抗宮炎片指紋圖譜在工藝控制中的應用

★ 廖春玲 吳燕紅 許妍（.江西省醫藥學校/江西省醫藥技師學院 南昌 33000；.江西省藥品檢驗檢測研究院 南昌 33009）

抗宮炎片收載于《中國藥典》2015年版一部，是一個具備廣泛作用且療效顯著的藥物，具有清熱、祛濕、化瘀、止帶之功效。用于濕熱下注所致的帶下病，癥見赤白帶下、量多臭味、宮頸糜爛。處方由廣東紫珠、烏藥及益母草三味藥干浸膏組成，將三種干浸膏粉碎成細粉，加輔料適量，混勻、制粒、干燥、壓制成片，包糖衣或薄膜衣制得。三種干浸膏分別由廣東紫珠、烏藥、益母草藥材加水煎煮，濾過，濃縮至稠膏狀，干燥制得［1］。中藥藥效是多成分、多靶點整體作用的結果，中藥指紋圖譜克服了僅僅依賴一種或幾種指標成分的物理化學性質鑒別中藥質量的局限性，從整體層面全面、準確地體現中藥質量［2］。本實驗運用抗宮炎片指紋圖譜，相對完整地反映出全方的化學成分，根據指紋圖譜提供的信息，以抗宮炎片浸膏中各特征峰與對應藥材折算后的相對峰面積為指標，比較有效成分群在制劑工藝步驟中的變化，并對企業實際生產中使用的三種干燥方式進行工藝優選。

1 儀器與試藥

1.1 儀器Agilent1100高效液相色譜儀，四元低壓梯度泵，DAD檢測器，Chemstation化學工作站；Sartorius BSA124S-CW電子天平；真空干燥機GKT_1000型（浙江省瑞安凱迪藥化機械有限公司）;熱風循環烘箱RH_27_C型（江蘇省江陰萬福機械有限公司）;微波真空干燥機BDMD_M_V_30型（河南勃達微波設備有限責任公司）。

1.2 試藥對照品連翹酯苷B、金石蠶苷、毛蕊花糖苷（批號111530-201309）、去甲異波爾定、鹽酸益母草堿，均購自中國食品藥品檢定研究院；對照品異毛蕊花糖苷、波爾定堿、牛新果堿由我院科研室提供。乙腈為色譜純，水為Milli-Q制備的純化水，磷酸為分析純。

2 抗宮炎片指紋圖譜特征峰的歸屬

2.1 供試品溶液的制備取抗宮炎片10片，除去包衣，研細，取約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，加熱回流1h，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，即得。

2.2 干浸膏溶液的制備根據供試品取樣量，按藥典抗宮炎片項下規定的處方比例及各藥材得膏率（廣東紫珠33%、烏藥18%、益母草14%），分別取廣東紫珠干膏約0.67g、烏藥干膏約0.16g和益母草干膏約0.18g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，同2.1供試品溶液的制備，即得。

2.3 藥材溶液的制備分別取與三種干浸膏相對應的廣東紫珠藥材約22.11g、烏藥藥材約2.88g和益母草藥材約2.52g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，同2.1供試品溶液的制備，即得。

2.4 對照品溶液的制備精密稱取連翹酯苷B、金石蠶苷、毛蕊花糖苷、異毛蕊花糖苷、去甲異波爾定、波爾定堿、牛新果堿、鹽酸益母草堿對照品適量，加50%甲醇制成每1mL含連翹酯苷B 0.15mg、金石蠶苷0.15mg、毛蕊花糖苷0.15mg、異毛蕊花糖苷0.15mg、去甲異波爾定25 μg、波爾定堿0.15mg、牛新果堿0.25mg及鹽酸益母草堿30μg的溶液，即得。2.5 通過對照品和對照藥材比對，13個特征峰中7個使用對照品歸屬，5個采用對照藥材歸屬。見圖1-2。

圖1 抗宮炎片指紋圖譜與各對照品色譜圖的比較

圖2 抗宮炎片指紋圖譜與對照藥材的色譜比較圖

3 有效成分群在工藝步驟中的變化

3.1 樣品測定由兩家企業提供的三味藥材、生產對應的干浸膏（廣東紫珠、烏藥、益母草藥材和干浸膏）及抗宮炎片各一批，按“2.2”方法制備，“2.1”項下色譜條件測定，計算3個不同工藝步驟特征峰的相對峰面積，比較抗宮炎片從原料到制粒到壓片過程有效成分群的變化。相對峰面積（%）=抗宮炎片（或三種干浸膏）特征峰折算后的峰面積/對應藥材折算后的峰面積；折算后峰面積=抗宮炎片（三種干浸膏或藥材）中各特征峰的峰面積/實際取樣量×理論取樣量；理論取樣量根據供試品取樣量，按照處方比例及各藥材得膏率計算各藥材和干浸膏的取樣量。如表1所示。

3.2 數據分析通過各工藝步驟特征峰的相對峰面積的計算，得出抗宮炎片的各特征峰的峰面積在每一步工藝過程都有較大損失，從藥材至干浸膏，各特征峰峰面積損失一半以上，從干浸膏到制粒過程，除2號峰和8號峰外，其余特征峰相對峰面積均損失過半，制粒后壓片的過程損失相對小。整個工藝1號峰去甲異波爾定剩余不到5%，3號峰鹽酸益母草堿剩余不到2%，2號峰和8號峰異毛蕊花糖苷僅剩30%左右，其余各特征峰剩余約10%，含量低的12號峰波爾定堿和13號峰牛心果堿在壓片后完全損失。

表1 各工藝步驟色譜峰相對峰面積比較

表2 不同干燥方法所得干浸膏色譜峰相對峰面積比較

4 三味干浸膏干燥方式的優選

因處方中三味干浸膏均為水提工藝，濃縮后干燥時間直接影響生產效率，考查生產工藝過程中干燥方法對干浸膏中各成份的影響并進行優選。

4.1 干浸膏溶液的制備取廣東紫珠、烏藥、益母草藥材按工藝規程方法分別進行提取、濃縮，然后三味藥的稠膏各分成三份，分別用方法1： 真空減壓干燥設備干燥；方法2：微波真空干燥設備干燥；方法3：先用熱風循環干燥再用真空減壓干燥三種干燥方法共制得干浸膏9份。

4.2 樣品測定取組方等比例生藥量樣品，按“2.2”方法制備，“2.1”色譜條件進行測定，以相應的藥材色譜圖為基準，計算三種干燥方法所得9份干浸膏中各特征峰的相對峰面積，如表2所示。

4.3 數據分析通過不同干燥方法所得干浸膏中各特征峰的相對峰面積的比較，得出廣東紫珠干浸膏采用方法2各特征峰的相對峰面積大于方法1和方法3；烏藥干浸膏方法1和方法3各特征峰的相對峰面積差異不大，且均大于方法2；益母草稠膏方法1各特征峰的相對峰面積最大，尤其是鹽酸益母草堿相對峰面積明顯大于其它兩種干燥方法。

5 討論

5.1 抗宮炎片各組份分析抗宮炎片是由廣東紫珠、烏藥、益母草三味藥材分別加水煎煮制膏后成型而得。方中廣東紫珠具有止血、鎮痛、抑菌、抗炎的作用［2］，其主要藥效成分為苯乙醇苷類化合物。烏藥主要含有揮發油、異喹啉生物堿及呋喃倍半萜及內酯等化學成分，其中生物堿類成分是烏藥的主要活性成分，現代藥理學研究表明其具有廣泛的抗炎和抗關節損壞等藥理活性［3］。益母草具活血調經，利尿消腫，清熱解毒的功效。研究表明［4］：益母草興奮子宮的有效成分為水蘇堿和益母草堿。

5.2 抗宮炎片指紋圖譜在制劑工藝生產過程中的應用

5.2.1 指紋圖譜中有效成分群在制劑工藝中的變化利用建立的指紋圖譜對歸屬的13種有效成分群在制劑工藝步驟中的變化進行研究，結果發現：各有效成分群從藥材到干浸膏再到制粒、壓片每一步都損失嚴重，尤其對于烏藥中含量低的生物堿類（如波爾定堿、牛心果堿）到成品中完全缺失，益母草中含量較高的生物堿類（如鹽酸益母草堿）到干浸膏完全缺失。

5.2.2 減少指紋圖譜中有效成分群在制劑生產過程中缺失的方法通過指紋圖譜對三味干浸膏中三種干燥方法的優選結果發現：廣東紫珠稠膏采用微波減壓干燥最優，廣東紫珠干浸膏為方中君藥，占處方比例的66.8%，使用微波減壓干燥不但能較好的保留有效成分群，并且大大節約生產時間，提高生產效率，降低生產成本。烏藥和益母草稠膏用真空減壓干燥更能保留有效成分群。

6 結語

藥品的質量是生產出來的而不是檢驗出來的，在大量實踐的基礎上通過確定的生產工藝流程和測試方法得到的指紋圖譜，不僅僅限于評價最終產品質量和判別真偽這一目的，而且可用于控制生產過程，根據各生產環節指紋圖譜的變化，考察操作條件對產品質量影響的程度和因素，從而確定工藝參數的合理范圍及重要工段［5-6］。