布魯氏菌病患者中PD-1和PD-L1的表達特點分析

汪露，劉芳，李輝

（新疆醫科大學第二附屬醫院檢驗科，新疆 烏魯木齊 830063）

臨床研究

布魯氏菌病患者中PD-1和PD-L1的表達特點分析

汪露，劉芳，李輝＊

（新疆醫科大學第二附屬醫院檢驗科，新疆 烏魯木齊 830063）

目的觀察布魯氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表達特點。方法選取我院2015年6月-2017年3月期間收治的53例布魯氏菌病患者（研究組）和同期來我院接受健康體檢的50例健康體檢者（對照組）作為研究對象，采集兩組對象血液標本，檢測PD-1、PD-L1表達水平。再根據病程的不同將研究組患者分為急性期組和慢性期組，對比兩個亞組患者的PD-1、PD-L1表達水平。結果研究組的PD-1、PD-L1表達水平分別為（25.09±4.82）%、（48.52±6.69）%，高于對照組的（10.98±5.01）%、（20.17±3.50）%（P＜0.05）。急性期組的PD-1、PD-L1表達水平分別為（33.72±5.13）%、（54.43±6.80）%，高于慢性期組的（17.60±4.88）%、（42.39±6.38）%（P＜0.05）。結論布魯氏菌病的發生可導致血清PD-1和PD-L1明顯升高，且PD-1和PD-L1的表達水平會隨著病程變化而變化。

布魯氏菌病；PD-1；PD-L1；病程；表達特點

布魯氏菌病為布魯氏菌入侵生物體后所引起的一種細菌傳染病，人畜均可患病，具有臨床癥狀變化多樣、病程長、并發癥多等特點，發生后可對患者身體健康和畜牧業發展造成寄到危害[1]。近年來，越來越多的研究[2,3]證實，布魯氏菌病的發生與患者機體細胞免疫功能下降存在明顯相關性。PD-1為免疫球蛋白超家族的一員，與PD-L1結合后能夠發揮免疫抑制作用，兩者表達變化能夠在一定程度上反映細胞免疫功能[4]。基于上述研究現狀，本研究對布魯氏菌病患者血清PD-1和PD-L1的表達特點進行分析，現將研究內容進行以下匯報。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2015年6月-2017年3月期間收治的53例布魯氏菌病患者和通氣來我院接受健康體檢的50例健康體檢者，并分別設為研究組和對照組。研究組中，男性28例，女性25例，年齡21歲-70歲，平均年齡（43.94±4.32）歲，急性期患者24例，慢性期患者29例。對照組中，男性26例，女性24例，年齡19歲-75歲，平均年齡（43.86±4.27）歲。兩組研究對象的一般資料間差異無統計學意義（P＞0.05），本研究已獲取倫理委員會批準，研究對象均簽署知情同意書。

1.2 研究方法 PD-1、PD-L1檢測試劑盒均購自上海酶聯生物科技有限公司。采集兩組研究對象空腹外周血10 mL，應用密度梯度法分離單個核細胞，使用PBS（磷酸緩沖鹽溶液）調節細胞密度，形成細胞混懸液，使細胞密度為每毫升1×107個，應用CD3+和CD4+標記PD-1、PD-L1。在每個反應管中加入100 μL細胞混懸液進行避光孵育，使用PBS洗滌兩次后將上清液去除，加入300 μL 1%多聚甲醛進行固定，使用流式細胞儀對CD3+和CD4+進行計數，測定PD-1、PD-L1陽性細胞占CD3+和CD4+細胞的比例即為PD-1、PD-L1的表達水平。

1.3 觀察指標 對比兩組研究對象血清PD-1、PD-L1的表達水平以及研究組中急性期組和慢性期組兩個亞組患者的血清PD-1、PD-L1表達水平。

1.4 統計學分析 應用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，計量資料采用均數±標準差（Mean±SD）表示，采用t檢驗。計數資料采用率（%）表示，采用卡方檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 研究組、對照組血清PD-1、PD-L1表達水平比較 研究組患者血清PD-1、PD-L1表達水平均較對照組健康體檢者高（P＜0.05），見表1。

2.2 研究組中兩個亞組患者的血清PD-1、PD-L1表達水平比較 研究組中急性期組患者的血清PD-1、PD-L1表達水平均較慢性期組患者高（P＜0.05），見表2。

3 討論

布魯氏菌病的主要傳染源為動物，傳播途徑較廣，包括呼吸道、消化道等，流行病學調查結果顯示，伴隨著畜牧業的快速發展，我國布魯氏菌病患者的發病率不斷上升，造成了多方面的負面影響。近年來，我國開展了較多關于布魯氏菌病的病理學機制研究，旨在為該疾病的早期診斷和治療提供參考依據，但在研究方向上很少涉及細胞免疫學。

PD-1為程序性細胞死亡因子，同時也是一種跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族，PD-L1為PD-1的配體。研究證實兩者在調節細胞免疫功能中發揮著重要作用。本研究對布魯氏菌病患者血清PD-1、PD-L1的表達特點進行分析，旨在通過該研究方向了解布魯氏菌病的免疫病理變化。研究發現免疫細胞表達的PD-L1、PD-1在結合后能夠使細胞內的ITIM和ITSM發生酪氨酸殘基磷酸化，發揮抑制免疫細胞增殖的作用，當機體免疫功能下降時，兩者在血清中的表達水平明顯上升。

表1 研究組、對照組血清PD-1、PD-L1表達水平比較（Mean±SD）

表2 研究組中兩個亞組患者的血清PD-1、PD-L1表達水平比較（Mean±SD）

本研究結果顯示布魯氏菌病患者的血清PD-1、PD-L1表達水平明顯高于健康體檢者，布魯氏菌病急性期患者的血清PD-1、PD-L1表達水平明顯高于處于疾病慢性期的患者。對上述研究結果進行分析和總結，本研究得出布魯氏菌病的發生可對細胞免疫功能產生影響，導致血清PD-1、PD-L1表達水平明顯升高，同時也提示我國臨床可根據血清PD-1、PD-L1表達水平輔助診斷布魯氏菌病和評估布魯氏菌病患者的治療效果。

[1]王師, 羅龍龍, 呂明, 等. PD-1/PD-L1信號通路及其在腫瘤中的應用[J]. 國際藥學研究雜志, 2015, 11(2):143-147.

[2]吳勇, 張天英, 宋瀏偉, 等. 抗PD-L1單抗的研制及其對乙型肝炎病毒的抑制效果初步研究[J]. 中國免疫學雜志, 2016,32(7): 1004-1008, 1012.

[3]彭金美, 李登云, 郭娟娟, 等. 抗豬PD-L1分子的單克隆抗體制備及免疫學特性分析[J]. 中國預防獸醫學報, 2013, 35(7):578-581.

[4]趙娜, 趙赤鴻, 榮蓉, 等. 布魯氏菌病血清學Brucellacapt和iELISA檢測方法的比較[J]. 中國人獸共患病學報, 2014(10):1045-1047, 1051.

新疆醫科大學科研創新基金項目（No.XYDCX201539）