瑪咖酰胺快速測定方法應(yīng)用研究

楊 軍，王艷菊，白永文

（云南省麗江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測中心，云南 麗江 674100）

瑪咖酰胺快速測定方法應(yīng)用研究

楊 軍，王艷菊，白永文

（云南省麗江市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測中心，云南 麗江 674100）

主要以瑪咖中的瑪咖酰胺作為研究對象，通過試驗，建立了快速、高效的瑪咖酰胺液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。在研究中所選擇的瑪咖樣品均經(jīng)由石油醚-超聲輔助進行提取，并運用型號為ZORBAX C18的色譜柱對樣品進行分離，用紫外檢測器進行檢測，同時，將質(zhì)量分數(shù)為0.1%的甲酸作為流動相，運用乙腈-1 mml/L乙酸銨水溶液進行洗脫。最終結(jié)果表明，在質(zhì)量濃度為0.01～10.0 μg/L的瑪咖酰胺中具備線性關(guān)系，其定量限為20 ng/kg，檢出限為5.0 ng/kg。其中，加標量分別為0.1、0.2和0.02μg/kg時，回收率保持在92.0%～115.6%，這也進一步說明此方法滿足瑪咖酰胺分析測定要求。

瑪咖；瑪咖酰胺；快速測定；檢出限

瑪咖在我國的云南迪慶、麗江、昭通等地均有分布，而瑪咖酰胺作為瑪咖中的特征化合物，其生物活性呈現(xiàn)出多樣化的特點，對其特征進行測定時，多運用液相色譜方法，但由于瑪咖中蘊含的成分較為復(fù)雜，僅采用液相色譜方法測定的雜峰較多，也會干擾瑪咖酰胺的基質(zhì)。同時，也有相關(guān)文獻資料指出，運用液相色譜-高分辨質(zhì)譜方法可以有效對瑪咖酰胺的定性進行分析。在本文中，對瑪咖中瑪咖酰胺進行測定主要采用現(xiàn)代定量能力比較強的三重四極桿質(zhì)譜儀，并在此基礎(chǔ)上，結(jié)合超高效液相色譜對瑪咖酰胺質(zhì)譜斷裂的方式展開了研究，進而了解和分析了瑪咖酰胺特征光譜學(xué)信息，也為瑪咖中瑪咖酰胺更加深入的研究提供了參考。

1 快速測定實驗

1.1 實驗儀器和材料

1.1.1 實驗儀器

在本次實驗中所需要運用到的儀器有以下幾個：①高效液相色譜儀（配置紫外檢測器），島津LC-20A；②液質(zhì)聯(lián)用儀，島津LCMS-8030；③色譜柱為Waters XTerra C18（規(guī)格為250 mm×4.6 mm，5 μm）；④超聲清洗機（功率≥200 W）；⑤旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；⑥離心機（可放置50 mL離心管）。

1.1.2 實驗材料

在本次實驗中所涉及到的材料有以下幾種：①分析純的石油醚、色譜純的乙腈和純凈水；②5種瑪咖酰胺對照品（間甲氧基-芐基-亞麻酰胺、芐基-亞麻酰胺、間甲氧基-芐基-亞油酰胺、芐基-亞油酰胺、芐基-十六烷酰胺）；③其他使用的實驗材料的純度都在97%以上。

1.2 實驗方法

先對5種瑪咖酰胺對照品進行稀釋，運用甲醛進行定容得到混合的標準溶液，對溶液進行避光保存；將瑪咖中瑪咖酰胺用石油醚進行超聲輔助提取，旋蒸干燥后乙腈定容，主要運用乙腈對瑪咖酰胺進行溶解，并將之以待測溶液的方式呈現(xiàn)，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，紫外檢測器檢測。根據(jù)保留時間定性、與峰面積的比較進行定量。

5種瑪咖酰胺對照品液相分離示意圖如圖1所示。

圖1 5種瑪咖酰胺對照品液相分離示意圖

2 實驗結(jié)果討論

2.1 瑪咖中瑪咖酰胺的質(zhì)譜研究

運用乙腈-水對5種瑪咖酰胺對照品進行稀釋，并運用一級質(zhì)譜對5種瑪咖酰胺進行全面掃描，同時，以這些離子分別進行二級質(zhì)譜掃描，發(fā)現(xiàn)含有m/z91碎片離子，通過化學(xué)結(jié)構(gòu)展開推測，在m/z91瑪咖酰胺結(jié)構(gòu)中其長鏈脫落之后剩余的芐基基團，如圖2所示。

2.2 瑪咖酰胺快速測定方法的應(yīng)用

2.2.1 對提取條件的改進

對石油醚、乙腈、甲醛提取溶劑進行對比分析發(fā)現(xiàn)，石油醚對提取瑪咖酰胺的應(yīng)用效果最好，而乙腈和甲醛提取溶液效果相對較差。將超聲波應(yīng)用到提取過程中，可以提升提取物的分散效率，瑪咖酰胺作為低極性類化合物，可以吸附到細胞其他物質(zhì)之上，因此，將超聲波運用到其中可以有效對細胞壁進行破壞，使得游離細胞在提取溶劑中溶解，在最后實驗結(jié)果中也表明了超聲波能夠發(fā)揮很好的輔助效果。

圖2 瑪咖酰胺斷裂方式推導(dǎo)圖

2.2.2 對質(zhì)譜條件進行優(yōu)化

在上述中提到運用一級質(zhì)譜和二級質(zhì)譜進行掃描，但由于不同的瑪咖酰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)裂解的規(guī)律不一致，且m/z91在二級質(zhì)譜掃描中強度比較低，為了提高測定的穩(wěn)定性，需要選擇強度較高的瑪咖酰胺離子碎片，對其電壓優(yōu)化之后，得到MRM模式下質(zhì)譜條件。

2.2.3 對色譜條件進行優(yōu)化

由于瑪咖中瑪咖酰胺的化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含了長鏈脂肪酸結(jié)構(gòu)，并且這一結(jié)構(gòu)的化學(xué)極性較小，在C18柱上保留的時間比較長，根據(jù)實驗顯示結(jié)果，將甲醛-水作為測定的流動相，延長了出峰的時間，在這過程中所需要使用的甲醛比例也比較大，因此，在實驗中盡量選擇乙腈，其具有很好的洗脫效果，且縮短了出峰時間。

2.3 線性范圍及檢出限

對5種瑪咖酰胺對照品稀釋成不同的濃度，并根據(jù)不同種瑪咖酰胺的峰面積對不同濃度的瑪咖酰胺進行線性回歸。由于瑪咖樣本身含有一定的瑪咖酰胺，且含量高低不同，因此，在定量限和檢出限時，樣品質(zhì)量為0.5 g，以3倍和10倍信噪比對瑪咖酰胺的定量限和檢出限進行有效判定，最終實驗結(jié)果顯示瑪咖酰胺的相關(guān)系數(shù)較好，瑪咖酰胺的檢出限也比較低，可以滿足瑪咖中瑪咖酰胺快速測定要求。

2.4 精密度及回收率

上述樣品稱取0.5 g，并根據(jù)其定量限以1倍、5倍、10倍定量限作為添加濃度，對瑪咖酰胺開展回收實驗。對5種瑪咖酰胺分別進行3次回收實驗，并對其回收率進行計算和記錄。最終結(jié)果顯示，瑪咖酰胺的回收率在92.0%～115.6%，相比標準差的范圍在6.1%～12%，符合其測定的要求。

3 結(jié)論

本文對瑪咖中瑪咖酰胺的快速測定方法進行了應(yīng)用研究，主要通過實驗的方式展開，以瑪咖酰胺在高效液相中的特征光譜作為快速測定的基礎(chǔ)，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方式，選擇石油醚作為瑪咖酰胺的提取溶液，超聲波在其中發(fā)揮了輔助作用，并結(jié)合MRM監(jiān)測模式，可以快速、有效地對瑪咖酰胺進行定性和定量分析，從而實現(xiàn)瑪咖中瑪咖酰胺的快速測定分析。

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R284

A

10.15913/j.cnki.kjycx.2018.02.152

2095－6835（2018）02－0152－02

張思楠〕