抗犬細小病毒單鏈抗體庫構建及其親和力檢測

李德山，車瑞香，郭 瑞，王宇陽，黃 濤，郭笑辰，任桂萍

抗犬細小病毒單鏈抗體庫構建及其親和力檢測

李德山，車瑞香，郭 瑞，王宇陽，黃 濤，郭笑辰，任桂萍

（東北農業大學生命科學學院，哈爾濱 150030）

為獲得高親和力抗犬細小病毒單鏈抗體，構建抗犬細小病毒（CPV）細菌展示單鏈抗體文庫。研究提取犬脾臟總RNA，反轉錄cDNA，以此為模板，分別擴增犬抗體VH和VL編碼序列，插入克隆載體pTlinker。利用SfiⅠ酶切位點將scFv基因構建至細菌展示載體pBSD中，將重組質粒電轉化入E.coli DH5α構建pBFD-scFv細菌展示庫。通過標記FITC的VP2蛋白，利用流式細胞術篩選12株陽性scFv。將12株scFv基因分別插入pET-28a，構建重組表達質粒pET28a-scFv。轉化到E.coli Rosetta中誘導表達，獲得約28 ku目的蛋白。經ELISA檢測，純化scFv對VP2蛋白P/N值均大于2.1，其中scFv-23、scFv-33、scFv-34對VP2蛋白親和力較強。研究通過免疫本動物源動物，在獲得高價抗體同時，避免傳統單克隆抗體的免疫排斥現象；結合流式細胞術和細菌展示技術可對單鏈抗體文庫高效、快速篩選。抗犬細小病毒同源單鏈抗體研究在填補市場同源基因工程抗體空白的同時，可為研制具有中和活性全長抗體奠定基礎。

CPV；單鏈抗體；流式細胞術；親和力

犬細小病毒病是犬細小病毒引起的急性傳染病，表現為出血性腸炎或非化膿性心肌炎，多發生于幼犬，病死率10%~50%[1]。主要特征是劇烈嘔吐、腹瀉、糞便惡臭、出血性腸炎及白細胞數量減少[2]；可感染不同年齡、性別和品種犬，全年發病率較高。CPV屬細小病毒科，細小病毒屬，無囊膜結構，核衣殼為對稱等軸20面體單鏈DNA分子。CPV僅一個抗原型，但不同亞型、毒株間抗原性存在差別。……