豬偽狂犬病病毒變異毒株的流行與防控

李 嬌，謝金文，李 峰，沈志強(qiáng)，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，濱州 256600）

豬偽狂犬病（Pseudorabies,PR）是由豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的一種急性、敗血性傳染病[1]。我國(guó)于1947年首次發(fā)現(xiàn)此病，于20世紀(jì)90年代開始推廣應(yīng)用PRV gE基因缺失弱毒疫苗后PR發(fā)病率下降，總體控制較好，但自2011年開始，我國(guó)豬場(chǎng)陸續(xù)發(fā)生由PRV變異株引起的PR疫情[2-3]，PR在保持多年的平靜狀態(tài)后再起波瀾，甚至一些正常免疫豬場(chǎng)也出現(xiàn)疫情[4-5]，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。面對(duì)這種情況，我國(guó)研究學(xué)者迅速對(duì)PRV變異毒株的病毒變異、流行病學(xué)、疫苗保護(hù)力、新型疫苗、預(yù)防與控制策略等方面進(jìn)行了研究探討，并取得了突破性進(jìn)展。本文就PRV變異毒株的流行特點(diǎn)、與疫苗株的交叉保護(hù)性、疫苗研究進(jìn)展、防控措施等進(jìn)行了綜述，以期為我國(guó)PRV變異毒株的防控工作和PR凈化工作提供參考依據(jù)。

1 變異毒株的流行特點(diǎn)

2011年10月PRV變異毒株首先在河北、山東等養(yǎng)殖密度較大的華北地區(qū)開始暴發(fā)，2012年3月開始蔓延至安徽、江蘇、上海，2012年11月在廣東、廣西暴發(fā)，2013年4月，我國(guó)中東部十余個(gè)省（市）大面積暴發(fā)，至2014年已蔓延至全國(guó)，但主要流行在東北、華中、華北、華東等養(yǎng)豬密集地區(qū)。祖立闖等[6]通過(guò)對(duì)2006—2016年10年時(shí)間里我國(guó)豬偽狂犬病流行情況的統(tǒng)計(jì)分析顯示，2006年至今國(guó)內(nèi)共分離鑒定出PRV毒株87株，其中2006—2010年病毒分離鑒定率為 13.79%（12/87），2011—2016年病毒分離鑒定率為86.21%（75/87），自2011年開始我國(guó)PRV毒株成功分離數(shù)量逐年增多，整體感染率逐年升高，散發(fā)性、區(qū)域性流行特點(diǎn)顯著，在一定程度上體現(xiàn)出近幾年P(guān)RV變異毒株在國(guó)內(nèi)的流行已十分嚴(yán)重。

PRV變異毒株與經(jīng)典毒株一樣，既可水平傳播也可垂直傳播。PRV變異毒株可在豬、貓、鼠、犬等動(dòng)物體內(nèi)長(zhǎng)期潛伏存在，并可持續(xù)性帶毒、排毒，通過(guò)飼料、尿液、水、空氣等途徑傳播擴(kuò)散，PRV變異毒株隨大氣氣流運(yùn)動(dòng)而傳播，傳播距離甚至超過(guò)10km，當(dāng)空氣濕度大于55%時(shí)，其可在空氣中存活7 h以上[7]。PRV變異毒株還可通過(guò)胎盤傳遞給子體，導(dǎo)致胎兒的感染。

PRV變異毒株感染后的主要表現(xiàn)為：PRV陰性場(chǎng)gE抗體突然轉(zhuǎn)陽(yáng)，陽(yáng)性場(chǎng)比例暴增，一般是生長(zhǎng)肥育豬首先發(fā)病，隨后出現(xiàn)母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、產(chǎn)弱仔，哺乳仔豬、保育豬出現(xiàn)腹瀉、呼吸道與神經(jīng)癥狀等，病死率極高。過(guò)去PRV經(jīng)典株感染的臨床特征主要取決于感染豬的年齡，幼齡豬感染PRV經(jīng)典株后病情最嚴(yán)重，新生仔豬可引起大量死亡，發(fā)病仔豬表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)癥狀，以及昏睡、尖叫、嘔吐、呼吸困難、腹瀉等癥狀，15日齡以內(nèi)仔豬感染后的病死率可達(dá)100%。種豬感染PRV經(jīng)典株后可導(dǎo)致不育癥，返情率高達(dá)90%，反復(fù)配種數(shù)次不孕。成年豬感染PRV經(jīng)典株一般為隱性感染，以及發(fā)熱、精神沉郁、嘔吐、咳嗽等輕微癥狀，一般可在4～8 d內(nèi)完全恢復(fù)。目前PRV變異毒株感染的臨床特征與經(jīng)典毒株相比出現(xiàn)了新變化，發(fā)病情況與豬日齡關(guān)系已不明顯，仔豬感染后嚴(yán)重腹瀉，保育豬、生長(zhǎng)肥育豬出現(xiàn)莫名發(fā)熱和呼吸道病癥狀，妊娠母豬出現(xiàn)流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、弱仔，不同日齡豬只的發(fā)病率、死亡率均很高。

在分子水平上，通過(guò)對(duì)PRV變異株的基因序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化比較分析顯示，PRV變異株與國(guó)內(nèi)早期經(jīng)典毒株以及國(guó)外分離株的序列和遺傳進(jìn)化均存在較大差異。范克偉等[8]對(duì)閩西不同地區(qū)15株P(guān)RV分離株的gE基因進(jìn)行遺傳變異分析，15株P(guān)RV分離株與PRV經(jīng)典株的核苷酸及氨基酸序列同源性均相對(duì)較低，分別為97.0%～99.6%和94.6%～99.3%，5株P(guān)RV分離株的gE氨基酸序列最具特征性的變化是第48位和第496位各有1個(gè)天冬氨酸（D）的插入，該插入特征為PRV變異毒株的重要標(biāo)志，同時(shí)抗原性分析發(fā)現(xiàn)這2個(gè)位點(diǎn)還位于gE蛋白的抗原表位區(qū)內(nèi)；遺傳進(jìn)化樹分析顯示，15株P(guān)RV分離株與近3年國(guó)內(nèi)不同省份分離的PRV變異株位于一個(gè)相對(duì)獨(dú)立的分支中，而與經(jīng)典毒株處于不同的分支中，親緣關(guān)系相對(duì)較遠(yuǎn)。李寧等[9]對(duì)2012—2014年14株河南PRV分離株的主要毒力基因gE和TK進(jìn)行擴(kuò)增、克隆測(cè)序和遺傳進(jìn)化分析，14株河南分離株的gE基因氨基酸同源性為95.7%～99.8%，與2012年之前國(guó)內(nèi)分離的毒株同源性較低（96.6%～98.9%），并在多個(gè)部位存在堿基的插入與替換。14株TK基因的氨基酸同源性為98.1%～100.0%，與疫苗株Bartha株同源性為98.1%～99.4%，遺傳進(jìn)化分析顯示PRV流行毒株gE基因和TK基因均可分為3個(gè)群，與國(guó)內(nèi)分離的大多數(shù)毒株同處于基因Ⅰ群，14個(gè)分離株與ZJ-01株、TJ株等國(guó)內(nèi)2012年以后分離毒株親緣關(guān)系較近，與Ea株、Min-A株、LA株等國(guó)內(nèi)2012年以前分離毒株親緣關(guān)系次之，與Becker株、Kaplan株和P-Prv株等疫苗株親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。

2 變異毒株與疫苗株的交叉保護(hù)性

PRV變異毒株的主要保護(hù)性抗原基因與以前報(bào)道的毒株相比發(fā)生了基因的插入或缺失以及點(diǎn)突變，且自2011年P(guān)RV變異毒株開始流行以來(lái)，研究學(xué)者陸續(xù)在PRV免疫豬場(chǎng)分離鑒定出PRV變異毒株[4-5]，使人們對(duì)現(xiàn)有PR疫苗能否保護(hù)豬群抵抗變異株的感染產(chǎn)生了懷疑。賴志[10]采用PR活疫苗（C株）免疫25日齡斷奶仔豬，免疫后21 d用PRV變異毒株（HB-11株）對(duì)免疫組和對(duì)照組攻毒，記錄各組仔豬攻毒后的精神狀態(tài)、呼吸情況、體溫、神經(jīng)癥狀及死亡等臨床癥狀，攻毒后第 4、7、11、14、20 天采集血清、鼻拭子、肛拭子，用熒光定量PCR檢測(cè)樣品中PRV含量，結(jié)果表明，對(duì)照組發(fā)病率為100%（5/5），表現(xiàn)為發(fā)燒、精神沉郁、呼吸困難、神經(jīng)癥狀和死亡，死亡率達(dá)80%；免疫組發(fā)病率為80%（4/5），仔豬表現(xiàn)為精神、呼吸、體溫、采食均正常，保護(hù)率達(dá)80%。經(jīng)熒光定量PCR方法檢測(cè)，免疫組仔豬均可縮短HB-11株攻毒后病毒血癥時(shí)間，以及減少鼻腔和糞便排毒，表明PR活疫苗（C株）對(duì)PRV變異毒株（HB-11株）的攻擊具有一定的保護(hù)作用。王繼春等[11]應(yīng)用豬偽狂犬病活疫苗（Bartha-K61株）免疫4～6周齡PRV抗體陰性仔豬，1周后用PRV變異株（AH02LA株）攻毒，檢測(cè)攻毒后臨床癥狀、直腸溫度、鼻腔排毒和肺部病變，對(duì)照組攻毒后出現(xiàn)典型偽狂犬病癥狀，發(fā)病率為100%，死亡率為60%，所有豬只鼻拭子均檢出排毒，所有豬只肺部均有出血、淤血等病變。而疫苗免疫組的豬只攻毒后，所有豬只均未出現(xiàn)明顯臨床癥狀，部分豬只鼻拭子檢出排毒，排毒持續(xù)時(shí)間縮短，排毒量顯著減少，所有免疫豬只肺部未見明顯病變，表明增加Bartha-K61株疫苗的免疫劑量對(duì)PRV變異株的攻擊具有良好的保護(hù)效果。鄭仲華等[12]選取10頭4月齡PRV陰性肥育豬，隨機(jī)分為A、B兩組，A組免疫豬偽狂犬病活疫苗，B組不免疫，2周后兩組同時(shí)注射2 mL/頭的PRV變異毒株（YJ株），疫苗免疫組全部健活，而非免疫組全部發(fā)病，且有3頭死亡，表明PRV變異毒株（YJ株）對(duì)肥育豬具有很強(qiáng)的致病性，現(xiàn)有的PRV活疫苗免疫豬能完全抵抗PRV變異毒株（YJ株）的攻擊，合理的調(diào)整免疫程序、加強(qiáng)對(duì)肥育豬的免疫，可有效控制豬場(chǎng)PRV變異毒株的侵襲。以上研究結(jié)果表明，PR現(xiàn)行弱毒疫苗對(duì)PRV變異毒株仍具有一定的臨床保護(hù)能力，PRV變異毒株與疫苗株之間具有一定的交叉保護(hù)性，臨床中可通過(guò)增加PR現(xiàn)行弱毒疫苗的免疫次數(shù)與免疫劑量阻止PRV變異毒株的感染。

3 變異毒株疫苗研究進(jìn)展

針對(duì)新出現(xiàn)的PRV變異毒株，研究學(xué)者迅速開展了針對(duì)其疫苗的研究工作，并取得了一些重要進(jìn)展。童武等[13]運(yùn)用同源重組的方法成功構(gòu)建出了gE/gI雙基因缺失的JS-2012毒株，并用該毒株制成了滅活疫苗，該滅活疫苗接種的仔豬均無(wú)過(guò)敏反應(yīng)，接種部位無(wú)炎性反應(yīng)。利用該滅活疫苗免疫仔豬2次后，免疫仔豬對(duì)PRV變異毒株（JS-2012株）的保護(hù)率達(dá)100%，該滅活疫苗免疫仔豬1次后，免疫仔豬對(duì)PRV變異毒株（JS-2012株）的保護(hù)率達(dá)60%，兩次免疫可以提供更好的保護(hù)效力。Cong等[14]利用細(xì)菌人工染色體技術(shù)將PRV變異毒株（HN1201株）缺失掉了gE/gI/TK 3個(gè)基因，gE/gI/TK基因缺失的毒株在細(xì)胞上的生長(zhǎng)繁殖良好，將其接種9日齡仔豬后無(wú)不良反應(yīng)，疫苗免疫4周后利用PRV變異毒株（HN1201株）進(jìn)行攻毒，免疫豬群保護(hù)率達(dá)100%。PRV變異毒株基因缺失疫苗具備過(guò)去常規(guī)經(jīng)典毒株基因缺失疫苗的安全性，不會(huì)存在散毒及毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，且具有很好的免疫原性，同時(shí)可利用缺失的gE基因作為分子標(biāo)記來(lái)鑒別診斷疫苗接種動(dòng)物與野毒感染動(dòng)物，將為PRV變異毒株的防控及凈化提供重要的技術(shù)支持，但目前針對(duì)PRV變異毒株的基因缺失疫苗均處于試驗(yàn)研究階段，距離商品化還需要進(jìn)行一定的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證。

4 變異毒株的防控

PRV變異毒株防控的最終目標(biāo)即是實(shí)現(xiàn)凈化，而凈化的技術(shù)核心就是利用基因標(biāo)記疫苗與鑒別診斷方法淘汰野毒感染豬，同時(shí)與生物安全措施和飼養(yǎng)管理相結(jié)合，逐步實(shí)現(xiàn)豬場(chǎng)中PRV變異毒株的根除。

4.1 加強(qiáng)疫苗免疫和抗體監(jiān)測(cè)

在國(guó)務(wù)院辦公廳頒布的《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012—2020年）》中要求到2020年全國(guó)16種重大動(dòng)物疫病要達(dá)到規(guī)劃設(shè)定的考核標(biāo)準(zhǔn)，其中PRV就是一個(gè)病原。gE基因缺失疫苗以及配套的鑒別診斷技術(shù)是實(shí)現(xiàn)PR凈化的主要方式。對(duì)于疫苗選擇，目前PRV變異毒株疫苗仍處在研究階段，尚沒(méi)有商品化，由于PRV只有1個(gè)血清型，現(xiàn)有疫苗對(duì)變異株仍然具有保護(hù)作用[10-12]，從現(xiàn)有疫苗中挑選質(zhì)量穩(wěn)定、安全的gE基因缺失疫苗，并增加疫苗的免疫次數(shù)與免疫劑量可有效保護(hù)PRV變異毒株感染。對(duì)于免疫程序的制定，養(yǎng)殖單位應(yīng)根據(jù)自身特點(diǎn)制定個(gè)性化的免疫方案，原則上，建議種公豬、母豬每年普免3～4次，仔豬出生3日齡內(nèi)滴鼻免疫1次，仔豬35日齡和60日齡各肌注免疫1次。3日齡內(nèi)的仔豬以滴鼻方式免疫的gE基因缺失弱毒疫苗可以快速誘導(dǎo)黏膜免疫，其不受母源抗體干擾，可有效阻斷PRV野毒株的感染與傳播，應(yīng)將滴鼻免疫納入常規(guī)免疫程序。對(duì)于抗體的監(jiān)測(cè)，豬場(chǎng)每年至少進(jìn)行2～3次gE抗體檢測(cè)，及時(shí)了解豬群的帶毒情況和疫苗免疫效果，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果及時(shí)調(diào)整免疫程序，對(duì)于gE抗體陽(yáng)性豬堅(jiān)決淘汰，逐步建立無(wú)PRV野毒株感染豬群。

4.2 加強(qiáng)生物安全措施

豬場(chǎng)應(yīng)根據(jù)自身?xiàng)l件建立一套科學(xué)、合理、完整的生物安全體系，豬群要按品種、性別、體重等進(jìn)行分群飼養(yǎng)，豬場(chǎng)外圍、內(nèi)部圈舍、生產(chǎn)工具、人員和車輛的出入等均要進(jìn)行嚴(yán)格消毒，豬場(chǎng)內(nèi)應(yīng)保證有兩種以上消毒藥物，并交替使用。豬場(chǎng)內(nèi)嚴(yán)禁飼養(yǎng)犬、貓，并做好滅鼠工作，防止鼠類、犬、貓等動(dòng)物攜帶潛在病毒。

4.3 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與環(huán)境衛(wèi)生

在飼養(yǎng)管理方面，供給科學(xué)合理、營(yíng)養(yǎng)均衡的飼料，蛋白質(zhì)、能量、氨基酸、礦物質(zhì)和維生素含量均要達(dá)到飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的要求，嚴(yán)禁飼喂霉變飼料，并合理選用一定的保健藥物，防止各種營(yíng)養(yǎng)缺乏征的發(fā)生，使豬群具有發(fā)育完善的主動(dòng)免疫系統(tǒng)、較強(qiáng)的免疫力和抗應(yīng)激能力。在豬場(chǎng)環(huán)境衛(wèi)生方面，定期對(duì)圈舍進(jìn)行清理打掃，及時(shí)處理糞尿，保持圈舍內(nèi)干燥、通風(fēng)，使豬群在良好的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生下保持最佳的生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)。

4.4 采用“自繁自養(yǎng)”的養(yǎng)殖模式

養(yǎng)殖場(chǎng)可逐步選擇品種優(yōu)良的種豬和母豬進(jìn)行自繁，繁殖的仔豬自養(yǎng)，“自繁自養(yǎng)”的養(yǎng)殖模式可有效防止購(gòu)買豬攜帶PRV變異毒株，并對(duì)自己繁殖仔豬的體質(zhì)、品種特性、疫病防控狀況比較了解，便于以后的飼養(yǎng)管理與防疫。如必須引進(jìn)或調(diào)進(jìn)種豬以及仔豬，則應(yīng)嚴(yán)格進(jìn)行PRV變異毒株感染的檢測(cè)，嚴(yán)格消毒和隔離觀察一段時(shí)間，確認(rèn)無(wú)病后才可進(jìn)入場(chǎng)區(qū)。

4.5 加強(qiáng)其它致病原的控制

PRV變異毒株常常與豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV2）等混合感染，增加疫病診斷與防控難度，控制好CSFV、PRRSV、PCV2等致病原的發(fā)生與流行，可以大幅減輕PRV變異毒株的防控壓力。

5 結(jié)語(yǔ)

2011年以來(lái)，PRV變異毒株的流行給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，與以往流行的經(jīng)典毒株相比其毒力與致病性均顯著增強(qiáng)，但現(xiàn)使用的疫苗對(duì)抵御PRV變異毒株仍具有相當(dāng)程度的保護(hù)效果，增加現(xiàn)有疫苗的接種次數(shù)與接種劑量產(chǎn)生更堅(jiān)強(qiáng)、更持久的免疫保護(hù)可以有效防控當(dāng)前PRV變異毒株。故對(duì)于PRV變異毒株的流行不必過(guò)于恐慌，各養(yǎng)殖單位只要認(rèn)真做好綜合防控措施，在選擇優(yōu)質(zhì)疫苗和制定合理的免疫程序下，加強(qiáng)生物安全與飼養(yǎng)管理，仍可以有效防控PRV變異毒株。且針對(duì)PRV變異毒株的疫苗研究已經(jīng)有了突破性進(jìn)展，這將有助于我國(guó)對(duì)PRV變異毒株進(jìn)行有效防控。但疫苗免疫僅僅是PRV變異毒株防控的一個(gè)環(huán)節(jié)，只有采取“隔離、消毒、免疫、檢測(cè)、淘汰、撲殺”等一系列綜合性防控措施才能有效控制PRV變異毒株，逐步實(shí)現(xiàn)區(qū)域性凈化，最終達(dá)到全國(guó)凈化的目標(biāo)。