血清和卵泡液抗苗勒管激素在IVF-ET中的檢測價值

王起來，馬寅芙，付建華，林秀英，劉 磊，蘆小單，方艷秋，譚 巖

(吉林省人民醫院 醫學診治實驗中心，吉林 長春130021)

血清和卵泡液抗苗勒管激素在IVF-ET中的檢測價值

王起來，馬寅芙，付建華，林秀英，劉 磊，蘆小單，方艷秋*，譚 巖

(吉林省人民醫院 醫學診治實驗中心，吉林 長春130021)

目的探討非多囊卵巢綜合征(PCOS)不孕患者在體外受精-胚胎移植(IVF-ET)中血清和卵泡液抗苗勒管激素(AMH)與臨床結果的預測價值。方法選取進行IVF-ET患者(非PCOS原因不孕)共103例，根據獲卵數分為低獲卵組、正常組、高獲卵組。檢測自然月經周期第3天、取卵日和移植日血清AMH值以及卵泡液AMH值。依據統計學方法分析獲卵數及臨床妊娠與AMH水平的關系。結果低獲卵組、正常組、高獲卵組三組間竇卵泡數、總胚胎數在各組間比較均具有統計學差異(P<0.05)；三組自然月經周期第3天、取卵日和移植日血清AMH值以及卵泡液AMH水平存在差異，均為低獲卵組<正常組<高獲卵組，組間成對比較差異具有統計學意義(P<0.05)；卵泡液AMH水平妊娠組高于非妊娠組，差異具有統計學意義(P<0.05)。結論血清和卵泡液AMH水平可作為預測獲卵數的指標，而卵泡液AMH水平高低與臨床妊娠具有相關性，可作為預測妊娠結局的指標。

IVF-ET；AMH；卵泡液

(ChinJLabDiagn,2017,21:2062)

生存環境惡化，生活、工作壓力增加，生育年齡的推遲等因素導致現代社會育齡夫婦中不孕不育患者比率大幅增高。輔助生殖技術是解決這類患者生育問題唯一途徑。體外受精-胚胎移植(IVF-ET)是ART中最常用的手段，依據患者卵巢儲備功能而定的促排卵(COS)方案又是IVF-ET中最關鍵的一環。因此，患者卵巢儲備功能評估就顯得尤為重要。已有較多研究證實基礎血清AMH是卵巢儲備評估的可靠指標[1]。然而AMH與IVF-ET臨床妊娠的關系尚不明確，而卵泡液內AMH在卵泡發育過程并促進優勢卵泡成熟中發揮重要作用[2]，那么卵泡液AMH能否與IVF-ET中獲卵及卵母細胞質量存在關系進而影響妊娠結局有待我們進一步研究。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2014年3月至2015年3月在吉林省人民醫院生殖醫學中心接受IVF-ET助孕治療的不孕癥患者(非PCOS原因不孕或單純男方因素)103例進行研究。依據獲卵數分為低獲卵組(獲卵數<5枚)、正常組(5枚≤獲卵數≤15枚之間)、高獲卵組(獲卵數>15枚)。

1.2 控制性超排卵方案及IVF-ET

依據不孕癥患者基本情況(年齡、體重指數、基礎內分泌等)，分別采用長方案、短方案進行超促排卵。取卵后，依據顯微鏡觀察卵丘-卵母細胞復合體評估卵母細胞成熟情況。依據胚胎形態參數，移植Ⅰ-Ⅱ級胚胎2枚。移植后14天檢測hCG(>5MIU/ml)為生化妊娠，移植后35天陰道B超可見孕囊為臨床妊娠。

1.3 血清AMH測定

自然月經周期第3天、取卵日和移植日采空腹靜脈血留樣。自然月經周期第3天AMH值為基礎AMH值。AMH采用酶聯免疫法檢測(深圳亞輝龍生物科技有限公司)，操作依照說明書進行。

1.4 卵泡液AMH測定

取卵日，經陰道B超引導穿刺取卵，收集卵泡液，2 500 g離心2 min，去沉淀，上清為所需卵泡液，測定AMH方法同1.3。

1.5 統計學分析

2 結果

2.1 低獲卵組、正常組、高獲卵組一般情況及獲卵數、胚胎數比較

低獲卵組、正常組、高獲卵組3組間年齡和體質量指數(BMI)比較不具有統計學差異(P>0.05)；但是竇卵泡數、獲卵數、總胚胎數在各組間比較均具有統計學差異(P<0.05)。見表1。

表1 低獲卵組、正常組、高獲卵組一般情況及獲卵數、胚胎數比較

注：*表示與低獲卵組比較P<0.05；#表示與正常組比較P<0.05。

2.2 低獲卵組、正常組、高獲卵組血清及卵泡液AMH水平的比較

IVF-ET中低獲卵組、正常組、高獲卵組的基礎血清、取卵日血清、移植日血清AMH水平和卵泡液AMH水平存在差異，均為低獲卵組<正常組<高獲卵組，并且通過組間成對比較差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同獲卵數組間血清及卵泡液AMH水平的比較

注：*表示與低獲卵組比較P<0.05；#表示與正常組比較P<0.05。

2.3 IVF患者臨床妊娠結局與AMH水平比較

根據是否臨床妊娠，將103例患者分為妊娠組(56例)與非妊娠組(47例)。兩組間基礎血清、取卵日血清、移植日血清AMH水平比較差異均不具有統計學意義(P>0.05)；但卵泡液AMH水平妊娠組高于非妊娠組，差異具有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 臨床妊娠與各組AMH水平的關系

注：*表示P<0.05

3 討論

抗苗勒管激素(AMH)是由竇前及小竇卵泡的顆粒細胞分泌的，隨著卵泡的成熟其表達水平也顯著下降[2]。血清中AMH水平在女性青春期后開始升高，很快達到峰值并在整個女性生育周期中持續存在，其作用為調控始基卵泡的募集，保持卵泡有序發育，促進卵泡優勢選擇，維持每月卵泡的成熟[3,4]。血清AMH水平取決于卵巢竇卵泡數量，可以用于評估卵巢儲備功能并準確預測卵巢反應性[5]。在本研究結果顯示控制性超排卵周期中，患者獲卵數存在明顯的不同，依據獲卵數進行分組，比較發現自然月經周期第3日、取卵日、移植日血清AMH水平和卵泡液AMH水平在不同反應組均存在統計學差異。而且各組的血清AMH水平月經第3日>取卵日，反應出控制性超排卵周期中卵泡在Gn刺激下發育，血清AMH值隨著竇卵泡數的減少而降低，外源性Gn藥物超促排卵(COH)的刺激周期下卵泡發育過程中，血清AMH的下降反映了竇卵泡逐漸減少并最后形成成熟卵泡的過程[6]，這也同時證實了AMH主要表達于早期卵泡[7]，所以可反映卵泡的動態發育過程。提示血清AMH水平能較好地預測卵巢對COH的反應，血清AMH水平與可獲得卵母細胞數的相關性最高。

IVF-ET臨床妊娠結局有多方面因素決定，包括獲卵率、卵母細胞成熟率、受精率、胚胎質量等[8，9]。血清AMH并不能反應所有相關指標，因此血清AMH水平預測臨床妊娠結局存在爭議。卵泡液是卵母細胞發育的微環境，其中存在眾多活性因子構成精密復雜的調控始基卵泡啟動的信息網絡。這些活性因子分為促卵泡生長因子和抑制因子兩類，其中AMH屬于重要的抑制性細胞因子。Fanchin研究[10，11]顯示取卵日獲得的中小卵泡(8-12 mm)卵泡液中AMH的水平比大卵泡(16-20 mm)高兩倍，提示AMH水平隨著卵泡的成熟而持續下降；但在COH周期中，取卵日卵泡液AMH水平和胚胎種植率以及臨床妊娠率呈正相關，而基礎或取卵日血清AMH水平卻和它無相關性[12]。在本研究結果顯示臨床妊娠組卵泡液AMH水平顯著高于非妊娠組，提示高卵泡液AMH可能與卵泡成熟相關，能提高臨床妊娠率。

綜上所述，血清和卵泡液AMH水平可作為預測獲卵數的指標，而卵泡液AMH水平高低與臨床妊娠具有相關性。

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[11]Fanchin R,Yaieb J,Lozano DH,et al.High reproducibility of serum anti-mtillerian hormone measurements suggest a multistaged follicular secretion and strengthens its role in the assessment of ovarian follicular status[J].Hum Reprod,2005,20(4):923．

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Detectionvalueofanti-MullerianhormoneinserumandfollicularfluidinIVF-ET

WANGQi-lai，MAYin-fu,FUJian-hua,etal.

(CenterforMedicalTreatmentandDiagnosis,JilinProvincePeople’sHospital,Changchun130021,China)

ObjectiveTo investigate the predictive value of serum and follicular anti-Mullerian hormone (AMH) in patients with non-PCOS (infertility polycystic ovary syndrome) in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) and its clinical value.MethodsSelected for IVF-ET patients (non-PCOS causes infertility) a total of 103 cases,according to the number of oocytes were divided into low-ovulation group,normal group,high-egg group.On the 3rd day of natural menstrual cycle,serum AMH value of ovulation day and transplantation day and AMH value of follicular fluid were detected.According to statistical methods to analyze the relationship between the number of oocytes and clinical pregnancy and AMH levels.ResultsThe number of follicles and the total number of embryos in three groups of low ovum group,normal group and high ovulation group were statistically different (P<0.05).On the third day of natural menstrual cycle,the ovulation day AMH levels in follicular fluid and AMH levels in follicular fluid were all lower than those in control group (allP<0.05) Group than non-pregnancy group,the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionSerum and follicular fluid AMH levels can be used as an index to predict the number of oocytes,while the level of follicular fluid AMH levels associated with clinical pregnancy,pregnancy prediction can be used as an index.

IVF-ET；AMH；Follicular fluid

本文受吉林省衛生技術創新項目(2017J022、2016J015、2016ZC016)和吉林省科技廳項目(20150622024JC，20150414023GH，20160622008JC、20160414021GH)資助

*通訊作者

1007-4287(2017)12-2062-03

R446

A

王起來(1982-)，男，主管檢驗師，碩士，主要從事生殖醫學臨床檢驗及科研工作;方艷秋(1968-)，女，教授，博士，主要從事生殖醫學相關研究。

2017-01-25)