王 雨, 何盛南, 蔡志明, 牟麗莎
(1. 中山大學 醫學院, 廣州 510275; 2. 深圳市第二人民醫院, 深圳 518035)
溫度對微囊化重組CHO細胞生長和去氨普酶表達的影響
王 雨1,2, 何盛南1,2, 蔡志明2, 牟麗莎1,2
(1. 中山大學 醫學院, 廣州 510275; 2. 深圳市第二人民醫院, 深圳 518035)
為了研究不同溫度對微囊化rCHO細胞生長代謝和重組蛋白表達影響,采用不同溫度培養微囊化rCHO細胞,經MTT法測定細胞生長曲線,生物傳感器測定葡萄糖和乳酸代謝,纖溶平板測定去氨普酶(DSPA,Desmodus rotundus salivary plasminogen activator)蛋白表達量。結果表明,低溫培養降低微囊化rCHO的增殖速率和細胞密度,但提高了重組蛋白的生產。可見溫度顯著影響微囊化rCHO的生長代謝和重組蛋白表達,33℃下可以將DSPA蛋白生產量最大提高41%。
微膠囊;溫度;重組蛋白表達;細胞培養
去氨普酶(DSPA,Desmodus rotundus salivary plasminogen activator) 是一種從南美吸血蝙蝠唾液中提取的纖溶酶原激活劑,也是第3代溶栓藥物[1]。與第1代和第2代溶栓藥物,如tPA、uPA等相比,DSPA具有高度的溶栓能力,而且纖維蛋白特異性更高,不易引起出血性并發癥[2-3],目前已進入Ⅱ期臨床試驗。DSPA可通過重組技術在中國倉鼠卵巢細胞(CHO)中進行生產[4],通過哺乳動物細胞生產蛋白藥物也是生物制藥的發展趨勢[5]。哺乳動物細胞的大規模培養越來越多地采用無血清培養基,可以避免血清源性污染和有利于下游產品的純化,但是同時也易造成細胞的凋亡,降低了細胞的蛋白表達能力。我國每年發生缺血性腦卒中的人口約有200萬,臨床治療劑量巨大,如何高效地表達蛋白成為重要的研發環節。
從當前發展趨勢來看,使用攪拌式生物反應器進行懸浮細胞的無血清培養是目前世界范圍內各大生物公司產業化生產的發展方向。……