浣熊感染蠟樣芽胞桿菌的病原鑒定及病因分析

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(杭州市虎跑路杭州動物園，浙江杭州 310008)

浣熊感染蠟樣芽胞桿菌的病原鑒定及病因分析

陳玎玎，應志豪，黃淑芳，王才益，楊忠興，龔利洋

(杭州市虎跑路杭州動物園，浙江杭州 310008)

杭州某動物園同籠飼養的兩只浣熊在10 d內先后因不明原因死亡，后經體內分離得到的細菌，診斷鑒定為蠟樣芽胞桿菌感染，經感染試驗表明，該菌對小鼠有相同致病性，且癥狀與自然發病浣熊類似。現將有關研究分析報告如下。

1 材料與方法

1.1細菌鑒定 無菌采集死亡浣熊心肝肺脾組織接種于普通瓊脂培養基，腸內容物接種于中國藍瓊脂培養基及SS培養基。37℃培養24 h。取菌落涂片染色鏡檢鑒定菌株。

1.2藥敏試驗 采用K-B紙片擴散法將濃度為0.5麥氏濃度(1.5×108cfu/mL)菌液涂布接種于普通瓊脂平皿，37℃培養16-24 h后測量抑菌圈直徑，判定常用藥物敏感性。判斷依據：WS/T 125-1999紙片法抗菌藥物敏感試驗標準，并參照葡萄菌屬抑菌圈解釋標準。

1.3動物試驗

1.3.1菌液制備 食品安全檢測，蠟樣芽胞桿菌濃度不得超過105cfu/mL。采集生長對數期細菌，生理鹽水稀釋至1.0麥氏濃度(3×108cfu/mL)菌液備用。

1.3.2分組感染 雄性ICR小鼠16只，隨機分為三組，空白對照組6只，其中3只口服0.2 mL生理鹽水，3只腹腔注射0.2 mL生理鹽水。腹腔感染組5只，分別腹腔注射0.2 mL備用菌液。口服感染組5只，分別灌服0.2 mL備用菌液。每日觀察小鼠發病情況。120 h后處死小鼠并接種心肝肺，腸道段觸片染色檢查。

2 結果與分析

2.1臨床特征與剖檢病理變化 詳見圖1、圖2。

圖1 浣熊1號肺

圖2 浣熊2號肺

由圖1可見，浣熊1號，于2016年6月中旬突然死亡。剖檢可見肺出血、肝臟硬化，其他實質臟器均有出血。由圖2可見，浣熊2號，于2016年6月下旬出現昏迷，呼吸短促，疑似中暑，經搶救無效死亡。剖檢可見肺部出血伴有氣腫，腸系膜出血，腎臟皮髓質出血，肝臟腫大硬化。

2.2細菌學鑒定 詳見圖3、圖4、圖5。

圖3 浣熊1號細菌形態(400×)

圖4 浣熊2號細菌形態(400×)

圖5 死亡小鼠心肌及肺出血

采集菌落涂片染色鏡檢可見革蘭氏陽性桿菌，成短鏈或長鏈。分離純化后的菌落在普通瓊脂平皿上呈圓形或近似圓形、質軟、稍有光澤的白色融蠟狀菌落，直徑5-7 mm。經質譜儀鑒定為蠟樣芽胞桿菌(Bacilluscereus)。

2.3藥敏試驗 兩株細菌藥敏結果均為環丙沙星、慶大、頭孢拉定、丁胺卡那敏感，復方新諾明、頭孢呋辛、頭孢噻肟耐藥。

2.4動物試驗 口服組1只小鼠在48-72 h內死亡(感染后65 h)，腹腔注射組3只小鼠在48-72 h內死亡(感染后70 h，73 h，73 h)，1只小鼠在72-96 h內死亡(感染后80 h)，空白組未見死亡。死亡小鼠均有不同程度心肌及肺出血，空腸出血，部分小鼠腸道出血不明顯。以上小鼠心肝肺接種物及腸道觸片均發現有蠟樣芽胞桿菌。

120 h后處死的小鼠中，口服組、腹腔注射組剩余小鼠心肝肺接種培養物未見細菌生長，腸道觸片發現有蠟樣芽胞桿菌。

3 小結與討論

蠟樣芽胞桿菌是一種革蘭氏陽性兼性需氧桿菌，廣泛存在于土壤等環境中。以蠟樣芽胞桿菌為代表的微生態制劑(MEA)多被用于非消化性食品添加劑以緩解抗生素過量使用所導致的腸道微生態系統失調和降低畜禽產品抗生素藥物殘留等。蠟樣芽胞桿菌可引起有限性食物中毒，主要引起胃腸型感染，如嘔吐、腹瀉等，也可導致非腸胃型感染，合成壞死性毒素，如溶血素和磷脂酶。在機體免疫力低下或有消耗性疾病時，可作為條件致病菌導致菌血癥、敗血癥、腦膜炎、肺炎、肝膿腫等。

蠟樣芽胞桿菌主要通過污染糧食加工品等含淀粉較多食物而引起中毒。通常的食品加熱烹調(熱沖擊)無法殺滅該菌株，芽胞會殘存并發芽，從而導致生產的食物受到污染。另外，食品受蠟樣芽胞桿菌污染后性狀往往無明顯改變，無異常氣味，因此事先難以被發現。

據本次小鼠試驗，口服組5例小鼠僅1例死亡，其余存活至120 h，腹腔注射組5例有4例死亡，一例存活至120 h，且存活小鼠體內未分離到該菌株，僅腸道內發現部分。該蠟樣芽胞桿菌菌株致死性在動物間有所差異，小劑量感染健康動物可自愈或不發病。

文獻顯示，從感染體身上分離出的蠟樣芽胞桿菌菌株往往對β-內酰胺類抗生素，甚至第三代先鋒霉素組抗生素會產生抗藥性，對林可霉素、萬古霉素、環丙沙星、紅霉素、慶大霉素和鏈霉素敏感。兩菌并未對頭孢拉定(先鋒霉素)抗藥。因此，可粗略認為其抗藥性不強。

通過小鼠感染試驗證實，從浣熊身上分離得到的菌株對健康小鼠具有致病致死作用，感染小鼠解剖癥狀與自然發病浣熊癥狀相似，且能從感染發病小鼠發病部位分離到相同菌株。因此，本研究認為，所分離的病原菌是引起浣熊發生死亡的致病菌。浣熊壽命較短，該同籠飼養的兩浣熊在浣熊中已屬老年，因此極有可能是兩只浣熊因抵抗力較弱感染蠟樣芽胞桿菌后導致菌血癥或敗血癥后死亡。

預防該病，籠舍可用百毒殺及漂白粉進行終末消毒。平時應做好常規消毒工作。條件允許者，可在籠舍消毒后空舍一段時間，避免細菌重復感染。老年動物由于免疫力、抵抗力下降，易因條件致病菌感染發病，因此平時應特別注意老年動物的日常飼養和觀察工作，做好預防保健。因蠟樣芽胞桿菌并不明顯改變食品性狀，因此在日常飼喂中，對含淀粉類食物，如顆粒飼料等，要求保證飼料優質新鮮，嚴禁使用霉變飼料；夏天要注意及時清理食物殘渣。

2017-02-24

S858.93

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1005-7307(2017)06-0033-002