應(yīng)用大鼠模型研究原花青素治療脊髓損傷的療效①

蘇 航，唐華羽，王崇禧

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨外三科，黑龍江 佳木斯 154003)

應(yīng)用大鼠模型研究原花青素治療脊髓損傷的療效①

蘇 航，唐華羽，王崇禧

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院骨外三科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的: 研究應(yīng)用原花青素后，脊髓損傷大鼠的后肢肌力及活動(dòng)能力能否得以提高。方法:取用成年雌性的Wistar大鼠30只，將其分為I, II, III組，每組10只。大鼠都使用艾倫(Allen)法造成脊髓撞擊傷，傷后 第I組腹腔內(nèi)給藥原花青素， 第II組腹腔內(nèi)給藥為地塞米松，第 III組應(yīng)用等量的氯化鈉鹽水。在制模成功后分別在第1天, 第3天, 第5天對(duì)每組大鼠進(jìn)行BBB評(píng)分，并測(cè)定其超氧化物歧化酶(SOD)的含量值。結(jié)果：BBB評(píng)分顯示，術(shù)后第3天和第5 天, 將 I， II組與III組進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)前兩組后肢運(yùn)動(dòng)恢復(fù)情況比第III組更為良好(P<0.05)。第5天時(shí)，I組與II，III組相比較，I組SOD活性數(shù)值升高較為明顯。結(jié)論：原花青素能夠改善脊髓打擊傷后大鼠的生存情況，使其下肢活動(dòng)功能部分恢復(fù)。

原花青素;脊髓損傷;運(yùn)動(dòng)功能

脊髓損傷(SCI)是十分嚴(yán)重的疾病，多見于交通傷和戰(zhàn)傷等意外傷害[1]。臨床中繼發(fā)性脊髓損傷多是由外界暴力引起，并導(dǎo)致脊髓水腫，椎管內(nèi)血管出血和壓縮性骨折等一系列表現(xiàn)。損傷后機(jī)體產(chǎn)生大量的氧自由基，破壞神經(jīng)功能，影響下肢的運(yùn)動(dòng)及膀胱排尿。原花青素(Proanthocyanidin, PC)是一種多酚類化合物的總稱，有著清除體內(nèi)多余氧自由基的功效，其抗氧化作用極強(qiáng)[2]。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)大鼠分組

健康Wistar大鼠30只，雌性，體重(200±20) g，將30只大鼠使用Allen法制模，造成大鼠脊髓撞擊性損傷，分為3組，I組為實(shí)驗(yàn)組， II組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組，III組為對(duì)照組，每組均為10只。

1.2 主要試劑和儀器

①原花青素;②注射用地塞米松;③注射用青霉素鈉:④戊巴比妥鈉;⑤氯化鈉注射液；⑥SOD試劑盒；⑦TGL-16G臺(tái)式離心機(jī)。

1.3 模型制備

大鼠均健康成年，用1.5%戊巴比妥鈉30mg/kg腹部注射麻醉。大鼠采取俯臥位，固定于手術(shù)臺(tái)上并行常規(guī)術(shù)前準(zhǔn)備。在T10水平行后入路切口，逐層分離皮下組織及肌肉，最后充分暴露脊髓。行大鼠脊髓打擊(Allen法)，要求脊髓打擊的強(qiáng)度控制在10g×20mm。打擊后立馬可見大鼠雙后肢不停抽動(dòng)，10min后雙下肢無力萎軟，手術(shù)成功，逐層縫合切口。術(shù)后每天給予大鼠腹腔注射8×104U的青霉素鈉，療程為3d，目的是防止感染。大鼠蘇醒后將其放回溫度20℃的單籠中合理飼養(yǎng)，并進(jìn)行膀胱按摩直到大鼠可自行排尿。

1.4 治療方式

手術(shù)成功20min后 I組大鼠給以原花青素50mg/kg，以后每日給藥1次; II組術(shù)后20min給以地塞米松 ，劑量為30mg/kg，此后以5mg/kg·h每8h注射1次，共3次;術(shù)后III組給以注射相同體積的氯化鈉鹽水。三組給藥方式均為腹腔內(nèi)注射。

1.5 功能評(píng)定

各組大鼠分別在第1天, 第3天和第5天進(jìn)行測(cè)定。

1.5.1 BBB評(píng)分：大鼠置于平坦的實(shí)驗(yàn)方桌上，采用雙人盲法觀察大鼠后肢各關(guān)節(jié)的運(yùn)動(dòng)和軀干協(xié)調(diào)情況，然后將左右兩側(cè)得評(píng)分取平均值，將此作為最后評(píng)分。

1.5.2 血清中SOD數(shù)值測(cè)定：運(yùn)動(dòng)測(cè)試完成后，取大鼠動(dòng)脈血4mL, 使用離心機(jī)離心15min，3000r/min，接著取上清液冷凍保存，最后使用SOD試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

大鼠醒后肌張力極弱，不思飲食，小腹膨脹。手術(shù)后3d大鼠仍有較重尿潴留。此后飲食逐漸增加，活動(dòng)增多。經(jīng)過人工行膀胱按壓4d，全部大鼠基本恢復(fù)排尿功能。所有大鼠無其他不良并發(fā)癥。實(shí)驗(yàn)期3組樣本均少量死亡，給予及時(shí)補(bǔ)充，以保證實(shí)驗(yàn)順利完成。

2.2 BBB評(píng)分

評(píng)分前全部大鼠都達(dá)到正常值。術(shù)后1d, 第I 組與第III組相比較，沒有明顯差異。術(shù)后3d和5d, I, II, 組與III組相比均，前兩組恢復(fù)比第III組要好(P<0.05)。

表1 各組大鼠BBB評(píng)分結(jié)果分)

2.3 術(shù)后1d和3d, I ，II兩組SOD活性較III組升高(P<0.05)。術(shù)后5d, I 組SOD活性高于III組(P<0.05)。

表2 各組SOD活性數(shù)值

3 討論

脊髓損傷后功能恢復(fù)情況取決于脊髓能在多大程度上得以修復(fù)[3]。當(dāng)脊髓損傷后機(jī)體會(huì)產(chǎn)生數(shù)量較多的氧自由基，研究發(fā)現(xiàn)SOD可以減少機(jī)體內(nèi)的自由基數(shù)量，可以提示機(jī)體對(duì)自由基的清除消滅功能是否發(fā)揮正常[4]。原花青素具有的抗氧化活性作用是很強(qiáng)的，并能夠大量清除氧自由基，這使它穿過血-腦屏障的能力較強(qiáng)。本次實(shí)驗(yàn)研究顯示，原花青素能夠提高Wistar大鼠體內(nèi)SOD的含量值，而SOD又又可以減少機(jī)體的自由基損害，發(fā)揮其重要的防御作用，研究表明氧自由基的數(shù)量越少，神經(jīng)功能恢復(fù)的情況就越好[5]。原花青素的抗氧化作用得天獨(dú)厚，并且能大量清除體內(nèi)的自由基，相信原花青素可以更廣泛的用于藥品的研發(fā)。 原花青素可清除體內(nèi)過多的自由基，提高其SOD含量值，并改善BBB評(píng)分結(jié)果，因此具有使大鼠運(yùn)動(dòng)的功能得以恢復(fù)的作用，但實(shí)驗(yàn)中樣本數(shù)量還是過少，且藥物劑量不十分明確，需要加強(qiáng)改進(jìn)。

[1]楊建華，喬建民，李長德. 脊髓損傷模型的制備及行為學(xué)評(píng)分[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2009，32(6):26-27

[2]Bagchi D, Bagchi M, Stohs SJ, et al. Free radicals and grape seed proan- thocyanidin extract: importance in human health and disease preven-lion [J]. Toxicologv, 2000, 148(2-3): 187-197

[3]楊建華，陳杰，李長德. 大鼠脊髓全橫斷模型的研究及其評(píng)價(jià)[J].黑龍江醫(yī)藥科學(xué),2006，29(1):1-2

[4]Afonso V, Champy R,Mitrovic D, et al. Reactive oxygen species and superoxide dismutases role in joint diseases [J]. Joint Bone Spine, 2007, 74(4): 324-329

[5]鄭望茍，潘衛(wèi)紅，陳家祿.脊髓損傷后脊髓內(nèi)丙二醛含量變化及其與神經(jīng)功能損害的關(guān)系[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2004,19(2): 103-104

佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：YM2016_035。

蘇航(1990～)男，黑龍江寶泉嶺人，在讀碩士研究生。

唐華羽(1968～)男，黑龍江佳木斯人，在讀研究博士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail：hljtanghuayu@sohu.com。

R651.2

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1008-0104(2017)06-0061-02

2017-05-10)