芋兒七的成分鑒定及抗氧化作用

王曉梅 王怡捷 趙立芳 段宇航 王金鎖

(寶雞文理學院化學化工學院，陜西省植物化學重點實驗室，陜西 寶雞 721013；*西安醫學院附屬寶雞醫院，陜西 寶雞 721000)

芋兒七，又名魚兒七、獅兒七、佛手七。為百合科延齡草屬植物延齡草TrillimtschonoskiiMaxim.的干燥根和根莖，是著名的太白山“七藥”之一。為多年生草本，生于海拔1300-2200米的山坡林下。性味：甘、辛，溫。功效：補肝腎，強筋骨，止痛，止血，生肌。治療肝腎虛損、腰膝酸軟、關節不利、肢體麻木、頭暈、目眩、月經不調、不孕不育、外傷出血等病[1,2]。芋兒七主要在當地民間使用，且具有顯著的療效，但對其所含化學成分及有效部位的研究卻鮮有報道。本實驗運用各種化學方法對芋兒七的化學成分進行初步的鑒定，并對芋兒七幾種提取物的抗氧化活性進行探討，以期為太白草藥的開發利用提供實驗室依據。

1 材料、試劑與儀器

芋兒七(購于眉縣)，經陜西中醫藥大學胡本祥教授鑒定。茚三酮(上海源葉生物公司)；α-萘酚(上海鼓臣生物)；三羥甲基氨基甲烷(上海探求生物技術有限公司)；鄰苯三酚(南京展云化工有限公司)；香草醛(阿拉丁試劑)；鹽酸，濃硫酸，酒石酸鉀鈉，無水碳酸鈉，次硝酸鉍，三氯化鐵，三氯化鋁，枸櫞酸，丙酮，醋酸鎂，95%乙醇，無水乙醇，氫氧化鈉，硫酸銅等均為市售分析純。

ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)；UV-1200紫外可見分光光度計(鄭州美譜達儀器有限公司)；DK-98-1電熱恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)；KQ5200E型超聲波清洗器(上海市超聲儀器有限公司)。

2 實驗方法

2.1 提取物的制備

稱取粉碎的芋兒七，分別以水、95%乙醇及乙酸乙酯為溶劑，以質體比1∶12浸泡提取芋兒七，超聲提取30 min，靜置后傾出上清液，沉渣再次提取，合并兩次的上清液，經濃縮、干燥，研成粉末備用。

2.2 芋兒七提取物化學成分的鑒定

2.2.1氨基酸的鑒定

取芋兒七提取物溶液1 mL分別于試管中加入1%茚三銅試液2-3滴，加熱煮沸4～5 min，觀察現象。

2.2.2皂苷的鑒定

取芋兒七提取物溶液2 mL于帶塞試管中，用力振搖3 min，觀察現象。

2.2.3糖、多糖或苷類的鑒定

α-萘酚試驗：取芋兒七提取物溶液1 mL加5%萘酚試液數滴振搖后，沿管壁滴入5-6滴濃硫酸，觀察現象。

斐林反應：取2支試管，加入斐林試劑A和B各1.0 mL搖勻后分別加入取芋兒七提取物，搖勻后置沸水浴中加熱數分鐘，取出冷卻，觀察現象。

本尼迪哥特反應：取芋兒七提取物1 mL于試管中，分別加入本尼迪哥特試劑2 mL置沸水浴中加熱數分鐘，取出冷卻，觀察各管顏色變化。

2.2.4鞣質及酚類的鑒定

三氯化鐵試驗：取芋兒七提取物溶液1 mL加1%三氯化鐵試液1～2滴，觀察現象。

香草醛試驗：取芋兒七提取物溶液點于濾紙上，干后滴加1%香草醛，觀察現象。

2.2.5黃酮及苷類的鑒定

鹽酸—鎂粉試驗：取芋兒七提取物溶液1 mL加少量鎂粉后加濃鹽酸4-5滴置沸水浴加熱2-3 min，觀察現象。

三氯化鋁試驗：取芋兒七提取物溶液點于濾紙上，干后噴霧1%三氯化鋁乙醇試液，在紫外燈下觀察現象。

硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗：取芋兒七提取物溶液1 mL在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10%枸櫞酸丙酮液各0.5 mL，蒸去丙酮后，在紫外燈下觀察現象。

堿液試驗：取芋兒七提取物溶液點于濾紙上，干后噴霧1%碳酸鈉，觀察現象。

2.2.6蒽醌類化合物的鑒定

Brongtrager’s反應：取芋兒七提取物適量，加2%氫氧化鈉溶液數滴觀察顏色變化。

濃硫酸反應：取樣品適量，滴加濃硫酸觀察顏色變化。

2.3 芋兒七提取物對超氧陰離子生成的影響

取10 mL試管，準確量取pH 8.2的0.1 mol/L Tris-HCl緩沖液3.6 mL，去離子水3 mL和芋兒七提取物溶液(濃度分別為2 mg/mL，1 mg/mL，0.5 mg/mL，0.25 mg/mL，0.125 mg/mL，0.0625 mg/mL)1 mL，混合均勻，于25 ℃水浴保溫20 min后，立即加入25 ℃預熱的3 mmol/L鄰苯三酚溶液0.2 mL，反應12 min后迅速倒入比色皿中，以0.1 mol/L Tris-HCl緩沖溶液作為參比，在345 nm處測定吸光度，記錄數據為A樣品，平行測三組，計算時取均值。以等體積去離子水代替鄰苯三酚溶液以扣除樣品本身的干擾，記錄數據為A樣品本體，平行測三組，計算時取均值。另設不加提取物溶液的空白組，記錄數據為A空白，平行測三組，計算時取均值。按下列公式計算抑制率。

3 結果與討論

3.1 芋兒七提取物中成分的鑒定

在茚三酮實驗中兩種提取物均呈紫色，說明芋兒七醇提物和水提物中含有氨基酸。

芋兒七醇提物、芋兒七水提物在泡沫實驗中均產生大量持久性的泡沫，說明兩種提取物都含有皂苷類物質。

在α-萘酚試驗中，兩種提取物均出現微紫色環，推斷芋兒七醇提物及水提物都含有糖類。在費林試驗和本尼迪特試驗中醇提物分別呈磚紅色和黃綠色，水提取物均呈黃色，提示芋兒七醇和水提物都含有還原糖。

在三氯化鐵試驗中，兩種提取物都出現藍綠色，在香草醛試驗中，芋兒七醇提物和水提物均呈現紅色斑點，說明芋兒七醇和水提物都含有酚類和鞣質。

表1 芋兒七提取物中黃酮類的鑒定Table 1 Identification of flavonoids of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

由表1可知在四種實驗條件下，提取物大多發生陽性反應，提示兩種提取物中均含有黃酮類物質。

在Brongtrager′s反應中，醇和水提物均產生紅色物質，在濃硫酸反應中兩種提取物均呈深棕色，說明兩種提取物均含有蒽醌類物質。

綜上可知，芋兒七中含有氨基酸，皂苷類，糖類，鞣質和酚類物質，黃酮類以及蒽醌類物質。

3.2 芋兒七提取物對超氧陰離子的抑制作用

圖1 芋兒七提取物對超氧陰離子的抑制作用Fig 1 Inhibition on superoxide anion of extractsfrom Trillium tschonoskii Maxim.

由圖1可以看出，芋兒七三種提取物對超氧陰離子的生成均有不同程度的抑制作用。其中乙酸乙酯提取物在各濃度均有強的抑制作用，抑制率隨著提取物濃度的增大而增高，抑制率由66.7%增大到82.1%。芋兒七乙醇提取物對超氧陰離子的產生同樣有一定的抑制作用，但各濃度的抑制率均低于相應濃度的乙酸乙酯提取物，最大抑制率為66.7 %。水提取物的抑制作用在低濃度時抑制作用很微弱，當水提取物濃度大于0.25 mg/mL之后，抑制率急劇增高，水提物濃度為2 mg/mL時，抑制率高達84.6%。

藥用植物中含有多種成分且具有各種藥理作用。糖類是植物藥中最常見的成分，其中多糖具有各種藥理活性[3,4]。黃酮類在藥用植物中分布很廣，且藥理作用多種多樣[5]，如黃芩素可降壓、抑菌、利尿。槲皮素、杜鵑素有祛痰作用。蒽醌苷類大都有瀉下作用，有些可抗菌、抗腫瘤。人參皂苷具有強壯作用，柴胡皂苷有止咳、解熱鎮痛等作用等。鞣質是具有復雜結構的酚類化合物，也是藥用植物中最常見的一類成分，鞣質在醫療上常用于收斂止血、止瀉、抗菌消炎等[6,7]。過氧化物質是一類性質活潑、具有很強氧化性的物質，超氧陰離子是生物體細胞在新陳代謝過程中，氧分子受單一電子還原的產物。超氧陰離子若生成過量可造成DNA、蛋白質的損傷進而生物功能的異常。

4 結 論

本實驗通過多種實驗方法測得芋兒七中含有氨基酸，皂苷類，糖類，鞣質和酚類物質，黃酮類以及蒽醌類物質。通過鄰苯三酚自氧化法，得知芋兒七乙醇提取物，芋兒七乙酸乙酯提取物，芋兒七水提取物對超氧陰離子的生成均有較強的抑制作用，進而可發揮細胞保護作用。對芋兒七化學成分及藥理作用的深入研究將在今后的工作中繼續進行。

[1] 寶雞市衛生局.太白山本草志[M]. 西安:陜西科學技術出版社,1987:317～318.

[2] 陜西省中草藥科研組.陜西中草藥[M]. 西安:陜西省出版社, 2000,40～47.

[3] 黃光輝,孫連娜.麥冬多糖的研究進展[J]. 現代藥物與臨床,2012,27(5):523～529.

[4] 鄧小云,丁登峰,戴美紅 等.植物多糖藥理作用研究進展[J]. 中醫藥導報,2006,12(9):86～88.

[5] 陳曉明，倪峰.植物黃酮類化合物對機體免疫調節作用研究進展[J]. 福建中醫藥大學學報, 2010, 20(2):69～70.

[6] 馮衛生,臧新鈺,鄭曉珂.鞣質的研究進展[J]. 中國新藥雜志,2009,18(14):1 308～1 311.

[7] 覃魯珊,趙海平,趙艷玲 等.大黃蒽醌與鞣質對大鼠肝臟的保護和損傷雙向作用[J]. 中國中西醫結合雜志,2014,34(6):698～703.