有絲分裂原活化蛋白激酶信號通路介導(dǎo)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪后水通道蛋白4的表達①

千超，劉鋒，肖學(xué)謙，李峰，高喜松，黨連鋒，張毓

有絲分裂原活化蛋白激酶信號通路介導(dǎo)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞氧糖剝奪后水通道蛋白4的表達①

千超，劉鋒，肖學(xué)謙，李峰，高喜松，黨連鋒，張毓

目的探討有絲分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是否介導(dǎo)缺血后大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞水通道蛋白4(AQP4)的表達。方法分離培養(yǎng)新生Sprague-Dawley大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞。第2代細(xì)胞分成對照組、氧糖剝奪(OGD)組和阻斷組。后兩組復(fù)制OGD 5 h后復(fù)氧模型，12 h后阻斷組分別換入含U0126(1 μmol/L和10 μmol/L,U1組和U10組)、SP600125(1 μmol/L和10 μmol/L,SP1組和SP10組)和SB203580(1 μmol/L和10 μmol/L,SB1組和SB10組)的培養(yǎng)液。復(fù)氧后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、8 h和12 h檢測OGD組細(xì)胞體積，復(fù)氧后0.5 h、1 h、1.5 h、8 h和12 h Western blotting法檢測OGD組AQP4表達；復(fù)氧后24 h，檢測各組乳酸脫氫酶(LDH)活性，Western blotting法檢測各組AQP4，磷酸化細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和p38 MAPK(p-p38 MAPK)表達。結(jié)果復(fù)氧后1.5 h、2 h、3 h和4 h時，OGD組細(xì)胞體積較對照組顯著增大(P＜0.001)，OGD組AQP4水平較對照組顯著升高(P＜0.001)，并在復(fù)氧后1.5 h達到峰值。OGD組p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK、AQP4水平較對照組顯著增加(P＜0.001)，阻斷組p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK較OGD組顯著下降(P＜0.001)，SB10組AQP4較OGD組顯著下降(P＜0.001)。除SP1組、SB1組外，各干預(yù)組LDH活性較OGD組顯著下降(P＜0.01)，SB10組最低(P＜0.001)。結(jié)論MAPK信號通路，特別是p38 MAPK可介導(dǎo)大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4蛋白表達，加重細(xì)胞壞死。

氧糖剝奪；星形膠質(zhì)細(xì)胞；有絲分裂原活化蛋白激酶；信號通路；水通道蛋白4；水腫；大鼠

水通道蛋白4(aquaporins 4,AQP4)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)的水運輸中起重要作用[1-2]，并在腦星形膠質(zhì)細(xì)胞中高表達[3]。近年研究表明，調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞AQP4的表達可能是治療腦水腫的新策略[4]。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)是調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓的重要信號通路，動物研究表明，缺血性腦組織中MAPKs的表達及其磷酸化水平發(fā)生變化[5-6]；……