肺腺癌小活檢標本EGFR表達及病理特征分析①

陳秀嬋，鄒陽強

(貴州航天醫院，貴州 遵義 653000)

肺腺癌小活檢標本EGFR表達及病理特征分析①

陳秀嬋，鄒陽強

(貴州航天醫院，貴州 遵義 653000)

目的： 探討肺腺癌表皮生長因子受體(EGFR)基因突變的臨床病理特征及在免疫組織化學(IHC)中EGFR特異性抗體表達和實時熒光定量(PCR)之間的關系。方法：收集了病理明確確診的187例肺腺癌臨床病例資料，用IHC檢測EGFR特異性抗體表達及實時熒光定量PCR檢測EGFR基因突變。結果：187例肺腺癌中EGFR基因突變女性高于男性，年齡大于>55歲者高于≤于55歲者，不吸煙者高于吸煙者，肺穿刺標本高于纖支鏡活檢標本，胸腔鏡下胸膜穿刺組織無區別。其中IHC陽性69例(36.7%)，PCR C陽性61例(32.6%)，有8例IHC陽性患者PCR為陰性。以PCR結果標準，IHC和PCR符合率為88.4%。結論：IHC檢測EGFR表達和PCR檢測EGFR基因突變在性別、年齡分布、有無吸煙史及標本來源上的差異有統計學意義(P<0.05)。IHC檢測EGFR特異性抗體表達和PCR檢測EGFR基因突變具有較高的一致性，可以作為評估肺腺癌EGFR 基因突變的一個簡單，低廉的篩選方法。

肺腺癌；表皮生長因子受體；基因突變；免疫組織化學；實時熒光定量PCR

表皮生長因子受體(EGFR)基因突變是肺腺癌具有治療和預測作用的分子標志物，我們總結了187例肺腺癌患者小活檢組織標本中EGFR特異性抗體表達及基因突變狀態，并探討其臨床病理特征關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了我院2013-03～2017-04病理科存檔187例肺腺癌。標本源系CT引導下肺穿刺98例、纖支鏡活檢75例，經胸腔鏡胸膜活檢14例。所選病例均為中晚期腺癌，且所有入選標本均經4%中性緩沖甲醛液固定，石蠟包埋，常規進行病理組織學檢查確診。

1.2 免疫組織化學(IHC)檢測EGFR特異性抗體表達

采用手工操作，抗體編號RMA-0554(MX公司)，按0照抗體試劑盒說明書進行檢測。結果判讀標準：采用二元判讀法。即EGFR陽性：腫瘤細胞中胞膜/胞質中存在顆粒狀染色；EGFR陰性：腫瘤細胞胞膜/胞質內不存在強的顆粒狀染色。

1.3 實時熒光定量PCR(ADx-ARMS)檢測EGFR基因突變

檢測儀器：ABI-7500,試劑盒：采用廈門艾德生物醫藥科技有限公司生產的人類EGFR基因21種突變檢測試劑盒，以熒光PCR法進行檢測；質量控制：DNA樣本OD值(260/280)=1.86。檢測EGFR基因的外顯子18、19、20和21，然后進行PCR產物測序和基因突變分析突變。具體操作方法參照試劑盒說明書。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 IHC和EGFR檢測結果

187例肺腺癌患者中，CT引導下穿刺標本98例中(52.4%)，支氣管鏡標本75例(40.1%)，胸腔鏡胸膜活檢14例(7.5%)。其中，原發灶來源173例(92.5%)，轉移灶14例(7.5%)。IHC陽性69例(36.7%)，PCR C陽性61例(32.6%)，有8例IHC陽性患者PCR為陰性。以PCR結果標準，IHC和PCR符合率為88.4%。

2.2 IHC檢測EGFR表達、PCR檢測EGFR基因突變與臨床病理特征的關系

IHC檢測EGFR表達和PCR檢測EGFR基因突變在性別、年齡分布、有無吸煙史及標本來源上的差異有統計學意義(P<0.05)：女性高于男性，年齡大于>55歲者高于≤于55歲者，不吸煙者高于吸煙者，肺穿刺標本高于纖支鏡活檢標本，胸腔鏡下胸膜穿刺組織無區別。IHC檢測EGFR特異性抗體表達和PCR檢測EGFR基因突變具有較高的一致性，可以作為評估肺腺癌EGFR基因突變的一個簡單，低廉的篩選方法。見圖1～3。見表1。

圖1 肺腺癌H-E(× 100)

圖2 肺腺癌EGFR IHC陽性(×100)

圖3 肺腺癌EGFR基因突變曲線圖

分組總例數187IHC陽性陰性χ2值PPCR陽性陰性χ2值P性別 男10231(30．4)71(69．6)4．08<0．0525(24．5)77(75．5)6．72<0．05 女8538(44．7)47(55．3)36(42．4)49(57．6)年齡(歲) <558324(28．9)59(71．1)4．09<0．0521(25．3)62(74．7)4．15<0．05 ≥5510445(43．3)59(56．7041(39．4)63(60．6)吸煙史 有8926(29．2)63(70．8)4．31<0．0522(24．7)67(75．3)4．23<0．05 無9843(43．9)55(56．1)38(38．8)60(61．2)標本來源 纖支鏡7519(25．3)56(74．7)6．36<0．0516(21．3)59(78．7)7．4<0．05 CT9843(43．9)55(56．1)40(40．8)58(59．2)胸腔鏡145(35．7)9(64．3)5(35．7)9(64．3)

3 討論

相關研究顯示表皮生長因子受體(EGFR)基因突變是肺腺癌具有治療預測作用的分子標志物，GEFR突變可致其信號傳導通路活性異常增強，使細胞表現出一系列的惡性表現，而EGFR酪氨酸激酶抑制劑(TKIs)可特異性地阻斷EGFR活化，因其較易通過血腦屏障，可競爭性結合三磷酸腺苷，抑制 EGFR 細胞內酪氨酸激酶區域的自身磷酸化，阻斷下游信號傳遞，抑制腫瘤細胞增殖、侵襲及轉移[1]，從而遏制腫瘤的惡性增殖，使得EGFR突變患者對EGFR-TKIs靶向藥物敏感而受益。

本組187例肺腺癌觀察中，EGFR基因突變在女性、年齡偏大、無吸煙史者中有關，這與文獻中EGFR基因突變在腺癌、女性、及非吸煙者占優勢[2]是相符合的。而肺穿刺標本EGFR表達高于纖支鏡活檢，這與肺腺癌較高發生肺周圍部位有關。本組研究中肺腺癌EGFR基因突變率為32.6%，略低于文獻中國大陸 1195例患者評估肺腺癌 EGFR基因突變的檢出率(38.1%)[3]和李明娜等的研究中肺腺癌的突變率38. 2% ( 39 /102) ，較明顯低于國內鄭軍等非小細胞肺癌EGFR基因突變的臨床意義研究，其肺腺癌EGFR突變率為50.3%(P<0.05) ，考慮本組病例標本源為穿刺標本，組織細小，細胞數不足及腫瘤組織僅代表局部有關，其統計學分析還需日后增加樣本及多樣化標本來進一步探討。

研究表明，超過半數以上的的非小細胞肺癌就診時也為中晚期[4]，傳統手術、放化療療效均較差而且缺乏特異性，患者中位生存期僅為7-8月，而EGFR基因在肺腺癌中有高的突變，這就使得肺腺癌EGFR基因突變患者在EGFR-TKIs靶向藥物治療中明顯獲益，部分患者生存期可達3年[5]。本組病例為中晚期腺癌，無明顯手術機會，預后差，生存率低的特點，其EGFR基因突變主要涉及18、19、20、21四種外顯子的共29種突變，其中包括27種敏感突變和2種耐藥突變，而本組EGFR基因突變的患者大部分從EGFR-TKI靶向藥中受益。值得一提的是，14例經胸腔鏡胸膜活檢標本中，EGFR抗體表達和基因突變的符合率為100%，在這組小數據中，EGFR在轉移性肺腺癌中的高表達是引人注目的，期待著更大數據的觀察。同樣有研究顯示，EGFR 蛋白在肺腺癌淋巴結轉移組中高表達，可作為預測肺腺癌淋巴結轉移的指標[6]，其在預后中起作重要的作用。

綜上所述， EGFR基因突變是肺腺癌具有治療預測作用的分子標志物，更在女性、高年齡及無吸煙者中占有優勢，對肺腺癌的靶向治療提供了有力的證據，使得肺腺癌患者在EGFR-TKI靶向藥中受益，避免了傳統放化療對正常細胞的傷害的治療模式，越來越受到腫瘤學術界和廣大患者的認可，在預后方面能延長患者的預期壽命，從而達到療效最佳，毒性最低的效果。

[1]劉萍．表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑聯合放療治療非小細胞肺癌腦轉移臨床觀察[J]． 中華實用診斷與治療雜志，2013，27(7)：693-694

[2]Yoshida T, Ishii G, Goto K, et al. Solid predominant histology predicts EGFR tyrosine kinase inhibitor response in patients with EG?FR mutation-positive lung adenocarcinoma[J]. Cancer Res ClinOncol, 2013, 139(10):1691-1700

[3]Huang YS, Yang JJ, Zhang XC, et al. Impact of smoking status andpathologic type on epidermal growth factor receptor mutations inlung cancer[J]. Chin Med J, 2011, 124(16):2457-2460

[4]Gyula O，Andras B，Zoltan B，et al． Basie prineiples for the prevention，diagnosis and therapy of lung cancer[J]．Magy Onkol，2012，56(2)：114-132

[5]李龍蕓，鐘巍，廖美琳，等． 中國易瑞沙擴大用藥項目中晚期非小細胞肺癌長期生存患者的研究[J]． 中國肺癌雜志，2012，15(6)：332-339

[6]陳瑚，肺腺癌 EGFR 基因突變與 EGFR 蛋白和 EGFR 突變特異性抗體表達情況及意義[D]. 福建：福建醫科大學基礎醫學院病理學與病理生理學,2014

陳秀嬋(1975～)女，貴州遵義人，本科，副主任醫師。

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1008-0104(2017)06-0092-02

2017-09-27)