撒瓦那柏芽誘導增殖試驗

周余華　金文浩　鄒迎子

摘要：以撒瓦那柏1年生莖尖作為外植體，研究氯化汞對外植體的影響，并篩選合適的初代和繼代培養激素添加。結果發現，對撒瓦那柏莖尖用01%氯化汞處理7～8 min滅菌效果最好，用MS作為初代培養基，添加1 mgL 6-BA 誘導率達60%，添加005 mgLNAA誘導率達80%；以MS+6-BA 05 mgL+NAA 005 mgL為繼代培養基，誘導率達795%。

關鍵詞：撒瓦那柏；滅菌；芽誘導；增殖培養

中圖分類號： S68704+3文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2017）21-0039-03[

收稿日期：2016-06-02

基金項目：江蘇農林職業技術學院鄉土樹種種質資源創新團隊項目（編號：2013td04）。

作者簡介：周余華（1964—），男，江蘇泰興人，博士，副教授，主要從事園林植物生理生態研究及教學生產。E-mail：uua16hot@126com。

撒瓦那柏（Chamaecyparis pisifera cv aurea）別稱金色海岸線、金葉日本花柏、金葉撒瓦那扁柏，為柏科扁柏屬植物，屬于常綠彩化針葉樹中的黃化品種。樹皮呈薄片紅褐色。鱗葉緊貼，小枝下垂，細長。3月開花，雌球花單生枝頂，雄球花橢圓形，雌雄同株，球果11月成熟，種子有棱角微扁卵圓形，種鱗盾形木質。溫帶及亞熱帶樹種，性喜溫暖濕潤氣候，喜光，抗寒耐旱耐半陰，喜深厚沙壤土，能適應平原環境。幼苗期每年的生長量較小，到郁閉后才會進入旺盛生長階段，耐修剪。生長高度和蓬徑均可達12 m。原產日本，我國北京、南京、青島、廬山、上海、杭州等地均有栽培，上海市綠化管理局推薦的新優植物品種名錄中就有該種植物[1]。撒瓦納柏姿態婆娑，枝黃纖弱，觀賞價值良好，可用于多種場合，如在園林中可叢植、群植、孤植于供庭園、門邊、屋隅；花園里可以將其布置成小土丘狀，新葉呈現明亮金黃色，垂下的枝條好似一個小瀑布姿態優雅，盡顯品味，可以給人帶來愜意舒暢的感覺。因此，撒瓦納柏是園林中色塊運用、模紋鑲拼、彩籬構建的絕佳材料，是稀少的色彩穩定的柏科植物[2-3]。然而，由于其繁殖速度緩慢，市場上還沒有銷售。

撒瓦那柏可以進行播種、扦插和壓條繁殖，但是都存在一定的不足，因此通過組織培養加快撒瓦納柏的繁殖速度就成為一條很重要的快繁捷徑。本研究對撒瓦納柏采用不同的氯化汞消毒時間，啟動培養和繼代培養的培養基和激素添加，確立最佳氯化汞消毒時間、最佳培養基及激素配比濃度，為撒瓦那柏組織培養的進一步研究奠定良好基礎，為撒瓦那柏規模化生產和工廠化育苗提供技術支撐。

1材料與方法

11試驗材料

本試驗所采用的材料來自江蘇農林職業技術學院苗圃，在連續放晴4 d后于2015年3月7日采集撒瓦那柏健壯1年生莖段的無病蟲害外植體。

12試驗設計及方法

121外植體的整理

摘取撒瓦那柏1年生枝條的莖尖，剪切成長約25 cm的莖段，放入白瓷缸中用加了少量洗衣粉的水搓洗2 min，將泡沫淘洗干凈后于自來水下流水沖洗12 h，待進行消毒處理試驗。

122消毒處理

先用75%乙醇處理30 s，再用01%氯化汞（HgCl2）進行消毒處理，時間分別設置為4、5、6、7、8、9 min 6個處理，最后用無菌水沖洗4次，殘留的水分用無菌濾紙吸取。將消毒完畢的莖尖置于無菌紙上，用剪刀、鑷子剪去莖尖的下端02 cm，以免影響其從培養基中吸收養分，接種于MS[HJ14mm]培養基上，每處理接種20瓶，每個試管型組培瓶放1個外植體。培養基為MS+30 gL蔗糖+7 gL瓊脂。每隔1 d觀察1次外植體的污染情況，8 d后對外植體的死亡率、污染率和成活率進行統計。

13啟動培養

篩選不同的培養基MS、12MS、WPM，選用不同的6-BA[HJ]和NAA的濃度：6-BA濃度分別為05、10、15 mgL，NAA的濃度分別是005、010、020 mgL，共計18種處理，每種處理20瓶，每試管瓶置1個外植體（表1）。研究不同激素不同濃度下外植體萌芽情況。萌發率=萌發數接種數×100%。

14繼代增殖培養技術研究

將啟動培養中的撒瓦納柏莖段枯黃部分剪去，將誘導的芽體接入6-BA和NAA混合激素的MS培養基中，誘導其產生叢生芽并使其擴繁。繼代增殖培養采用3種激素濃度的方法進行梯度試驗，共計9種處理，每種處理20瓶，培養基 20 mL瓶（表2）。誘導率=新芽發生數接種數×100%（接種30 d后統計成苗數）。

15培養條件

培養基內均添加7 gL瓊脂和30 gL蔗糖，調節pH值為58～60，在121 ℃高壓下滅菌25 min。將接種后的植物體置于培養室內，光照16 hd，光照度約為2 000 lx，溫度控制在（25±2） ℃。

2結果與分析

21不同消毒時間對撒瓦那柏莖尖污染的影響

不同氯化汞消毒時間對撒瓦那柏莖尖污染率、死亡率有明顯影響（表3）。對外植體處理效果最好的是處理4和處理5，成活率達到570%和572%，污染率最高的也是處理1，達 525%，而死亡率最高的是處理6，達412%，毫無疑問死亡率隨氯化汞處理時間的延長而升高，污染率反而下降，這表明隨著氯化汞處理時間越長，對外植體的傷害也就越大，使植物的細胞失去活力。從表3中各項指標綜合起來可以看出，處理4和處理5是最好的處理條件，也就是在75%的乙醇處理30 s后，用01%氯化汞處理7～8 min外植體的成活率最大。

啟動培養中污染多為真菌污染和細菌污染。其中細菌污染占25%，其菌落較小，嗅一下有臭味，表面呈乳脂狀光澤。真菌污染占172%，其菌落大，顏色多樣，多為黃、白、灰、黑等顏色，表面呈毛絨狀，嗅之一般有霉味。造成污染的來源有很多，有外植體、培養基pH值、激素濃度、操作人員的不恰當操作、培養瓶、接種工具等多方面因素。endprint