口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中Twist、E-cadherin蛋白的表達(dá)變化及意義

王陳飛，馮桂娟，王繼華，馮興梅

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南通 226001)

口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中Twist、E-cadherin蛋白的表達(dá)變化及意義

王陳飛，馮桂娟，王繼華，馮興梅

(南通大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇南通 226001)

目的觀察口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)組織中轉(zhuǎn)錄因子Twist及上皮細(xì)胞鈣黏蛋白(E-cadherin)的表達(dá)變化，并探討其意義。方法采用免疫組化SP法檢測(cè)65例OSCC組織、45例正常口腔黏膜組織中Twist和E-cadherin蛋白表達(dá)，分析Twist、E-cadherin表達(dá)與OSCC患者臨床病理特征的關(guān)系，并采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法分析OSCC組織中Twist和E-cadherin表達(dá)的關(guān)系。結(jié)果Twist在OSCC組織和正常口腔黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.31%(47/65)、11.11%(5/45)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)；E-cadherin在OSCC組織和正常口腔黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為23.08%(15/65)、86.67%(39/45)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。OSCC組織中，Twist和E-cadherin異常表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤臨床分期有關(guān)(P均lt;0.05)，與患者性別、年齡、組織分化程度、生長(zhǎng)類型無(wú)關(guān)(P均gt;0.05)。OSCC組織中，Twist和E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.412,Plt;0.05)。結(jié)論OSCC癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Twist表達(dá)上調(diào)，E-cadherin表達(dá)下調(diào)；二者在OSCC發(fā)生和惡性進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。

口腔鱗狀細(xì)胞癌；轉(zhuǎn)錄因子Twist；上皮細(xì)胞鈣黏蛋白

口腔鱗狀細(xì)胞癌(OSCC)，惡性程度高，患者5年總生存率低于50%，預(yù)后較差，發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要致死原因，其中頸部淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致OSCC患者不良預(yù)后甚至死亡的重要原因。近年來(lái)研究證實(shí)，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)過(guò)程與OSCC的腫瘤發(fā)生及惡性進(jìn)展密切相關(guān)[2]。EMT是上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變的復(fù)雜過(guò)程，E-cadherin在維持上皮細(xì)胞的完整性中發(fā)揮重要作用，E-cadherin表達(dá)丟失是誘發(fā)EMT的關(guān)鍵事件。E-cadherin與腫瘤侵襲遷移密切相關(guān)，其轉(zhuǎn)錄翻譯受多種轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，如ZEB-1、ZEB-2、Snail、SIP-1和Twist等[3]。Twist在多種上皮源性腫瘤中過(guò)表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞凋亡和化療耐藥中發(fā)揮功能，此外，Twist能結(jié)合至E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)的E-box元件，抑制啟動(dòng)子活性，導(dǎo)致E-cadherin轉(zhuǎn)錄表達(dá)下降，進(jìn)而誘導(dǎo)EMT，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力[4]。目前關(guān)于Twist和E-cadherin在OSCC中的研究報(bào)道較少。2013年1月～2015年12月，我們采用免疫組化SP法檢測(cè)Twist和E-cadherin蛋白在OSCC組織中的表達(dá)，探討其與OSCC發(fā)生及惡性進(jìn)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集本院2013年1月～2015年12月穿刺或切除經(jīng)病理證實(shí)為OSCC的組織標(biāo)本65例份，患者男34例、女31例，年齡gt;55歲42例，≤55歲23例。組織分化程度：低分化19例，中高分化46例；生長(zhǎng)類型：外生型32例，浸潤(rùn)型33例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移43例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移22例；臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期25例，Ⅲ+Ⅳ期40例。另收集同期性別、年齡與之匹配的45例正常口腔黏膜組織作為對(duì)照，男23例、女22例，年齡20～60歲。本研究經(jīng)患者知情同意并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 Twist和E-cadherin蛋白表達(dá)檢測(cè) 所有組織樣本經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，5 μm厚切片；二甲苯脫蠟，100%、95%、85%乙醇浸泡水化，98 ℃的枸櫞酸鈉溶液(0.01 mol/L，pH 6.0)中浸泡15 min進(jìn)行抗原修復(fù)，滴加正常山羊血清室溫封閉15 min，棄血清，分別滴加Twist和E-cadherin一抗工作液，37 ℃孵育2 h，PBS洗滌3次，每次5 min，滴加生物素二抗，室溫孵育30 min，PBS洗滌3次，每次5 min，DAB顯色，充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。以PBS替代一抗作陰性對(duì)照。每例標(biāo)本均選擇10個(gè)含有陽(yáng)性細(xì)胞的高倍視野(×400)分別計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，取其平均值計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分率。按陽(yáng)性細(xì)胞百分率判定：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞為0分；≤25%為1分；26%～50%為2分；gt;50%為3分。按染色程度判定：無(wú)陽(yáng)性著色為0分；淺黃色為1分；深黃色為2分；棕黃色為3分。染色指數(shù)為陽(yáng)性細(xì)胞百分率與染色強(qiáng)度之和：最小值0分，最大值6分。gt;3分為陽(yáng)性；≤3分為陰性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件。各組間樣本率的比較采用χ2檢驗(yàn)，兩資料之間的相關(guān)性采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。Plt;0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Twist和E-cadherin在癌及正常黏膜組織中的表達(dá)比較 Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，Twist在OSCC組織和正常口腔黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.31%(47/65)、11.11%(5/45)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜，E-cadherin在OSCC組織和正常口腔黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為23.08%(15/65)、86.67%(39/45)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Plt;0.05)。

2.2 Twist和E-cadherin表達(dá)與OSCC患者臨床病理特征的關(guān)系 OSCC組織中Twist表達(dá)與患者性別、年齡、組織分化程度、生長(zhǎng)類型無(wú)關(guān)(P均gt;0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(Plt;0.05)，見(jiàn)表1。E-cadherin表達(dá)與OSCC患者性別、年齡、組織分化程度、生長(zhǎng)類型無(wú)關(guān)(P均gt;0.05)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(P均lt;0.05)，見(jiàn)表1。

2.3 OSCC組織中Twist和E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性 相關(guān)性分析結(jié)果顯示，OSCC組織中Twist與E-cadherin蛋白表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.412,Plt;0.05)。

3 討論

OSCC占口腔惡性腫瘤的90%以上，易發(fā)生局部淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處臟器轉(zhuǎn)移[5]。發(fā)病率逐年升高，且呈年輕化趨勢(shì)[6]。研究證實(shí)，EMT在腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中起重要作用[7]。EMT的發(fā)生導(dǎo)致上皮細(xì)胞間極性被破壞，細(xì)胞形態(tài)改變，呈現(xiàn)出間質(zhì)細(xì)胞特性[8]。E-cadherin是一種鈣依賴性跨膜蛋白，參與維持細(xì)胞的完整性和極性，其表達(dá)丟失后導(dǎo)致細(xì)胞間的黏附力降低，侵襲能力增強(qiáng)[9]。腫瘤細(xì)胞侵襲性的增強(qiáng)是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的重要條件，在EMT發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起關(guān)鍵作用，E-cadherin表達(dá)丟失是EMT過(guò)程中最重要的特征性變化[10]。

本研究結(jié)果顯示，E-cadherin蛋白在OSCC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常口腔黏膜組織，提示在OSCC組織中E-cadherin表達(dá)被抑制，Zhou等[11]研究證實(shí)，在OSCC組織中E-cadherin表達(dá)下降。此外，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，E-cadherin在臨床分期較高OSCC患者癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較低，提示臨床分期高者的細(xì)胞侵襲能力較強(qiáng)，可能更易發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移OSCC患者癌組織中E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示E-cadherin表達(dá)缺失的OSCC患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幾率更高。

表1 Twist和E-cadherin表達(dá)與OSCC患者臨床病理特征的關(guān)系

Twist蛋白是一種高度保守的轉(zhuǎn)錄因子，在胚胎發(fā)育、組織器官形成及分化過(guò)程中均占重要地位。Twist具有原癌基因功能，在多種腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)，Twist通過(guò)識(shí)別E-cadherin啟動(dòng)子區(qū)的E-box基因序列，抑制E-cadherin基因轉(zhuǎn)錄翻譯，進(jìn)而誘導(dǎo)EMT的發(fā)生[12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Twist在OSCC組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常口腔黏膜組織，在臨床分期較高(Ⅲ+Ⅳ期)OSCC患者癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較高，而且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示Twist在OSCC病情進(jìn)展中發(fā)揮作用。

Twist負(fù)性調(diào)控E-cadherin基因表達(dá)，E-cadherin表達(dá)缺失又可誘導(dǎo)Twist基因表達(dá)，維持細(xì)胞呈現(xiàn)間質(zhì)細(xì)胞特性。本研究發(fā)現(xiàn)，OSCC組織中Twist與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與Wang 等[13]研究結(jié)果一致。

綜上所述，OSCC癌組織中轉(zhuǎn)錄因子Twist表達(dá)上調(diào)，E-cadherin表達(dá)下調(diào)；二者在OSCC發(fā)生和惡性進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。

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ExpressionchangesofTwistandE-cadherininoralsquamouscellcarcinoma

WANGChenfei,FENGGuijuan,WANGJihua,FENGXingmei

(TheAffiliatedHospitalofNantongUniversity,Nantong226001,China)

ObjectiveTo explore the expression changes of the transcription factor Twist and the E-cadherin in the oral squamous cell carcinoma (OSCC) tissues and to investigate the clinical significance.MethodsThe immunohistochemical SP method was used to detect the expression levels of the Twist and E-cadherin in 65 cases of OSCC tissues and 45 cases of oral normal mucosa tissues. In addition, the relationship between the expression of Twist/E-cadherin and the clinicpathologic characteristics was analyzed, and the Spearman was used to explore the correlation between the Twist and E-cadherin in OSCC tissues.ResultsThe positive expression rates of Twist in the OSCC tissues and oral normal mucosa tissues were 72.31% (47/65) and 11.11% (5/45), respectively (Plt;0.05). The positive expression rates of E-cadherin in the OSCC tissues and oral normal mucosa tissues were 23.08% (19/65) and 86.67% (39/45), respectively (Plt;0.05). The Twist and E-cadherin expression levels in the OSCC tissues were related with the lymph node metastasis and the clinical stages (bothPlt;0.05), but were not related with the gender, age, differentiation degree and the type (allPgt;0.05). The expression of Twist and E-cadherin was negatively correlated in the OSCC tissues (r=-0.412,Plt;0.05).ConclusionsThe transcription factor Twist is up-regulated and E-cadherin is down-regulated, both of them play a critical role in the occurrence and malignant progression of OSCC.

oral squamous cell carcinoma; transcription factor Twist; E-cadherin

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.41.008

R739.8

A

1002-266X(2017)41-0028-03

江蘇省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)資助科研項(xiàng)目(H201678)。

王陳飛(1983-)，男，碩士研究生，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)榭谇荒[瘤。E-mail:gblw729@163.com

馮興梅(1963-)，女，碩士研究生，主治醫(yī)師，主要研究方向?yàn)榭谇唤M織病理學(xué)。E-mail:1541985641@qq.com

2017-06-27)