細胞源H5亞型禽流感病毒滅活疫苗免疫效果試驗

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(1.浙江大學，浙江 杭州 310058；2.浙江省動物疫病預防控制中心； 3.杭州市蕭山區畜牧獸醫局)

試驗研究

細胞源H5亞型禽流感病毒滅活疫苗免疫效果試驗

吳贇竑1,2，吳雪軍2，陳星宇3，張紅麗2

(1.浙江大學，浙江 杭州 310058；2.浙江省動物疫病預防控制中心； 3.杭州市蕭山區畜牧獸醫局)

為探索細胞懸浮培養法生產H5亞型禽流感滅活疫苗的應用效果，試驗選用10日齡四明香雞100羽，隨機分為A組與B組，每組50羽，分別采用由細胞懸浮培養法工藝生產和傳統雞胚繁殖工藝生產的H5亞型禽流感疫苗免疫雞群，并于首免前、首免后28 d、60 d、90 d抽取血樣對雞群開展禽流感免疫抗體水平監測。結果表明，使用兩種疫苗均能誘導產生較高的HI抗體水平，達到防控禽流感的目的。

H5N1；禽流感；疫苗；免疫效果

禽流感是由正粘病毒科流感病毒屬的A型流感病毒引起的以禽類為主的一種高度接觸性傳染病。H5N1亞型禽流感病毒及其變異株是高致病性禽流感的典型代表。近年來爆發的H5亞型禽流感疫情不僅給養禽業帶來巨大經濟損失，同時也嚴重威脅到公共衛生安全。世界動物衛生組織(OIE)將高致病性禽流感列為必須報告的傳染病，我國將其列為一類動物疫病。針對國內H5亞型禽流感病毒，我國主要采取疫苗免疫聯合撲殺感染家禽的綜合防制措施，并已取得理想效果[1]。

目前，雞胚培養是國內疫苗生產企業生產動物用流感病毒疫苗的主要工藝手段。細胞懸浮培養是一種比較新型的流感疫苗培養技術[2]。為了解細胞培養工藝生產禽流感疫苗的免疫效果，筆者選取細胞懸浮培養法工藝和傳統雞胚繁殖法工藝生產的H5亞型禽流感疫苗分別免疫雞群，通過定期檢測雞群免疫抗體效價，比較其抗體水平及合格率，以利為防疫疫苗的選擇提供參考數據。

1 材料與方法

1.1試驗動物 試驗在寧波余姚某規模雞場進行，隨機選擇10日齡四明香雞100羽，均分為A、B兩組，每組50羽。采用網上平養，專人負責。

1.2供試疫苗 重組禽流感病毒(H5N1亞型)二價滅活疫苗(Re-6株+Re-7株)，A組試驗雞采用細胞懸浮培養工藝生產的A疫苗，B組試驗雞采用傳統雞胚繁殖工藝生產的B疫苗。

1.3試驗試劑 禽流感H5(Re-6株)HI抗原(批號2015036)，禽流感H5(Re-7株)HI抗原(批號2015017)，由哈爾濱維科生物技術開發公司生產。雞紅細胞采自本中心飼養的3羽SPF公雞血液，經離心洗滌后制備1%雞紅細胞懸液。

1.4免疫程序 參考疫苗說明，雞群14日齡首免，每羽0.3 mL；30日二免，每羽0.5 mL；110日齡三免，每羽0.5 mL；頸部皮下注射。于免疫前(14日齡)、首免后28 d(42日齡)、60 d(74日齡)、90 d(104日齡)抽取血樣，分離血清，-36℃保存備檢。

1.5抗體檢測 根據國家標準《高致病性禽流感診斷技術》(GB/T18936-2003)中血凝和血凝抑制方法檢測，計算平均抗體效價及抗體離散度。

1.6判定標準 以4log2為標準統計雞群抗體合格率。抗體效價≥4log2判定為合格，抗體效價<4log2判定為不合格。

2 結果與分析

試驗結果詳見表1。從抗體效價看，兩組雛雞在14日齡免疫前均存在一定的母源抗體，Re-6平均效價大于4，Re-7平均效價大于3。隨著兩次疫苗免疫，雞群免疫抗體效價迅速升高，并在74日齡以后達到基本穩定。對比A、B兩組抗體效價數據，A組抗體效價略高于B組(詳見圖1)。

從抗體效價合格率看，兩組雛雞在免疫前合格率均較低(Re-6 74%、Re-7 30%～38%)。42日齡后均接近或等于100%，證明兩種疫苗免疫原性較好，均能刺激雞體產生合格的HI抗體(詳見圖1)。

離散度體現的是群體內個體間抗體效價的差異程度。從表1的離散度數據看，兩組雛雞在免疫前離散度較大，而免疫后的幾次檢測中A組數據離散度明顯小于B組。

表1 H5N1禽流感疫苗雞群免疫試驗結果表

圖1 H5N1禽流感疫苗抗體評價滴度消長規律圖

3 小結與討論

據試驗結果看，14日齡雞群母源抗體水平較低，離散度較高，存在一定的疫病感染風險。14日齡首免的免疫程序能較好保護雞群，首免后3-4周進行二免，可使雞體HI抗體滴度達到高峰。

從免疫效果看，A、B兩種疫苗均能誘導雞體產生良好的免疫應答，使雞群建立較好的免疫保護力。相較于B疫苗，使用A疫苗免疫雞群，HI抗體水平更高，抗體離散度更低，免疫效果更好。

目前，我國動物用流感病毒疫苗的生產大多采用傳統的雞胚繁殖病毒，這種傳統生產工藝存在著生產周期長，勞動強度大，雞胚用量大、殘存雞胚蛋白影響疫苗質量等弊端。此外，還可能存在一定的生物安全風險。細胞懸浮培養作為一種新的疫苗生產工藝，生產的禽流感疫苗與傳統方法相比具有生產周期短，病毒滴度高，疫苗質量更容易控制等優點[3]。本試驗采用的細胞源H5N1流感疫苗，其效果略優于雞胚源H5N1疫苗，建議可在臨床中使用。但禽流感疫苗的免疫效果受養殖場地、飼養環境、疾病感染、飼料營養、飼養密度、應激等多種因素影響[4-5]。因此，在養雞生產中，應該根據各場具體情況選用適合本場的禽流感疫苗。

[1] 陳全姣，金梅林，陳煥春. 禽流感疫苗研究進展[J]. 中國生物工程雜志，2004，24 (4)：34-38.

[2] 呂宏亮，付秀花，鄭明. 傳代細胞制備流感病毒疫苗工藝研究進展[J]. 中國獸藥雜志，2009 ，43 (6)：43-48.

[3] 喬春曉，何召慶. 流感疫苗生產用MDCK細胞懸浮培養技術研究進展[J]. 獸醫導刊，2015 (15)：47-48.

[4] 鄔恩榮，李莎，何大勇，等. 振寧黃雞在不同飼養條件下禽流感疫苗免疫效果的比較研究[J]. 浙江畜牧獸醫，2013，38 (1)：142-142.

[5] 譚鐵兵，王勇，何建強，等. 不同飼養條件下家禽H5亞型禽流感滅活油乳劑疫苗免疫效果的監測[J]. 養禽與禽病防治，2007 (9)：8-9.

2017-09-12

S858.3

A

1005-7307(2017)06-0001-002