豬尿液中萊克多巴胺殘留量的測定

摘 要：用移液槍準確吸取尿樣本于離心管中，加入乙腈水，渦旋混合后超聲。經PRiME固相萃取柱凈化，用45 ℃水浴氮吹至吹干。最后用流動相溶解定容，充分渦旋混合，過膜后用UPLC-MS/MS測定。結果顯示具有良好的線性關系，相關系數r=0.999 13，加標回收試驗的回收率及相對標準偏差等結果滿足GB/T 27404-2008《實驗室質量控制規范-食品理化檢測》的要求。本方法操作簡便、高效，質譜條件及流動相梯度等一系列的條件設置合理，經質譜打碎后的定性定量離子辨識度高，有比較高的響應，檢出限可滿足實際檢測需求，驗證結果具有很好的準確度和精密度，是測定豬尿液中萊克多巴胺的一種可靠方法[1]。

關鍵詞：高效液相色譜串聯質譜；豬尿液；萊克多巴胺；殘留；檢測法

中圖分類號：S-3 文獻標志碼：A 文章編號：1001-0769（2017）07-0088-03

萊克多巴胺又名舒喘靈、金萊多巴，化學成分為1-（4-羥基苯基）-2-[1-甲基-3-（4-羥基苯基）-丙氨基]-乙醇。萊克多巴胺目前是被畜牧業廣泛使用的一種β-受體激動劑，也是目前最為實用的β-受體激動劑之一。萊克多巴胺可以選擇性激活支氣管平滑肌的β2受體，在臨床上普遍用于支氣管炎、哮喘的治療[2]。21世紀初，美國批準萊克多巴胺為獸用添加劑，用于畜禽生長過程的營養再分配，加快動物肌肉生長速度，提高動物的瘦肉率，改變胴體脂肪和瘦肉比例，同時提高動物的日增重和飼料利用率，具有減脂增肉的作用，被廣泛地用于畜牧業和養殖業。但在動物機體中較大的殘留會嚴重威脅人類健康。研究表明，萊克多巴胺在肝臟等內臟器官中的殘留問題較為突出，在視網膜中的蓄積也時有報道[3]。

動物性食品中藥物殘留正成為社會關注的熱點問題，畜禽產品中瘦肉精殘留尤為突出，許多國家禁止在飼料中使用瘦肉精[4]。國家有關部門也加強了管理。開展對飼料和飼料添加劑中藥物殘留檢測是從源頭上控制的有效手段。中華人民共和國農業部公告第193號都有相關規定。藥物在動物體內，隨著尿液產生過程的濃縮，多數大大高于血藥濃度，因此，比較容易被檢測到。檢測豬尿液中的藥物殘留適用于宰前監控，可有效地預防藥物殘留超標的動物源性食品流入市場，對畜禽產品質量安全具有重大意義[5]。因此，建立有效的、簡便的萊克多巴胺殘留檢測方法迫在眉睫。而本試驗方法就是希望用簡單的操作對豬尿樣進行處理后可以進行LC-MS/MS的快速檢測，且能大容量檢測，并具有較好的精密度和準確度。

1 實驗部分

1.1 主要儀器設備與試劑

所用儀器為：液相色譜串聯質譜聯用儀（4500質譜ExionLC），離心機（Sigma公司，轉數大于7 000 r/min），渦旋振蕩器，氮吹儀，固相萃取儀，固相萃取小柱（HLB PRiME 6cc），離心管，濾膜（津騰：0.22 μm，水系），移液槍。

主要試劑：萊克多巴胺標準物質，甲醇（色譜純），乙腈（色譜純），甲酸，二次蒸餾水等。

1.2 試驗方法

1.2.1 試樣的準備

準確移取待測尿樣放置于室溫，若樣本渾濁，可離心或者過濾。

1.2.2 提取

用移液槍準確吸取1.00 mL尿樣于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈水（80%乙腈水+0.2%甲酸+20%水），渦旋混合1 min，混合后超聲5 min。

1.2.3 凈化

取7 mL樣液過固相萃取小柱（PRiME 6cc），保持流速在1滴/s速度，用15 mL玻璃小管收集，移出 5.5 mL至15 mL黑色帶刻度離心管，再用45 ℃水浴氮吹儀氮氣吹干。

1.2.4 定容

最后用1.00 mL流動相（甲酸水：甲酸0.09+水90+甲醇10）溶解定容，充分渦旋混合，過 0.22 μm有機相濾膜，上機測定[6]。

1.3 上機測定

液相色譜及質譜條件：

色譜柱：ACQUITYUPLC BEHC18（1.7 μm， 3.0 mm×100 mm）；

柱溫：40 ℃；

流動相：A（0.1%甲酸水），B（甲醇）；流動相梯度條件見表1。

流速：0.300 mL/min；

進樣量：5.0 μL；

離子源：電噴霧離子源；

掃描方式：正離子掃描；

檢測方式：多反應監測（MRM）；

離子源電壓：5 500 V；

輔助氣溫度：500 ℃；

母離子、子離子、采集時間、去簇電壓、碰撞能量及出口電壓，見表2。

2 結果與分析

2.1 線性試驗

按方法條件設置儀器參數，在空白樣本中添加一系列濃度的標準溶液（2.0 μg/L，4.0 μg/L，10.0 μg/L，30.0 μg/L，100.0 μg/L）（上機濃度），按照上述方法進行前處理，等儀器穩定后，上機檢測，制出標準曲線，相關系數r=0.999 13。

2.2 方法精密度和回收率實驗

以空白豬尿樣本為基質，進行加標回收試驗，加標濃度分別為2.0 μg/kg、10.0 μg/kg、 30.0 μg/kg。將加標樣本和空白樣本按方法進行前處理，上機測試，結果見表3、表4、表5。

3 結論

隨著國家對濫用瘦肉精行為進行嚴厲打擊，非法應用瘦肉精的情況得到了有效的控制。經過上述實驗驗證，本方法用于豬尿中萊克多巴胺殘留的測定，一系列濃度的標準樣本溶液 2.0 μg/L、5.0 μg/L、10.0 μg/L、30.0 μg/L、100.0 μg/L的標準曲線相關系數r=0.999 13； 2.0 μg/kg、10.0 μg/kg、30.0 μg/kg加標試驗變異系數分別為7.22%、3.43%、2.78%，加標試驗回收率范圍為90.50%～106.50%。本方法的驗證結果滿足《GB/T 27404-2008》的要求，精密度和準確度較好，可很好地滿足實際檢測工作的需要。

本試驗方法操作過程簡便、高效，質譜及流動相梯度等一系列的條件設置合理，經質譜打碎后的定性定量離子辨識度高，響應值較高，檢出限可滿足檢測的需求，驗證結果的精密度和準確度較好，是測定動物尿液中萊克多巴胺的一種可靠方法。

參考文獻：

[1] 實驗室質量控制規范GB/T 27404-2008[J].食品理化檢測.

[2] 陶軍，肖耀明，黃忠，馬玉玲.萊克多巴胺殘留檢測方法的研究進展[J].上海畜牧獸醫通訊，2008，（6）：8-9.

[3] 邱建琴，左曉磊.畜產品中萊克多巴胺殘留的快速檢測[J].畜牧獸醫科技信息，2010，（5）：31-33.

[4] 陳海玲，郝春莉，黃華斌，蔡盡忠，趙麗莊，峙廈.高效液相色譜——質譜法同時測定豬尿中克倫特羅和萊克多巴胺[J].理化檢驗.化學分冊，2011，（7）：859-860.

[5] 吳銀良，劉素英，劉勇軍，沈建忠，王海.單吉浩-固相萃取-氣相色譜-質譜法測定豬組織中沙丁胺醇殘留量[J].分析化學研究報告，2006，34（1）：23-26.