RacGAP1與Cyclin-D1在胃癌組織中的表達(dá)及意義

李艷麗，辛宇波，武文學(xué)，肖 帥*

(1.吉林省疾控中心環(huán)境所，吉林 長(zhǎng)春130062；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院；3.長(zhǎng)春市雙陽(yáng)區(qū)醫(yī)院)

RacGAP1與Cyclin-D1在胃癌組織中的表達(dá)及意義

李艷麗1，辛宇波2，武文學(xué)3*，肖 帥2*

(1.吉林省疾控中心環(huán)境所，吉林 長(zhǎng)春130062；2.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院；3.長(zhǎng)春市雙陽(yáng)區(qū)醫(yī)院)

Rac GTP酶活性蛋白-1(RacGAP1)是GTP酶活性蛋白家族的一員,研究發(fā)現(xiàn)RacGAP1在胃癌組織中高表達(dá)，且RacGAP1高表達(dá)的患者預(yù)后較差[1]。Pliarchopoulou等人的研究發(fā)現(xiàn)RacGAP1可以促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的分裂與增殖[2]。細(xì)胞周期蛋白D1(Cyclin D1)已經(jīng)被證實(shí)在細(xì)胞周期的調(diào)控中起到重要作用，可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖[3]。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)法和western blot檢測(cè)RacGAP1與Cyclin D1兩種蛋白在胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)情況，并分析二者之間及與臨床病理資料的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料

實(shí)驗(yàn)組174例均選自我院基本外科2010年1月至12月收治的胃癌患者，其中男93例，女81例，年齡39-81歲，平均年齡(67.3±10.1)歲。所有患者均行胃癌根治術(shù)(D2清掃)，術(shù)后病理均為腺癌，其中低分化101例，中分化63例，高分化10例。腫瘤部位：胃竇/幽門79例，胃體56例，胃底/賁門39例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)均為首發(fā)胃癌；(2)術(shù)前未接受過(guò)任何放療、化療；(3)無(wú)其它惡性腫瘤病史；(4)病理資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)因腫瘤合并穿孔、出血，行急診手術(shù)者；(2)合并其它器官(如心、肝、腎等)功能不全者；(3)合并免疫系統(tǒng)疾病者[4]。另選取門診胃鏡檢查，病理為非萎縮性胃炎者100例作為對(duì)照組，其中男68例，女42例，年齡31-79歲，平均年齡(61.2±10.5)歲。病理取材位置：胃竇/幽門46例，胃體37例，胃底/賁門17例。兩組受試者在性別比例、平均年齡等一般資料上無(wú)顯著差異(P>0.05)。此次研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有患者均在術(shù)前告知實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，獲得同意后簽署知情同意書1份。

1.2方法

應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(S-P法)檢測(cè)組織標(biāo)本中RacGAP1與Cyclin D1的表達(dá)情況。手術(shù)切除胃組織后，避開腫瘤中心處壞死組織，取大小為0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm腫瘤組織作為實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本，對(duì)照組標(biāo)本選用胃鏡下活檢的胃黏膜組織。用4%甲醛固定后，石蠟包埋，切成3 μm厚的4張連續(xù)切片。RacGAP1抗體選用兔抗人RacGAP1多克隆抗體(貨號(hào)ab90550)，Cyclin D1抗體選用鼠抗人Cyclin D1單克隆抗體(PL0502539)，陰性對(duì)照抗體選用PBS緩沖液，S-P試劑與上述抗體均購(gòu)自美國(guó)Abcam公司(上海)。陽(yáng)性對(duì)照組為已知陽(yáng)性切片。所有操作均嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)

400倍鏡下隨機(jī)選取3個(gè)互不重疊的視野，計(jì)數(shù)視野內(nèi)細(xì)胞總數(shù)與染色細(xì)胞數(shù)，計(jì)算染色細(xì)胞數(shù)所占比例。RacGAP1與 Cyclin D1均主要在細(xì)胞核中表達(dá)。根據(jù)染色細(xì)胞比例與染色程度進(jìn)行評(píng)分：0分：<10%；1分：11%-50%；2分：>50%。0分：無(wú)染色；1分：淡黃色；2分：棕黃色；3分：黃褐色。兩項(xiàng)評(píng)分相加，陰性(—)：<2分；弱陽(yáng)性(+)：2-3分；強(qiáng)陽(yáng)性(++)：4-5分，陽(yáng)性率：(弱陽(yáng)性數(shù)+強(qiáng)陽(yáng)性)/總數(shù)×100%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1RacGAP1與CyclinD1在胃癌組織中的表達(dá)

情況RacGAP1與Cyclin D1均主要表達(dá)在細(xì)胞核內(nèi)，見圖1。 RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常胃黏膜組織(P<0.05)。見表1。

2.2RacGAP1及CyclinD1的表達(dá)與臨床資料的關(guān)系RacGAP1在胃癌組織的表達(dá)與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及腫瘤部位有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)；Cyclin D1在胃癌組織中的表達(dá)與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度和腫瘤部位無(wú)關(guān)(P>0.05)。見表2。

2.3RacGAP1與CyclinD1在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性174例胃癌標(biāo)本中，77例RacGAP1與Cyclin D1均為陽(yáng)性，33例RacGAP1與Cyclin D1均為陰性，RacGAP1與Cyclin D1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.708，P<0.05)，見表3。

圖1400倍鏡下RacGAP1與CyclinD1在胃癌組織中的表達(dá)情況(A：RacGAP1B：CyclinD1)

表1 RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中的表達(dá)情況

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05

表2 RacGAP1及Cyclin D1的表達(dá)與臨床資料的關(guān)系

表3 RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)RacGAP1在肝癌、乳腺癌等組織中有過(guò)表達(dá)的情況[5，6]，Kin等人[7]的研究結(jié)果認(rèn)為RacGAP1可能通過(guò)縮短細(xì)胞周期從而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖，但具體機(jī)制尚不清楚。當(dāng)細(xì)胞中Cyclin D1過(guò)表達(dá)時(shí)，RNA與蛋白質(zhì)合成速度加快，細(xì)胞G1期時(shí)長(zhǎng)顯著縮短，迅速進(jìn)入S期，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖[8]。羅楓等人[9]在結(jié)腸癌中、劉博[8]在食管癌中也發(fā)現(xiàn)存在Cyclin D1高表達(dá)的現(xiàn)象。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Rac GTP酶活性蛋白-1在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常胃黏膜組織(P<0.05)，Cyclin D1在胃癌組織中也呈高表達(dá)(P<0.05)，這與之前的研究結(jié)果相似[1]，這提示RacGAP1、Cyclin D1的表達(dá)可能與胃癌有關(guān)。應(yīng)用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法對(duì)RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行檢驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RacGAP1與Cyclin D1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.708，P<0.05)，推測(cè)在胃癌組織中，RacGAP1與Cyclin D1可能會(huì)相互促進(jìn)，從而通過(guò)縮短細(xì)胞周期促進(jìn)胃癌的發(fā)展。

RacGAP1與臨床資料的關(guān)系表明RacGAP1在胃癌組織的表達(dá)與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移以及腫瘤部位有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度無(wú)關(guān)(P>0.05)，這提示RacGAP1與腫瘤的惡性程度有關(guān)。與Cyclin D1不同的是，胃竇/幽門處腫瘤組織中RacGAP1的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于胃底/賁門與胃體部腫瘤，這可能與幽門螺桿菌的感染有關(guān)。Lorès等人[10]發(fā)現(xiàn)RacGAP1可以通過(guò)重構(gòu)細(xì)胞骨架、重排細(xì)胞極來(lái)改變細(xì)胞形態(tài)，使癌細(xì)胞與正常細(xì)胞粘附力降低，從而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。Ke等人[11]也認(rèn)為RacGAP1可以作為評(píng)價(jià)腦膜瘤患者預(yù)后不良的指標(biāo)之一。Cyclin D1作為一種細(xì)胞周期的正性調(diào)控因子[12，13]，已被大量研究證實(shí)參與了胃癌的發(fā)生與發(fā)展，本文結(jié)果發(fā)現(xiàn)Cyclin D1在胃癌組織中的表達(dá)與腫瘤病理T分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，而與性別、年齡、分化程度和腫瘤部位無(wú)關(guān)(P>0.05)。這進(jìn)一步證實(shí)了Cyclin D1可以作為判斷胃癌惡性程度的指標(biāo)。

綜上所述，RacGAP1與Cyclin D1在胃癌組織中呈高表達(dá)，二者可能在胃癌的發(fā)展過(guò)程中起到協(xié)同作用。

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*通訊作者

1007-4287(2017)12-2138-03

2016-05-13)