肝癌組織中長鏈非編碼RNA CCAT2的表達變化及意義

劉義冰，石軍梅，石帥

(河北醫科大學第四醫院，石家莊 050010)

肝癌組織中長鏈非編碼RNA CCAT2的表達變化及意義

劉義冰，石軍梅，石帥

(河北醫科大學第四醫院，石家莊 050010)

目的觀察長鏈非編碼RNA(LncRNA)結腸癌相關轉錄物2(CCAT2)在肝癌(HCC)組織中的表達變化，并探討其意義。方法收集100例份HCC患者的癌及癌旁組織，采用實時熒光定量PCR法檢測癌及癌旁組織中CCAT2表達；分析癌組織中CCAT2表達與HCC患者臨床病理特征間的關系；Kaplan-Meier法檢測CCAT2表達與患者生存率間的關系。結果LncRNA CCAT2在HCC癌組織中的表達高于癌旁組織(Plt;0.05)；LncRNA CCAT2表達與HCC患者的TNM分期、肝內播散灶及血管侵襲密切相關(P均lt;0.05)，而與患者年齡、性別、腫瘤大小及肝硬化無關(P均gt;0.05)；Log Rank檢驗結果顯示，CCAT2高表達與HCC患者不良預后呈正相關(χ2=6.481,P=0.011)。結論HCC癌組織中LncRNA CCAT2呈高表達，且與TNM分期、肝內播散、血管侵襲有關；檢測LncRNA CCAT2在癌組織中的表達有助于病情判斷。

肝癌；結腸癌相關轉錄物2；長鏈非編碼RNA

肝癌(HCC)是最常見的惡性腫瘤之一，發病率呈逐年上升趨勢，5年生存率較低[1]。據WHO統計，2012年中國新增HCC病例數和死亡病例數均占全球新增病例數和死亡病例數的50%以上[2]。近年來，長鏈非編碼RNA(LncRNA)在生理及疾病過程中扮演的重要角色引起關注。LncRNA指長度超過200 bp的一類非編碼RNA，在細胞分化、個體發育等多種生命活動過程中發揮作用。LncRNA是基因表達的重要調節因子，可在轉錄及轉錄后水平調節基因表達。LncRNA異常表達與人類多種腫瘤密切相關，如前列腺癌、膀胱癌、腎癌等，可通過多種機制參與調控腫瘤形成、侵襲轉移等[2,3]。2016年10月～2017年5月，我們觀察了肝癌組織中LncRNA CCAT2的表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 100例HCC患者的新鮮癌組織及癌旁組織(距離癌組織2 cm)來自我院2009年6月～2011年6月的手術切除標本，所有組織標本經HE染色明確病理診斷，組織標本均置于液氮中保存。患者男45例、女55例，年齡34～81(49.32±3.22)歲。臨床分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期23例，Ⅲ期26例，Ⅳ期30例。腫瘤直徑：lt;5 cm 42例，≥5 cm 58例。有肝硬化47例，無肝硬化53例。肝內播散灶陽性53例，陰性47例。血管侵襲陽性53例，陰性47例。納入對象均未接受過放、化療等。患者均有完整的病歷資料，簽署知情同意書，并經醫院倫理委員會審核同意。100例HCC患者隨訪60個月，其中死亡病例61例。

1.2 肝癌及癌旁組織中LncRNA CCAT2表達檢測 采用qRT-PCR法提取組織總RNA，逆轉錄得到cDNA后，用SYRB Green染料(Q111，南京諾唯贊生物科技有限公司)對CCAT2轉錄水平進行相對定量檢測。qRT-PCR引物由上海英駿生物技術有限公司合成。在qRT-PCR儀(Light Cycler480，瑞士Roche公司)上進行實驗，反應程序：95 ℃，10 min；95 ℃，30 s；60 ℃，1 min，共40個循環。采用2-ΔΔCt方法計算CCAT2相對表達量。在CCAT2表達的統計分析中，將HCC患者分為CCAT2低表達組(CCAT2表達水平低于中位數)和CCAT2高表達組(CCAT2表達水平高于或等于中位數)。

2 結果

2.1 LncRNA CCAT2在肝癌及癌旁組織中表達比較 與癌旁組織相比，CCAT2在87.00%的癌組織中表達升高(87/100)。LncRNA CCAT2在肝癌及癌旁組織中相對表達量分別為4.152±0.310、0.996±0.005，癌組織中CCAT2表達是癌旁組織的4.169倍，差異有統計學意義(Plt;0.05)。

2.2 LncRNA CCAT2表達與HCC患者臨床病理特征的關系 CCAT2表達與HCC患者TNM分期、肝內播散灶及血管侵襲相關(P均lt;0.05)，而與患者年齡、性別、腫瘤大小及肝硬化無關(P均gt;0.05)，見表1。

表1 LncRNA CCAT2表達與HCC患者臨床病理特征的關系[n(%)]

2.3 LncRNA CCAT2表達與HCC患者預后的關系 CCAT2低表達組50例，高表達組50例。CCAT2低表達組、高表達組的生存時間分數分別為(48.13±1.87)、(30.22±7.07)個月，Log Rank檢驗結果顯示，CCAT2高表達與HCC患者不良預后呈正相關(χ2=6.481,P=0.011)。

3 討論

HCC是一種發病率、病死率均較高的一類惡性腫瘤，具有惡性度高、易轉移、復發及預后差等特點，因此深入研究HCC的發生發展機制對HCC的早期診斷和治療尤其重要。CCAT2位于人類染色體8p7位置上，全長1 752 bp。研究發現，CCAT2在多種腫瘤中表達異常升高，發揮癌基因的功能，如乳腺癌、胃癌、結腸癌和肺膠質瘤等[4～6]。

ENCODE計劃顯示，人類基因組中能編碼蛋白質的基因占整個人類基因組的比例不足2%，非編碼RNA約占98%。本研究發現，CCAT2在HCC癌組織中的表達高于癌旁組織，差異有統計學意義，提示CCAT2在HCC中可能亦發揮癌基因功能。進一步研究發現，CCAT2表達與HCC患者腫瘤分期、血管侵襲密切相關，提示CCAT2表達越高，HCC惡性程度越高，患者預后越差。通過查閱文獻發現，CCAT2在不同腫瘤中似乎作用不完全一致。如Qiu等[7]發現CCAT2是肺癌特異性LncRNA，但與肺癌患者的性別、吸煙、TNM分期、腫瘤大小、淋巴結轉移不相關。Wang等[8]發現，胃癌中CCAT2高表達與淋巴結轉移、遠處轉移和不良預后密切相關。Redis等[9]發現，CCAT2高表達可降低乳腺癌患者對5-FU的化療敏感性，且CCAT2高表達與乳腺癌患者的淋巴結轉移呈負相關，CCAT2表達越高，淋巴結轉移越少。

研究發現，CCAT2在乳腺癌中高表達，可促進乳腺癌細胞的生長和轉移[10]。胃癌中CCAT2高表達可促進胃癌細胞的增殖和侵襲，并與患者不良預后密切相關[11]。在膠質瘤中降低CCAT2表達可抑制膠質瘤細胞的增殖、侵襲和EMT表型[12]。

LncRNA可通過豐富的機制參與調控腫瘤的形成、增殖和侵襲轉移等。如與YB-1蛋白相互作用，促進HCC發生[2]。通過與LSD1和EZH2蛋白相互作用沉默p21和E鈣黏蛋白，促進胃癌的增殖和轉移[3]。本研究尚未探討CCAT2在HCC中作用的具體機制。但有研究發現，CCAT2可以多種方式在腫瘤中發揮作用。如CCAT2高表達可通過增強WNT信號通路促進腫瘤細胞的增殖和轉移能力[13]。結腸癌細胞中，CCAT2還可與TCF7L2相互作用，調節miR-17-5p、miR-20a 和MYC的表達[14]。到目前為止，HCC癌細胞中CCAT2促進腫瘤進展的具體作用機制尚不清楚，需后續進行更多的深入研究。

綜上所述，HCC癌組織中LncRNA CCAT2呈高表達，且與TNM分期、肝內播散、血管侵襲相關；檢測LncRNA CCAT2在癌組織中的表達有助于病情判斷。

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2017-06-12)