機械刺激對子宮內膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的影響

林秀英，付建華，蘆小單，劉 磊，方艷秋

(吉林省人民醫院，吉林 長春130021)

機械刺激對子宮內膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的影響

林秀英，付建華，蘆小單，劉 磊，方艷秋*

(吉林省人民醫院，吉林 長春130021)

子宮內膜容受性是胚胎植入的關鍵因素。控制性促排卵(controlled ovarian hypeistimulation COH)因為垂體降調、高水平雌激素的作用，導致種植窗提前、子宮內膜容受性下降。國內外大量臨床資料研究表明：機械刺激能夠提高IVF周期臨床妊娠率。但機制上不明確，而且對機械刺激的時間、次數存在很大爭議。本研究在不同時間對行COH患者進行1-2次的機械刺激，觀察著床期子宮內膜容受性標志物整合素avβ3、VEGF、LIF的變化，探討機械刺激提高COH周期子宮內膜容受性的機制及影響因素。

1 資料與方法

1.1研究對象

2013年1月至2016年12月，在本生殖醫學中心接受IVF-ET治療，新鮮周期取消移植的90例患者(不包括因孕酮升高取消移植者)。排除標準：年齡>40歲、月經不規律(<25天或>35天)、排卵障礙、子宮畸形、宮腔異常(息肉、內膜炎、宮腔粘連)、糖尿病、甲狀腺疾病、自身免疫性疾病、染色體異常、子宮內膜異位癥、卵巢反應不良等。

1.2機械刺激方法及分組

A組(34例): 分別在IVF周期前一周期排卵后7天及取卵后7天用子宮內膜組織活檢管(立可靈)輕柔抽吸內膜組織,制作成石蠟標本，用免疫組化的方法檢測整合素avβ3、VEGF、LIF。不同時期的數據分為A1組、A2組。

B組(31例)：分別在IVF周期前2周期排卵后7天、前一周期排卵后7天及取卵后7天用子宮內膜組織活檢管(立可靈)輕柔抽吸內膜組織,制作成石蠟標本，用免疫組化的方法檢測整合素avβ3、VEGF、LIF。不同時期的數據分為B1組、B2組、B3組。

C 組(25例)：IVF周期前未進行任何內膜刺激，取卵后7天用子宮內膜組織活檢管(立可靈)輕柔抽吸內膜組織,制作成石蠟標本，用免疫組化的方法檢測整合素avβ3、VEGF、LIF。

備注：自然周期未機械刺激組：A1組、B1組。自然周期機械刺激組：B2組。COH周期機械刺激組：A2組、B3組。COH周期未機械刺激組：C組。

1.3超排卵方案

所有患者均為黃體期短效長方案：于前一個月經周期監測排卵，排卵后7天開始注射短效GnRH-a 0.05-0.1 mg/日持續直至HCG日。7天后常規復查彩超排除卵巢囊腫，若有囊腫發生，可穿刺。注射GnRH-a 14天后抽血、彩超，若達到降調標準則開始用Gn促排卵，當兩個卵泡直徑大于18 mm時，給與艾澤250 μg皮下注射，36小時后取卵。患者一般情況、平均Gn天數、Gn用量、HCG日E2水平、平均獲卵數，自然周期及COH周期著床期子宮內膜厚度各組間無明顯差別。

1.4免疫組化結果判定根據Watanabe免疫組化半定量評分標準評分，高倍鏡下連續觀察5個視野，棕黃色顆粒為陽性著色，按染色強度和細胞的比例進行評分：0分：未染色，陽性細胞比例<5%；1分：染色為淺棕色，陽性細胞比例5%-15%；2分：染色為棕色，陽性細胞比例15%-30%；3分：染色為深棕色，陽性細胞比例30%-50%；4分：染色為褐色，陽性細胞比例>50%。

1.5統計學分析

應用SPSS l5.0軟件，采用t檢驗、卡方檢驗，P<0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1患者一般情況、平均Gn天數、Gn用量、HCG日E2水平、平均獲卵數，自然周期及COH周期著床期子宮內膜厚度各組間無明顯差別，P均>0.05。見表1。

表1 患者的基本資料

2.2機械刺激能提高自然周期種植窗期子宮內膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的表達。

無論自身對照(B2組vs B1組),還是組間對照(B2組vs A1組),機械刺激后子宮內膜中整合素avβ3、VEGF、LIF的表達量均明顯增加，差異有統計學意義，P均<0.05。見表2。

2.3機械刺激能提高COH周期種植窗期子宮內膜內整合素avβ3、VEGF、LIF的表達，延長內膜種植窗，但與機械刺激次數無關。

與自然周期組(A1組、B1組、B2組)相比，COH周期(A2組、B3組)機械刺激后的整合素avβ3、VEGF、LIF的表達雖然略低于自然周期組，但仍明顯高于C組，差異有顯著性，P均<0.05。COH周期前刺激一次和刺激二次比較(A2組 vs B3組)，差異無統計學意義，P均>0.05。見表2。

表2 各組整合素avβ3、VEGF、LIF表達情況

3 討論

3.1整合素avβ3、VEGF、LIF在評價子宮內膜容受性中的作用

胚胎成功種植的關鍵是滋養細胞與子宮內膜相互識別、粘附、侵入以及這一過程中引發的血管重建。這需要大量的細胞因子參與，其中整合素avβ3、VEGF、LIF是目前研究證實與上述過程密切相關的因子。整合素avβ3表達始于月經周期第20天，與“種植窗”期開啟時間一致，是目前證據最強的內膜容受性標志物[1]。VEGF能誘導內皮細胞浸潤和遷移，促進小血管新生，是血管發生的關鍵因子[2,3]。“種植窗"期子宮內膜組織VEGF表達量顯著增加[4,5]。LIF促進滋養層細胞和內細胞團增殖、生長，有利于胚胎的孵化和繼續發育。同時通過對著床后滋養層細胞生長的調控，確保胎盤發育的時空順序。大量研究表明多囊卵巢綜合征、輸卵管積水、子宮內膜異位癥、不明原因不孕，IVF-ET反復失敗、復發流產患者著床期整合素avβ3、VEGF、LIF表達下降[6-9]。

3.2機械刺激在提高子宮內膜容受性中的作用機制及影響因素

早在1907年國外就有報道對準備受孕的豚鼠的子宮內膜進行搔刮，可刺激子宮內膜的快速生長，并誘導其蛻膜化[10]。直到2003年，Barash等[11]首次提出在人類助孕周期前一周期的d8、d12、d21、d26進行內膜活檢可提高妊娠率。2004年國內李蓉等[12]首次報道在移植周期進行機械刺激子宮內膜可以提高妊娠率。至今可見到國內外大量相關報道。國內外指南將其列為改善子宮內膜容受性的有效措施。可見機械刺激提高子宮內膜容受性的有效性已經被國內外專家證實。

機械刺激提高子宮內膜容受性的重要機制之一即是增加內膜局部整合素avβ3、VEGF、LIF等細胞因子的表達，本研究證實機械刺激不但能提高自然周期內膜局部整合素avβ3、VEGF、LIF的表達，還能改善COH周期由于垂體降調、過量雌激素導致的子宮內膜容受性下降的狀況。同時，本研究還表明，增加內膜刺激的次數，并不能增強上述作用，故不推薦連續多次應用。

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吉林省科技廳自然科學基金項目(編號： 20150101164JC);吉林省科技廳國際合作項目(編號：20150414023GH);吉林省衛計委項目(編號：2016Q007);吉林省衛生技術創新項目(編號：2017J019)

*通訊作者

1007-4287(2017)12-2136-03

林秀英(1981-),女，副主任醫師，醫學碩士，研究方向：生殖內分泌。

2017-03-14)