王 雨, 何盛南, 蔡志明, 牟麗莎
(1. 中山大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 廣州 510275; 2. 深圳市第二人民醫(yī)院, 深圳 518035)
溫度對(duì)微囊化重組CHO細(xì)胞生長(zhǎng)和去氨普酶表達(dá)的影響
王 雨1,2, 何盛南1,2, 蔡志明2, 牟麗莎1,2
(1. 中山大學(xué) 醫(yī)學(xué)院, 廣州 510275; 2. 深圳市第二人民醫(yī)院, 深圳 518035)
為了研究不同溫度對(duì)微囊化rCHO細(xì)胞生長(zhǎng)代謝和重組蛋白表達(dá)影響,采用不同溫度培養(yǎng)微囊化rCHO細(xì)胞,經(jīng)MTT法測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,生物傳感器測(cè)定葡萄糖和乳酸代謝,纖溶平板測(cè)定去氨普酶(DSPA,Desmodus rotundus salivary plasminogen activator)蛋白表達(dá)量。結(jié)果表明,低溫培養(yǎng)降低微囊化rCHO的增殖速率和細(xì)胞密度,但提高了重組蛋白的生產(chǎn)。可見溫度顯著影響微囊化rCHO的生長(zhǎng)代謝和重組蛋白表達(dá),33℃下可以將DSPA蛋白生產(chǎn)量最大提高41%。
微膠囊;溫度;重組蛋白表達(dá);細(xì)胞培養(yǎng)
去氨普酶(DSPA,Desmodus rotundus salivary plasminogen activator) 是一種從南美吸血蝙蝠唾液中提取的纖溶酶原激活劑,也是第3代溶栓藥物[1]。與第1代和第2代溶栓藥物,如tPA、uPA等相比,DSPA具有高度的溶栓能力,而且纖維蛋白特異性更高,不易引起出血性并發(fā)癥[2-3],目前已進(jìn)入Ⅱ期臨床試驗(yàn)。DSPA可通過重組技術(shù)在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)中進(jìn)行生產(chǎn)[4],通過哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)蛋白藥物也是生物制藥的發(fā)展趨勢(shì)[5]。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)越來越多地采用無血清培養(yǎng)基,可以避免血清源性污染和有利于下游產(chǎn)品的純化,但是同時(shí)也易造成細(xì)胞的凋亡,降低了細(xì)胞的蛋白表達(dá)能力。我國(guó)每年發(fā)生缺血性腦卒中的人口約有200萬,臨床治療劑量巨大,如何高效地表達(dá)蛋白成為重要的研發(fā)環(huán)節(jié)。
從當(dāng)前發(fā)展趨勢(shì)來看,使用攪拌式生物反應(yīng)器進(jìn)行懸浮細(xì)胞的無血清培養(yǎng)是目前世界范圍內(nèi)各大生物公司產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的發(fā)展方向。……