川芎藥材及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

錢曉磊

江蘇省中醫(yī)院（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院）藥學(xué)部 江蘇省南京市 210029

川芎藥材及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究

錢曉磊

江蘇省中醫(yī)院（南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院）藥學(xué)部 江蘇省南京市 210029

目的：分析川芎藥材及飲片質(zhì)量控制方法，以便提升其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：以川芎為研究對象、甲醇-水（52:18）為流動相、丁苯酞為替代對照品，采用高效液相色譜法（HPLC）以相對較正因子測定其成分內(nèi)丁苯酞、藁本內(nèi)酯的含量。結(jié)果：以干燥品為計算標(biāo)準(zhǔn)，川芎藥材成分內(nèi)丁苯酚≥0.031%、藁本內(nèi)酯≥0.81%，而飲片成分內(nèi)的丁苯酚≥0.027%、藁本內(nèi)酯≥0.061%。結(jié)論：經(jīng)過限制川芎藥材及飲片內(nèi)丁苯酚、藁本內(nèi)酯含量，可以有效完善川芎藥材及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，便于川芎藥材及飲片質(zhì)量控制。

川芎；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；丁苯酚；藁本內(nèi)酯

川芎是一種中藥植物，辛溫香燥，常用于活血行氣、祛風(fēng)止痛，適用于瘀血阻滯各種病癥、風(fēng)頭痛、風(fēng)濕痹的治療[1]。現(xiàn)代藥理學(xué)指出，該藥含有多種活性成分，如揮發(fā)油類（苯酞類化合物）、生物堿、有機酸等，其中苯酞類化合物（丁苯酚、藁本內(nèi)酯）的舒張血管、改善微循環(huán)等作用較強，是治療心腦血管疾病的重要成分，是評價川芎質(zhì)量的重要指標(biāo)，然而化學(xué)穩(wěn)定性較差，無法成為國家法定的含量測定對照品。相關(guān)研究提出，在同一時間內(nèi)采用替代對照品法對川芎的丁苯酚、藁本內(nèi)酯成分含量進(jìn)行測定，以丁苯酞為藁本內(nèi)酯的替代對照品，兩者在相對校正因子計算下可以取得理想的效果[2]。鑒于此，本文進(jìn)一步測定川芎藥材及飲片內(nèi)丁苯酞、藁本內(nèi)酯成分的含量，以便明確其含量的限度標(biāo)準(zhǔn)，不斷完善川芎材及飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如下。

1 資料與方法

1.1 試驗儀器與試劑

Agilent Eclipse ΧDB-C18、Agilent120°高效液相色譜儀、色譜柱、AUW220D型十萬分之一天平、KQ-300B超聲波清洗儀、Milli- Integral 3超純水機。

川芎藥材來自于四川的多個城市，川芎飲片由四川中藥材飲片公司提供，均經(jīng)過四川省中醫(yī)藥科學(xué)院舒光明研究員鑒定。

丁苯酞對照品、藁本內(nèi)酯對照品自制，以水作為超純水，以甲醇作為色譜純，其余試劑均作為分析純。

1.2 方法

1.2.1 丁苯酚、藁本內(nèi)酯的對照品溶液與兩者混合對照品溶液的配置

丁苯酚對照品溶液，20mg丁苯酞對照品置于25mL工量瓶內(nèi)，加以無水乙醇溶解，直至刻度，充分搖勻成丁苯酞對照品母液，取1.0ml置入10ml量瓶內(nèi)，加以無水乙醇溶解，直至刻度，充分搖勻成丁苯酞對照品溶液Ⅰ，從中取1.0ml，按照上述方法完成操作，得到丁苯酞對照品溶液Ⅱ；藁本內(nèi)酯對照品溶液：取25mg藁本內(nèi)酯對照品置入25ml棕色量瓶內(nèi)，同時加入無水乙醇進(jìn)行溶解、稀釋、定容，直到刻度，然后充分搖勻，即藁本內(nèi)酯對照品母液，取出1.0ml藁本內(nèi)酯對照品母液置入10ml棕色量瓶內(nèi)，并按照以上方法完成操作即可；兩者混合對照品溶液：丁苯酞對照品母液、藁本內(nèi)酯對照品母液分別量取1.0ml，均置入同一10ml棕色量瓶內(nèi)，加以甲醇-水，直到刻度，充分搖勻即可。

1.2.2 供試品溶液的配置

0.2 g供試品粉末置于具塞錐形瓶內(nèi)，加以25ml甲醇，稱重量，提供超聲處理0.5h，冷卻，再稱重量，然后選用甲醇補足減失的重量，充分搖勻、濾過，量取續(xù)濾液置入棕色瓶內(nèi)即可。

1.2.3 色譜條件

柱溫（35℃）、流動相（甲醇-水）、色譜柱（Agilent Eclipse ΧDB）、丁苯酞與藁本內(nèi)酯的檢測波長分別為230nm、330nm，流速（1.0ml·min-1。

2 結(jié)果

2.1 丁苯酞、藁本內(nèi)酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線與湘桂校正因子f值

把進(jìn)樣量Χ作為橫坐標(biāo)；把峰面積Y作為縱坐標(biāo)，然后分別計算丁苯酚、藁本內(nèi)酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相對校正因子f值，詳見表1所示。

表1：丁苯酞、藁本內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)曲線、湘桂校正因子f值的比較

2.2 精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗

精密度操作如下：取5μL同一川芎樣品溶液注入液相色譜儀，分別測定丁苯酞、藁本內(nèi)酯峰而積，連做6次，測得丁苯酞、藁本內(nèi)酯的RSD分別是0.07%、0.13%，說明儀器精密性完好；穩(wěn)定性：取5μL同一川芎樣品溶液，共測定6次，分別每隔一定時間進(jìn)行一次測定，測得結(jié)果顯示出丁苯酞RSD為1.20%、藁本內(nèi)酯RSD為0.79%，說明24小時內(nèi)測定結(jié)果處于穩(wěn)定狀態(tài)；重復(fù)性試驗：平行取6份同一川樣品溶液測得丁苯酞RSD為1.57%、藁本內(nèi)酯RSD為0.95%，說明此方法具備良好的重復(fù)性。

2.3 加樣回收率

0.1 g丁苯酞的川芎樣品溶液加入1.0mL丁苯酚對照品溶液內(nèi)，測得平均回收率（97.50%）、RSD（1.23%），見表2。

表2：丁苯酞、藁本內(nèi)酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線與湘桂校正因子f值

表3：樣品含量測定

2.4 樣品含量測定

以甲苯法測定川芎樣品的水分、以高低濃度相結(jié)合方法對川芎藥材與飲片內(nèi)丁苯酞、藁本內(nèi)酯成分含量進(jìn)行測定，然后利用藁本內(nèi)酯對照品外標(biāo)法對所測定結(jié)果的準(zhǔn)確性予以驗證，同時與相應(yīng)樣品水分相結(jié)合，按照干燥品方式分別計算出丁苯酞、藁本內(nèi)酯成分含量，詳見表3。

3 討論

就川芎藥材及飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)而言，合理、正確的方法對其成分含量的鑒定具有重要意義，是由于優(yōu)化質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，有助于提升藥效，確保藥物質(zhì)量水平[3]。目前，針對川芎藥材及飲片質(zhì)量測定主要是以丁苯酚、藁本內(nèi)酯為主，并通過薄層色譜法、HPLC法的應(yīng)用，可以有效提高川芎藥材及飲片成分的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本文以川芎藥材及飲片為研究對象，以對照品替代法優(yōu)化方式、HPLC法測定不同地區(qū)不同批號且具有一定程度代表性的川芎藥材及飲片內(nèi)丁苯酚、藁本內(nèi)酯含量，目的在于為川芎藥材及飲片的質(zhì)量控制提供科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)。研究結(jié)果顯示，川芎藥材的丁苯酞成分含量波動范圍為0.0215%～0.0683%，而川芎飲片的丁苯酚成分含量波動范圍為0.0104～0.0483%；川芎藥材的藁本內(nèi)酯成分含量波動范圍為0.597%～1.1480%、而川芎飲片的藁本內(nèi)酯成分含量的波動范圍在0.451%～1.310%之間，將兩者結(jié)果在干燥品方式作用下進(jìn)行計算，顯示出川芎藥材的丁苯酞、藁本內(nèi)酯成分含量分別≥0.031%、≥0.81%，而川芎飲片的丁苯酚成分≥0.027%、藁本內(nèi)酯成分含量≥0.061%，有助于川芎藥材與飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供重要依據(jù)。

由于樣品內(nèi)丁苯酞含量為0.031%、藁本內(nèi)酯含量為0.081%，兩者之間含量相差28倍，差異顯著，因此在配置兩種不同濃度對照品時應(yīng)該分別和供試品內(nèi)丁苯酚、藁本內(nèi)酯含量相匹配，具體是指運用濃度對照品對藁本內(nèi)酯成分含量進(jìn)行測定，同時采用低濃度對照品對丁苯酚成分含量進(jìn)行測定。除此之外，在配置樣品期間分析比較川芎常規(guī)提取溶劑與提取所需時間，得出70%甲醇、70%乙醇、甲醇、乙醇4種溶劑，提取效果最差的是乙醇，而甲醇提取溶液內(nèi)2種成分峰而積均較其他提取液大，所以可以確定甲醇為提取溶劑，一旦明確提取溶劑，便運用超聲處理15min、0.5小時、1小時，結(jié)果得出，超聲處理0.5小時的效果最佳且耗時短。因此，可以明確以超聲處理0.5小時為宜。

總之，經(jīng)過限制川芎藥材及飲片內(nèi)丁苯酚、藁本內(nèi)酯含量，可以有效提升川芎藥材及飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

[1]呂非非.川芎飲片不同等級質(zhì)量評價研究[D].成都中醫(yī)藥大學(xué),2014.

[2]田璐.白芍等十二種常用中藥飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[D].北京中醫(yī)藥大學(xué),2014.

[3]劉曉芬.中藥川芎飲片效期相關(guān)因素研究[D].成都中醫(yī)藥大學(xué),2014.

[4]林瑞東.川芎配方顆粒生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[D].吉林大學(xué),2015.

[5]姚藝新,華芳,洪遠(yuǎn)林,等.川芎藥材、飲片及其中成藥抗血小板聚集活性的生物檢定方法學(xué)研究[J].中草藥,2017,48(11):2249-2254.

錢曉磊（1988-），女，江蘇省南京市人。大學(xué)本科學(xué)歷，學(xué)士學(xué)位。中藥師。主要從事門診中藥房調(diào)配工作。