酸染色一起作為結核病常規檢測方法。

[1]陸再英，鐘南山.內科學[M]第7版，北京：人民衛生出版社，2008:43.

[2]楊光武，不同檢驗方法在肺結核早期診斷中的應用[J].航天醫學雜志，2012,23（3）,309-310.

[3]梁建琴，高華方，李洪敏，等.PCR-熒光探針法檢測臨床痰標本結核分枝桿菌的可靠性研究[J].中國防癆雜志，2012,34(5):271-274.