下丘腦室旁核NMDAR介導大鼠促炎因子增強高血壓 交感活動的作用

逯 鵬，潘 虹，馬春蕾,3，施 真*

(1.濱州醫學院煙臺附屬醫院，山東 煙臺 264100； 2.濱州醫學院生理學教研室，山東 煙臺 264003； 3.山東省腦中風重點實驗室，山東 煙臺 264003)

下丘腦室旁核NMDAR介導大鼠促炎因子增強高血壓 交感活動的作用

逯 鵬1，潘 虹2，馬春蕾2,3，施 真2*

(1.濱州醫學院煙臺附屬醫院，山東 煙臺 264100； 2.濱州醫學院生理學教研室，山東 煙臺 264003； 3.山東省腦中風重點實驗室，山東 煙臺 264003)

研究報告

目的研究自發性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)下丘腦室旁核促炎性細胞因子是否促進交感神經活動過度增強，以及N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)是否介導其上述作用。方法本研究采用成年SHR以及正常血壓的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠。應用蛋白質免疫印跡分析技術(Western blot)和酶聯免疫吸附測定法(ELISA)分別測定下丘腦室旁核(paraventricular nucleus, PVN)腫瘤壞死因子(TNF)和白細胞介素(IL)-1β受體IL-1RI蛋白表達以及TNF-α和IL-1β水平。并應用腦立體定位進行PVN微量藥物注射。腎交感神經活動(renal sympathetic nerve activity, RSNA)的測定采用Powerlab系統記錄腎交感神經干電活動，并進行積分處理，比較給藥前后的RSNA變化。頸動脈插管經壓力傳感器與PowerLab系統連接記錄和分析平均動脈血壓(mean arterial pressure, MAP)。結果與WKY大鼠相比，SHR PVN中TNF-α及IL-1β水平，以及TNF-α受體p55TNFR、p75TNFR和IL-1β受體IL-1RI蛋白表達均顯著升高(P< 0.05)。PVN微量注射Etanercept 或IL-1ra阻斷TNF-α和IL-1β效應在SHR組更顯著的降低交感神經活動水平(P< 0.05)。PVN微量注射NMDAR拮抗劑DL-2-amino-5-phosphonovaleric acid(APV)或MK-801(Dizocilpine)在SHR和WKY組大鼠均降低RSNA和MAP(P< 0.05)，并且在SHR組該效應更顯著(P< 0.05)；另外，APV或MK-801預處理阻斷PVN中NMDA受體均顯著減弱PVN微量注射TNF-α或IL-1β增強SHR和WKY組大鼠 RSNA和升高MAP的效應(P< 0.05)，與WKY組大鼠相比，該效應在SHR組更顯著(P< 0.05)。結論SHR PVN促炎性細胞因子TNF-α、IL-1β及其受體均表達增加，PVN中NMDA受體介導SHR大鼠PVN 中TNF-α、IL-1β促進交感活動增強和血壓升高的效應。

自發性高血壓；NMDA受體；交感神經活動；促炎性細胞因子

交感神經過度激活是高血壓病的重要特征之一[1, 2]，在其病程發展和器官損害中起重要作用，但其機制仍不清楚。下丘腦室旁核(paraventricular nucleus，PVN)是心血管活動整合的重要中樞結構之一，在交感神經活動調控中發揮關鍵作用[3,4]。與炎癥有關的細胞因子即炎性細胞因子，又可分為促炎性細胞因子(PICs)，如腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-1β等和抗炎性細胞因子(AICs)，如IL-4、IL-10 等。有研究發現，疾病狀態下中樞升高的PICs促進交感神經活動的增強[5,6]。但PVN中PICs通過何種機制調控交感活動促進高血壓仍不清楚。近來研究表明PVN中離子型谷氨酸受體調控交感傳出活動[7, 8]。PVN的谷氨酸能緊張性在自發性高血壓大鼠異常升高，這是通過突觸前谷氨酸遞質釋放增加和突觸后N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor, NMDAR)活動增強導致的[9]。本研究旨在觀察SHR PVN中TNF、IL-1β受體IL-1RI蛋白表達以及TNF-α、IL-1β水平變化，藥物阻斷二者對SHR交感神經活動和血壓的影響，以及TNF-α、IL-1β的上述效應是否通過NMDAR介導。

1 材料和方法

1.1 實驗動物

實驗采用16周齡雄性自發性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rat, SHR)和16周齡雄性正常血壓的Wistar-Kyoto(WKY)大鼠。體重260～280 g，清潔級，在濱州醫學院實驗動物中心進行實驗[SYXK(魯) 2013-0020]。實驗動物購自上海斯萊克實驗動物有限責任公司[SCXK(滬)2012-0002]。飼養期間給予嚙齒類動物標準顆粒飼料(由實驗動物中心提供)及自由飲水，12 h循環燈光，恒定濕度，室溫(23±2)℃。本實驗所有操作均符合中華人民共和國《實驗動物管理條例》。

1.2 實驗試劑

Etanercept、IL-1ra、DL-2amino-5-phosphonovaleric acid(APV)、MK-801(Dizocilpine)購自Sigma公司；TNF-α、IL-1β購自Peprotech公司；TNF-α、IL-1β測定所需ELISA試劑盒購自R&D公司；Western blot所需抗體購自Santa Cruz公司；蛋白定量試劑盒購自南京建成生物工程研究所；TNF-α和IL-1β測定所需ELISA試劑盒購自R&D公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 PVN中 TNF-α、IL-1β和p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI蛋白水平測定

WKY和 SHR組各6只苯巴比妥鈉(40 mg/kg)麻醉后斷頭取腦，液氮速凍后保存于-70℃低溫冰箱中。用冰凍切片機(Leica CM 1900-1-1，Germany)在PVN冠狀面水平做連續切片，用內徑1.0 mm打孔針頭分別取出PVN和同一冠狀面皮層部位相同大小組織塊，組織放置于0.1 mL RIPA lysis 緩沖液中勻漿并提取總蛋白。利用酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，按大鼠ELISA 試劑盒(R&D Systems; Oxfordshire, UK)說明書中所述操作步驟分別檢測PVN TNF-α、IL-1β水平。Western blotting法測定PVN中的p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI受體蛋白。

1.3.2 記錄動脈血壓

用充有肝素生理鹽水溶液的PE-50聚乙烯管插入右側頸總動脈，經壓力傳感器與四通橋式放大器(QUAD Bridge，AD Instruments，Australia)相連，經PowerLab數據分析處理系統(8SP型, AD Instruments, Australia)記錄動脈血壓，并對血壓信號進行處理，同步記錄動脈血壓和MAP。

1.3.3 記錄RSNA和基礎交感神經水平測定

經腰部縱行切口沿腹膜后路徑暴露左側腎臟、腎動脈和腎神經，于接近腹主動脈處的腎動脈和腎靜脈附近仔細游離出腎交感神經，并浸入溫石蠟油中，安放銀絲電極引導RSNA，經交流/直流差分放大器(Model 3000，A-M System Inc.，USA)放大后(低端截止頻率設置在60 Hz，高端截止頻率設置在2 kHz)，用PowerLab數據分析處理系統(8SP型, AD Instruments, Australia)記錄RSNA，并對RSNA進行積分處理，同步記錄原始RSNA和RSNA積分值。實驗結束時切斷腎神經中樞端以消除腎交感神經傳出活動，記錄噪音水平，RSNA積分值減去噪音積分值即為實際RSNA積分值。比較各種干預引起的RSNA變化的百分比值[10]。

靜脈注射六烴季銨(30 mg/kg)引起短暫而強烈的降低血壓效應，動脈血壓降至60 mmHg以下低于壓力感受器的閾值時，反射性的引起RSNA增強到最大值(RSNAmax)，同時伴有動脈血壓回升。記錄注射六烴季銨之前的RSNA(RSNA before)以及注射六烴季銨后RSNAmax，計算基礎RSNA。基礎RSNA=(RSNA before/ RSNAmax)×100%[11]。同時，比較各組之間六烴季銨對MAP和RSNA的影響，其中降壓持續時間為降壓效應開始至MAP恢復到最大降壓水平20%的時間。

1.3.4 PVN立體定位和微量注射

將大鼠頭部固定于立體定位儀上，暴露前囟，根據Paxinos和Watson的大鼠立體定位圖譜，行雙側PVN插管(AP：-1.8 mm，RL：0.4 mm，H：7.9 mm)，插管外徑0.6 mm, 內徑0.3 mm。雙側PVN微量注射藥液體積均為50 nL，于1 min內注射完畢。WKY和 SHR組各24只，分別隨機分為兩亞組每組12只。其中一亞組PVN微量注射Etanercept(n=6)或IL-1ra(n=6)預處理觀察對靜脈應用六烴季銨測定的基礎交感水平的影響；另外一亞組PVN微量注射NMDAR拮抗劑APV(n=6)、MK-801(n=6)預處理觀察對PVN 微量注射TNF-α、IL-1β引起的RSNA增強和MAP升高的影響。實驗結束時雙側PVN分別注射50 nL的0.25%伊文思藍溶液，過量麻醉處死大鼠，取腦，將其放入10%的福爾馬林溶液中固定一周后，腦組織切片鑒定注射位點。注射位點不在PVN范圍內的實驗數據不予統計處理。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 PVN中 TNF-α、IL-1β和p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI蛋白水平

與WKY組大鼠相比，SHR組大鼠PVN中TNF-α、IL-1β(圖1)和p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI蛋白水平(圖2)均顯著升高(P< 0.05)。

2.2 PVN 中PICs對SHR過度增強的交感神經活動的作用

各組大鼠靜脈注射六烴季銨降低MAP并增強RSNA。WKY和SHR兩組的組間降壓幅度無顯著差異的情況下(圖3 A)，SHR組降壓持續時間延長， 而Etanercept或IL-1ra預處理的SHR組降壓持續時間顯著縮短(P< 0.05)(圖3B)。如圖3C所示，SHR組大鼠RSNA增強程度顯著減弱，Etanercept或IL-1ra預處理顯著阻止SHR的上述變化(P< 0.05)。以注射SNP后的最大RSNA變化百分比表示基礎RSNA，與WKY組大鼠相比，SHR組基礎RSNA顯著增強(P< 0.05)；而Etanercept或IL-1ra預處理顯著阻止SHR的上述變化(P< 0.05)(圖3D)。圖3E,F代表性的原始記錄圖，記錄曲線自上而下依次為動脈血壓(ABP)、平均動脈壓(MAP)、腎交感神經活動(RSNA)和積分處理的RSNA。

注：與WKY組相比，* P< 0.05。圖1 PVN中TNF-α、IL-1β水平(n=6)Note.Compared with the WKY group,* P< 0.05.Fig.1 TNF-α and IL-1β levels in the paraventricular nucleus

注：與WKY組相比，* P< 0.05。圖2 PVN 中p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI蛋白水平(n=6)Note.Compared with the WKY group,* P< 0.05.Fig.2 p55TNFR, p75TNFR and IL-1RI protein levels in the paraventricular nucleus

2.3 PVN中NMDAR對TNF-α、IL-1β增強RSNA和升高MAP作用的影響

WKY和SHR組PVN微量注射TNF-α、IL-1β均顯著增強RSNA(圖4)和升高MAP(圖5)，SHR組的變化更顯著(P< 0.05)；PVN微量注射APV或MK-801阻斷NMDAR在WKY和SHR均降低RSNA(圖4)和MAP(圖5)，SHR組變化更顯著(P< 0.05)；另外，APV或MK-801預處理均減弱TNF-α或IL-1β增強WKY和SHR交感神經活動(圖4)和升高血壓(圖5)的效應，在SHR組改效應更顯著(P< 0.05)。

注：與WKY-Saline組相比，* P< 0.05；與WKY-Etanercept組相比，?P< 0.05；與WKY-IL-1ra組相比，P< 0.05。圖3 抑制PVN中TNF-α、IL-1β對基礎RSNA水平的影響(n=6)Note.Compared with WKY group,* P < 0.05. Compared with WKY-Etanercept group,?P<0.05. Compared with WKY-IL-1ra group,P < 0.05.Fig.3 Effects of inhibition of TNF-α or IL-1β in PVN on the basal RSNA levels

注：與Saline相比，* P< 0.05；與TNF-α相比，?P< 0.05；與IL-1β相比，P< 0.05。與WKY相同處理組相比，#P< 0.05。圖4 PVN中NMDAR介導TNF-α、IL-1β 增強RSNA效應(n=6)Note.Compared with saline,* P< 0.05. Compared with TNF-α, ?P< 0.05. Compared with IL-1β,P< 0.05. Compared with the same treatment group of WKY rats,#P< 0.05.Fig.4 PVN NMDA receptor mediated the effects of TNF-α and IL-1β on increasing RSNA

注：與Saline相比，* P< 0.05；與TNF-α相比，?P< 0.05；與IL-1β相比，P< 0.05。與WKY相同處理組相比，#P< 0.05。圖5 PVN中NMDAR介導TNF-α、 IL-1β升高MAP效應(n=6)Note.Compared with saline,* P< 0.05. Compared with TNF-α,?P< 0.05. Compared with IL-1β,P< 0.05. Compared with the same treatment group of WKY rats,#P< 0.05.Fig.5 PVN NMDA receptor mediated the effects of TNF-α and IL-1β on increasing MAP

3 討論

本研究發現SHR PVN 中PICs，包括TNF-α和IL-1β及其受體p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI蛋白表達均顯著升高。PVN 微量注射Etanercept或IL-1ra藥物阻斷TNF-α或IL-1β作用均能顯著降低SHR的基礎交感神經活動，且SHR PVN 應用NMDAR阻斷劑APV或MK-801預處理均顯著削弱PVN 微量注射TNF-α或IL-1β引起的RSNA增強和MAP升高效應。這些結果表明SHR PVN中促炎性細胞因子作用增強在過度增強的交感神經活動中起重要作用，并且PVN中NMDAR介導其增強交感神經活動和升高血壓的效應。

國內外最新研究進展表明，交感神經系統活動過度激活在高血壓發生發展和并發癥形成中起了極其重要作用[1,2]。各種高血壓的動物模型也均有顯著的交感神經系統激活特征，包括自發性高血壓大鼠(SHR)[9]、鹽敏感性高血壓大鼠[12]、等。本研究在SHR靜脈注射神經節阻滯劑六烴季銨引起短暫而強烈的降低血壓效應，動脈血壓降至60 mmHg以下低于壓力感受器的閾值時，會反射性的引起RSNA增強到最大值(RSNAmax)，同時伴有動脈血壓回升。SHR基礎交感神經活動已經處于過度增強水平，因此可反射性調節的范圍變小，因此SHR組觀察到RSNA增強幅度較WKY組明顯減小，記錄注射SNP之前的RSNA(RSNA before)以及注射SNP后RSNAmax，則基礎RSNA=(RSNA before/ RSNAmax)×100%[11]，在SHR組顯著較WKY組升高，且SHR組的動脈血壓回升所需時間也明顯延長。雖然已知交感神經活動主要受中樞神經系統調控，但高血壓時交感神經活動增強的中樞機制尚不明確，是當前迫切需要解決的關鍵問題。

炎性機制在高血壓和心血管疾病的發生、發展及轉歸中也扮演著極其重要的角色[13]。以往研究主要集中在外周炎性細胞因子在高血壓等心血管疾病中的作用，而最近越來越多證據表明炎性細胞因子在中樞神經系統(CNS)也能夠合成和分泌，且發揮重要作用[6,14,15]。外周血源性炎性細胞因子分子量較大，不易被動擴散透過血腦屏障進入CNS發揮作用。有研究發現，冠狀動脈結扎誘導急性心肌梗死大鼠幾分鐘內即出現下丘腦TNF-α、IL-1β水平顯著升高，并且該升高是獨立于心肌組織和血漿PICs升高的，是源自神經信號機制[14]。

下丘腦室旁核(PVN)是心血管活動整合的重要中樞結構之一[3,4]。我們既往研究表明PVN中血管緊張素II[16]、活性氧[17]等多種神經遞質或信號分子介導或調控高血壓大鼠增強的心交感傳入反射和交感傳出活動，表明PVN是調控高血壓交感神經活動亢進的關鍵核團，在高血壓發生、發展中起重要作用。本研究檢測SHR 中樞核團PVN 中的TNF-α和IL-1β水平，以及其發揮作用的主要受體p55TNFR、p75TNFR、IL-1RI，結果發現這些促炎性因素均顯著增強。這與我們已往在SHR PVN中微量注射TNF-α或IL-1β能顯著增強RSNA和升高MAP的研究結果相呼應[18]。并且本研究在SHR PVN微量注射Etanercept或IL-1ra預處理阻斷TNF-α或IL-1β效應后，發現SHR靜脈應用六烴季銨引起血壓回升時間延長以及RSNA變化減少的效應均得到顯著改善，這表明抑制PVN 中PICs能顯著減弱SHR增強的交感神經活動。

然而，高血壓中樞顯著增加的PICs在高血壓發病機制中的作用研究尚不明確。谷氨酸作為一種主要的興奮性神經遞質在中樞神經系統(包括PVN)發揮調控交感神經活動的作用[9]。PVN存在大量的谷氨酸免疫活性突觸和NMDAR[19,20]。大鼠PVN中微量注射谷氨酸或NMDA均引起顯著的交感神經活動增強和血漿去甲腎上腺素水平升高[7,8]。本研究兩組大鼠PVN微量注射兩種NMDAR拮抗劑APV和MK-801 RSNA 和MAP均顯著降低。并且PVN應用APV或MK-801預處理亦顯著削弱PVN 微量注射TNF-α或IL-1β引起的RSNA增強和MAP 升高效應。以上研究表明PVN中NMDAR在PICs促進高血壓交感神經活動增強中起重要作用。

對于高血壓的研究大多集中外周心臟和血管的病理改變在高血壓病發生、發展中的作用方面[21,22]，但仍存在諸多問題，其發病機制至今不是十分清楚。本研究從神經調控角度研究高血壓發病機制，初步觀察到中樞炎癥機制參與交感神經過度增強促進高血壓發生、發展。SHR PVN中的PICs，包括TNF-α、IL-1β及其受體均表達增加并促進SHR基礎交感神經活動的增強；PVN中NMDAR介導SHR PVN 中TNF-α、IL-1β促進交感活動增強和血壓升高的效應。

[1] Di RD, Musiari G, Grova M, et al. The “neurocentric” approach to essential hypertension: how reliable is the paradigm of hyperkinetic hypertension? A focus on the sympathetic nervous system dysregulation in essential hypertensive patients with elevated resting heart rate [J]. Curr Pharm Des, 2017. doi: 10.2174/1381612823666170911102711.

[2] Hogarth AJ, Mackintosh AF, Mary DA. The sympathetic drive after acute myocardial infarction in hypertensive patients [J]. Am J Hypertens, 2006, 19(10): 1070-1076.

[3] Badoer E. Hypothalamic paraventricular nucleus and cardiovascular regulation [J]. Clin Exp Pharmacol Physiol, 2001, 28(1-2): 95-99.

[5] Guggilam A, Patel KP, Haque M, et al. Cytokine blockade attenuates sympathoexcitation in heart failure: cross-talk between nNOS, AT-1R and cytokines in the hypothalamic paraventricular nucleus [J]. Eur J Heart Fail, 2008, 10(7): 625-634.

[6] Francis J, Zhang ZH, Weiss RM, et al. Neural regulation of the proinflammatory cytokine response to acute myocardial infarction [J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2004, 287(2): H791-H797.

[7] Kannan H, Hayashida Y, Yamashita H. Increase in sympathetic outflow by paraventricular nucleus stimulation in awake rats [J]. Am J Physiol, 1989, 256(6 Pt 2): R1325-R1330.

[8] Katafuchi T, Oomura Y, Kurosawa M. Effects of chemical stimulation of paraventricular nucleus on adrenal and renal nerve activity in rats [J]. Neurosci Lett, 1988, 86(2):195-200.

[9] Li DP, Pan HL. Glutamatergic inputs in the hypothalamic paraventricular nucleus maintain sympathetic vasomotor tone in hypertension [J]. Hypertension, 2007, 49(4): 916-925.

[10] Han Y, Zhang Y, Wang HJ, et al. Reactive oxygen species in paraventricular nucleus modulates cardiac sympathetic afferent reflex in rats [J]. Brain Res. 2005, 1058: 82-90.

[11] Liu JL, Irvine S, Reid IA, et al. Chronic exercise reduces sympathetic nerve activity in rabbits with pacing-induced heart failure: A role for angiotensin II [J]. Circulation. 2000, 102: 1854-1862.

[12] Fujita M, Ando K, Nagae A, et al. Sympathoexcitation by oxidative stress in the brain mediates arterial pressure elevation in salt-sensitive hypertension [J]. Hypertension, 2007, 50(2): 360-367.

[13] 毛紅亞,劉云鵬, 王子皓, 等. 血小板通過炎癥反應在鹽敏感性高血壓中的作用機制研究 [J]. 中國比較醫學雜志, 2017, 27(5): 23-30.

[14] Buchanan JB, Johnson RW. Regulation of food intake by inflammatory cytokines in the brain [J]. Neuroendocrinology, 2007, 86(3): 183-190.

[15] Kang YM, Zhang ZH, Xue B, et al. Brain pro-inflammatory cytokines contribute to sympathetic drive in heart failure [J]. Faseb J, 2007, 21(6): A1266.

[16] Zhu GQ, Xu Y, Zhou LM, et al. Enhanced cardiac sympathetic afferent reflex involved in sympathetic overactivity in renovascular hypertensive rats [J]. Exp Physiol, 2009, 94(7): 785-794.

[17] Han Y, Fan ZD, Yuan N, et al. Superoxide anions in paraventricular nucleus mediate the enhanced cardiac sympathetic afferent reflex and sympathetic activity in renovascular hypertensive rats [J]. J Appl Physiol, 2011, 110(3): 646-652.

[18] Shi Z, Jiang SJ, Wang GH, et al. Pro-inflammatory cytokines in paraventricular nucleus mediate the cardiac sympathetic afferent reflex in hypertension [J]. Auton Neurosci, 2014, 186: 54-61.

[19] Khan AM, Stanley BG, Bozzetti L, et al. N-methyl-D-aspartate receptor subunit NR2B is widely expressed throughout the rat diencephalon: an immunohistochemical study [J]. J Comp Neurol, 2000, 428(3): 428-449.

[20] Herman JP, Eyigor O, Ziegler DR, et al. Expression of ionotropic glutamate receptor subunit mRNAs in the hypothalamic paraventricular nucleus of the rat [J]. J Comp Neurol, 2000, 422(3): 352-362.

[21] 鄭婧. 自發性高血壓大鼠心肌組織microRNA-97a與TGF-β1蛋白表達的改變及意義 [J]. 中國比較醫學雜志, 2016, 26(11): 72-76.

[22] 侯永蘭, 李石林, 劉玲玲. MicroRNA-137與Ang II在自發性高血壓大鼠心臟重構中的作用 [J]. 中國比較醫學雜志, 2016, 26(7): 52-56.

NMDARinparaventricularnucleusmediatesenhancedsympatheticactivitiescausedbypro-inflammatorycytokinesinspontaneouslyhypertensiverats

LU Peng1， PAN Hong2， MA Chun-lei2,3， SHI Zhen2*

(1.Yantai Affiliated Hospital of Binzhou Medical University, Yantai 264100, China； 2.Department of Physiology, Binzhou Medical University, Yantai 64003； 3.Shandong Province Key Laboratory of Stroke, Yantai 264003)

ObjectiveTo investigate whether pro-inflammatory cytokines (PICs) in the paraventricular nucleus (PVN) regulate the enhanced sympathetic activities in spontaneously hypertensive rats (SHR), and whether N-methyl-D-aspartate receptor (NMDAR) in PVN mediate the effects of PICs on sympathetic activities．MethodsSHR and normotensive wistar-Kyoto(WKY)rats were used in this experiment． TNF receptor and IL-1β receptor (IL-1RI) protein levels were measured by Western blot. PICs, including TNF-α and IL-1β levels were measured by ELISA. Rats were placed in a stereotaxic instrument to complete the microinjection of drugs. The coordinates for the PVN were determined according to the Paxinos and Watson rat atlas. The raw RSNA and integrated RSNA were simultaneously recorded on a PowerLab data acquisition system. The right carotid artery was cannulated for recording of mean arterial pressure (MAP).ResultsTNF-α receptor p55TNFR, p75TNFR and IL-1β receptor IL-1RI protein expression and TNF-α and IL-1β levels in PVN were all increased in SHR compared with WKY rats (P< 0.05). Bilateral microinjection of etanercept or IL-1ra into PVN to block the effects of TNF-α or IL-1β decreased the sympathetic activities in SHR rats significantly (P< 0.05). Bilateral microinjection of NMDAR blockers, both DL-2amino-5-phosphonovaleri acid (APV) and MK-801 (Dizocilpine) into PVN decreased the RSNA and MAP in both SHR and WKY rats. APV or MK 801 caused greater decreases in RSNA and MAP in SHR than WKY rats. In addition, pretreatment with APV or MK 801 attenuated the increased RSNA and MAP caused by microinjection of TNF-α or IL-1β into PVN to a lower level in SHR than in WKY rats (P< 0.05).ConclusionsTNF and IL-1β receptor protein as well as TNF-α and IL-1β cytokines levels in PVN are all increased in SHR rats. NMDAR in PVN mediates enhanced sympathetic activities and elevated blood pressure caused by TNF-α and IL-1β in SHR.

Spontaneously hypertensive rats; NMDA receptor; Sympathetic activities; Pro-inflammatory cytokines;Paraventricular nucleus

山東省醫藥衛生科技發展計劃項目(2016WS0051)；山東省自然科學基金(BS2015YY036)。

逯鵬(1981-)，男，碩士，研究方向：心血管活動的神經調控。E-mail: bylupeng@163.com

施真(1981-)，女，博士，副教授，碩士研究生導師，研究方向：心血管活動的神經調控。E-mail: zhen_shizhen@163.com

R-33

A

1671-7856(2017) 12-0021-07

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.12.004

2017-09-18