高效液相色譜法檢測紡織品中孔雀石綠染料

薛建平++林麗云+陳金泉++裴德君

摘要

本文以1%甲酸-乙腈為提取溶劑，結合超聲波提取前處理和高效液相色譜分析技術，建立了紡織品中孔雀石綠染料的快速檢測方法。該方法的平均回收率為93.4%～98.7%，相對標準偏差小于5%，方法檢出限為0.01mg/kg，定量限為0.03mg/kg。方法簡單快速、準確度高、檢出限低，可滿足紡織品中孔雀石綠含量的日常檢測要求。

關鍵詞：紡織品；孔雀石綠染料；高效液相色譜

1 引言

孔雀石綠是一類三苯甲烷類染料，被廣泛應用于制陶業、紡織業、皮革業、食品染色和細胞化學染色，既是工業性染料，又是一種殺真菌劑[1]。在紡織領域中，孔雀石綠染料主要用于絲綢、羊毛的染色。但孔雀石綠與人體長期接觸，會進入人體還原成無色孔雀石綠，該物質具有致畸致癌的危害[2]。2016年1月，國際環保紡織協會發布了新一版OEKO-TEX Standard 100，新標準將孔雀石綠作為禁用致癌染料列入其中。但目前，紡織品中孔雀石綠的檢測方法還未見有文獻報道。

目前國內外與孔雀石綠檢測相關的研究多集中在水和水產品上。對于水和水產品中孔雀石綠的檢測，已報道的檢測方法主要有高效液相色譜法[3-5]和高效液相色譜串聯質譜聯用法[6-7]，其中前者設備價格相對低廉，開發的檢測方法易于推廣。本文采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器（HPLC-DAD）對紡織品中的孔雀石綠染料進行分析研究，建立一套可靠的定性定量檢測方法。

2 試驗部分

2.1 試劑和材料

孔雀石綠標準品（CAS號為2437-29-8），純度為97%，購于Dr. Ehrenstorfer公司；乙腈、甲酸均為色譜純；乙酸銨、乙酸純度均大于99%；試驗水為超純水。

1%甲酸-乙腈提取溶劑的配制：在100mL乙腈中加入1mL的甲酸，混勻。

標準儲備液的配制：分別準確稱取適量的孔雀石綠標準品，用1%甲酸-乙腈配制成濃度為1000mg/L的標準儲備液。使用時，用1%甲酸-乙腈逐級稀釋配制成1.0mg/L、0.75mg/L、0.25mg/L、0.1mg/L、0.03mg/L系列混合標準工作溶液。

2.2 設備和儀器

1260高效液相色譜儀-二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）；ZORBAX SB-CN色譜柱、ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（4.6mm×250mm，膜厚5μm，美國Agilent公司）；超聲波發生器（昆山市超聲儀器有限公司）；聚四氟乙烯過濾膜（0.22?m）。

2.3 試驗方法

2.3.1 試樣提取

取紡織試樣，剪成約5mm×5mm的小片，混勻。從混合樣中稱取1.0g（精確至0.01g），置于50mL具密封塞的管狀瓶中，準確移取10mL的1%甲酸-乙腈，于超聲波發生器中室溫下萃取20min，用0.22μm聚四氟乙烯膜過濾后供色譜分析。

2.3.2 儀器分析

色譜柱：ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱（250mm×4.6mm，5?m）；柱溫30℃；進樣體積20?L；流動相乙腈：0.1mol/L乙酸銨緩沖液（用乙酸調至pH=4.5）為60：40；流速1.0mL/min；DAD檢測器波長618nm。

3 結果與討論

3.1 提取溶劑的選擇

對于在水產品中孔雀石綠殘留量的檢測，一般采用乙腈作為提取溶劑。徐彥輝[6]等人認為，在酸性條件下對孔雀石綠進行提取，可提高回收率。本試驗比較了乙腈和1%甲酸-乙腈對紡織品中孔雀石綠的提取效果，在本試驗的考察范圍內，乙腈對目標物的提取回收率僅為75.8%，而使用含1%甲酸的乙腈作為提取溶劑，目標物的回收率大幅提高，達97.5%。因此，試驗確定采用1%甲酸-乙腈作為提取溶劑。

3.2 色譜柱的選擇

本試驗在其他條件相同的情況下，考察了ZORBAX SB-CN柱（4.6mm×250mm，5μm）和ZORBAX Eclipse Plus C18柱（4.6mm×250mm，5μm）對孔雀石綠的分析效果，結果見圖1～圖2。圖中的結果表明，使用該兩種色譜柱，目標物的峰形都很好。但考慮到使用ZORBAX Eclipse Plus C18柱時目標物峰寬會略窄些且保留時間適中，因此試驗最終選用ZORBAX Eclipse Plus C18柱進行色譜分離。

3.3 檢測波長的選擇

在190nm～900nm波段對孔雀石綠的標準溶液進行DAD光譜掃描，光譜圖見圖3。如圖所示，孔雀石綠在316nm、426nm和618nm三個波長處有吸收，其中618nm處的吸收最強，因此試驗選擇618nm作為孔雀石綠的檢測波長。

3.4 流動相的選擇

試驗以乙腈-乙酸銨緩沖液體系為流動相，考察了乙腈與乙酸銨緩沖液的不同體積比例對孔雀石綠的分析效果，選擇體積分數分別為40%、50%、60%、70%、80%的乙腈溶液進行試驗，結果見表1。表中的結果表明，隨著流動相乙腈的體積比例增大，分析物的保留時間逐漸縮短，峰寬逐漸變窄，峰面積也隨之小幅增大。當乙腈體積分數為70%～80%時，分析物的峰寬較窄，但出峰時間太早，容易被雜質峰干擾；當乙腈體積比例小于60%時，峰形寬大拖尾，出峰時間太長；當乙腈的體積分數為60%時，峰形尖銳對稱，保留時間適中，避開了雜質峰的干擾。因此，本試驗選擇體積比例為60%乙腈作為分析流動相。

3.5 線性關系與方法檢出限

在優化的條件下，取1.1中的系列標準工作溶液進樣分析，以目標物的質量濃度對峰面積進行線性回歸，結果表明孔雀石綠在0.03mg/L～1.0mg/L范圍內具有良好的線性關系，其相關系數R2為0.9998。以信噪比大于3確定方法的檢出限，以信噪比大于10確定方法的定量限，孔雀石綠的方法檢出限和定量限分別為0.01mg/kg和0.03mg/kg。endprint

3.6 方法的回收率和精密度

在1.0g的空白毛紡織貼襯布中添加不同量的孔雀石綠標準溶液，使水平分別為0.03mg/kg、0.25mg/kg、1.0mg/kg，按優化的條件進行加標回收試驗，每個水平做7次平行試驗，得到的回收率和相對標準偏差（RSD）見表2。由結果可知，孔雀石綠的平均回收率為93.4%～98.7%，RSD為1.3%～3.5%，符合日常檢測的要求。

4 結論

采用高效液相色譜法測定紡織品中的孔雀石綠的方法為：選用1%甲酸-乙腈對紡織品中的孔雀石綠進行超聲提取，選擇ZORBAX Eclipse Plus C18色譜柱進行分離，以乙腈/0.1mol/L乙酸銨緩沖液（60/40，v/v）作為流動相，在618nm的DAD波長下進行檢測。方法的平均回收率為93.4%～98.7%，RSD為1.3%～3.5%，方法檢出限為0.01mg/kg，定量限為0.03mg/kg。該方法檢出限低，準確度和精密度高，能夠滿足紡織品中孔雀石綠的檢測要求。

參考文獻：

[1]Culp S J，Beland F A.Malachite green： a toxicological review[J].Journal of the American College of Toxicology，1996，15（3）：219-238.

[2]何麗華，沈國順，鄒偉，等.孔雀石綠及其危害[J].特養與水產，2006（5）：45-48.

[3]楊金蘭，陳培基，黎智廣，等.高效液相色譜法測定水產品孔雀石綠殘留量的優化研究[J].南方水產，2010，6（4）：43-48.

[4]吳仕輝，朱新平，鄭光明，等.高效液相色譜法檢測水產品中的孔雀石綠和結晶紫[J].廣東海洋大學學報，2009，29（1）：54-57.

[5]李永夫，高華鵬，姚芳，等.高效液相色譜法檢測鰻魚中孔雀石綠及其代謝物殘留[J].安徽農業科學，2009，37（1）：31-33.

[6]徐彥輝，顧亮，蔣俊樹，等.液相色譜串聯質譜法測定養殖水體中孔雀石綠及其代謝物[J].化學分析計量，2011，20（2）：49-51.

[7]孫言春，李池陶，杜寧寧，等.超高效液相色譜串聯質譜法測定水體與底泥中孔雀石綠及隱色孔雀石綠殘留[J].分析測試學報，2013，32（2）：205-210.

（作者單位：福建省纖維檢驗局）endprint