MTHFR C677T 基因多態性在佳木斯地區健康人及復發性流產患者中的分布頻率①

方 芳，方 舟，沈慶明，荊洪英

(佳木斯大學附屬第一醫院藥劑科，黑龍江 佳木斯 154003)

MTHFR C677T 基因多態性在佳木斯地區健康人及復發性流產患者中的分布頻率①

方 芳，方 舟，沈慶明，荊洪英

(佳木斯大學附屬第一醫院藥劑科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：探究MTHFR C677T基因在佳木斯地區健康人和復發性流產患者的基因型及等位基因的分布頻率。方法：采用熒光染色原位雜交方法檢測健康人與復發性流產患者的MTHFR C677T基因型。結果：健康人CC型、CT型、TT型分別為11.9%、46.6%、41.5%，C等位基因和T等位基因分別為35.2%和64.8%，流產患者CC型、CT型、TT型分別為24.3%、36.8%、38.9%，C等位基因和T等位基因分別為42.7%和57.3%。結論：佳木斯地區健康人和復發性流產患者的MTHFR C677T基因型及等位基因的分布頻率有顯著性差異。

MTHFR C677T；熒光染色原位雜交；復發性流產；等位基因

復發性流產(recurrent pregnancy loss,RPL)是指妊娠20周之前與同一性伴侶連續發生≥3次的自然流產，且不存在染色體、解剖、內分泌和自身免疫功能異常以及生殖道感染等病因，發病率約為1%～3%[1]。這種情況嚴重影響著孕婦。本文通過對居住在佳木斯及其周邊婦女的MTHFR(677C>T)多態性分布情況，研究復發性流產與MTHFR C677T基因多態性的關系，為復發性流產疾病的基因診斷和基因導向藥物治療探索出一條新的方法與手段。

1 資料與方法

1.1 研究對象

健康人：為我院育齡女性健康志愿者118例，無流產史及不良病史。流產患者：自2014-12～2015-10在我院計劃生育門診就診的患者144例，年齡26～39歲。入選試驗對象需使用EDTA真空采血管采集外周靜脈血5mL，用來檢測MTHFR C677T基因型。

1.2 方法

本文采用的方法是熒光染色原位雜交方法。(1)富集白細胞:取200μL新鮮全血加入1100μL氯化銨溶液中。顛倒幾次混勻后室溫放置5min。然后離心機3000r/min (700g) 離心5min，用移液槍吸出上清液，保留管底白細胞。(2)裂解保存:在富集了白細胞的管中加入50μL耀金保，用槍吹吸或震蕩試管混勻。(3)加樣:取1.5μL直接加入待測基因對應的耀金分試劑中，上機檢測。

1.3 統計學方法

采用SPSS 17.0軟件對數據進行處理，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為具有顯著性有統計學意義。

2 結果

MTHFR C677T基因型和等位基因分布情況，見表1。以下數據經SPSS 17.0軟件進行處理，健康人與流產患者CC/CT/TT三種基因型經χ2檢驗，(χ2=6.992，P<0.05)，C/T等位基因經χ2檢驗(χ2=3.090，P>0.05)，流產患者與健康人基因型分布之間的差異有顯著性。

表1 健康人和流產患者MTHFR C677T基因型及等位基因頻率分布(%)

本地區健康人與報道健康人CC/CT/TT三種基因型經χ2檢驗(χ2=79.436，P<0.01)，C/T等位基因經χ2檢驗(χ2=83.351，P<0.01)，本地區健康人與報道健康人基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。流產患者與報道流產患者CC/CT/TT三種基因型經χ2檢驗(χ2=62.827，P<0.01)，C/T等位基因經χ2檢驗(χ2=9.395，P<0.01)，流產患者與報道流產患者基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。

從上述結果可以看出：本地區人與報道的基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異具有高度顯著性，說明復發性流產的發生存在地域性差異。本地區T等位基因所占比例為64.8%，說明T等位基因在佳木斯東部地區突變率較高。

3 討論

3.1 MTHFR C677T是一個常見的突變位點， Frosst[3]等在1995年首次發現。可分為野生型(CC)、突變雜合型(CT)和突變純合型(TT) 3種。MTHFR C677T位點發生突變的基因為第677位上的胸腺嘧啶取代了胞嘧啶，造成了丙氨酸被纈氨酸取代，最為顯著的表現為MTHFR酶活性下降，是他們改變了MTHFR的氨基酸結構，影響了MTHFR酶的活性，這就使得同型半胱氨酸無法正常完成向蛋氨酸的轉化，造成血中同型半胱氨酸的含量明顯升高[4]。

3.2 首次報道佳木斯東部地區女性與復發性流產患者的MTHFR C677T基因分布情況，CC型、CT型、TT型分別為11.9%、46.6%、41.5%，C等位基因和T等位基因分別為35.2%和64.8%，與報道有顯著性差異，說明可能存在地域性差異，說明T等位基因在佳木斯東部地區突變率較高。

3.3 本地區流產患者CC型、CT型、TT型分別為24.3%、36.8%、38.9%，C等位基因和T等位基因分別為42.7%和57.3%；報道流產患者CC型、CT型、TT型分別為30.8%、43.4%、25.8%，C等位基因和T等位基因分別為52.5%和47.5%。經χ2檢驗，流產患者與報道流產患者基因型分布及等位基因頻率分布之間的差異有高度顯著性。

3.4 隨著分子生物學和精準醫學的快速發展，疾病與一些藥物相關的基因多態性之間的相關性研究越來越受關注[5～9]，為臨床疾病的診斷與治療提供了依據。本文通過檢測MTHFR C677T堿基突變，比較了佳木斯地區復發性流產患者和健康人之間的差異。結果顯示，佳木斯地區健康人與復發性流產患者3種基因型分布及等位基因分布頻率都具有顯著性，但由于檢驗數據比較少，有待進一步探討本地區MTHFR C677T與復發性流產之間的關系。

[1]Strirrat GM. Recurrent misscarriage.Ⅱ:clinical associations,causes and management[J].Lancet,1990,336(8717):728-733

[2]孫玲玲，方芳，荊洪英，等.MTHFR C677T基因多態性與復發性流產相關性的Meta分析[J].黑龍江醫藥科學，2015，38(6)：52-55

[3]Frosst P,Blom HJ,Milos R, et al. A candidate genetic risk factor for vascular disease:a common mutation in methylenetetrahydrofolate[J]. N-at Genet,1995,10(2):111-113

[4]Perales D,Martinez de J,Villarreal LE,et al. Folic acid levels homocysteine and polymorphism of methylenetetrahydrofolate reductase enzyme (MTHFR)in patients with preeclampsia and eclampsia[J]. Gineco Lobstet Mex,2001,23(69):6-11

[5]左璐，方芳，楊軍，等.佳木斯地區健康人群與高血壓患者CYP3A4*1G基因多態性分析[J].黑龍江醫藥科學，2015，38(1)：7-9

[6]杜美霖，方洪壯，張天英，等.ACE基因多態性在佳木斯正常人高血壓患者中的分布[J].黑龍江醫藥科學，2015，38(3)：161

[7]田寅，太史靖華，國玉芝，等.CYP1B1SNPrs1056827,rs1056836基因多態性與乳腺癌關聯研究頻率[J].黑龍江醫藥科學，2015，37(5)：1-2

[8]荊洪英，董立華，谷繼卜，等.癲癇患者CYP2D6*10基因多態性分析[J].黑龍江醫藥科學，2012，35(5)：3-4

[9]王歆，方舟，方芳，等.糖尿病患者IRS-1和MTHFR基因多態性分析[J].黑龍江醫藥科學，2015，38(6)：46-47

佳木斯大學科學技術面上項目，編號：13Z1201549。

方芳(1979～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，主管藥師。

荊洪英(1958～)女，黑龍江佳木斯人，學士，主任藥師，碩士研究生導師。E-mail:wjinghongying@126.com。

R714.21

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1008-0104(2017)06-0054-02

2017-03-16)