通絡玉液湯對2型糖尿病心肌病大鼠心肌形態結構和氧化指標的影響

李淑貞 楊曉暉 崔茂香 張蘭蘭

(滄州醫學高等專科學校，河北 滄州 061001)

通絡玉液湯對2型糖尿病心肌病大鼠心肌形態結構和氧化指標的影響

李淑貞 楊曉暉 崔茂香 張蘭蘭

(滄州醫學高等專科學校，河北 滄州 061001)

目的探討通絡玉液湯對糖尿病心肌病(DCM)大鼠心肌形態結構和氧化指標的影響。方法采用高糖高脂飲食+小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射的方法復制DCM模型。將36只大鼠隨機分為3組：正常對照組、DCM組、通絡玉液湯組。分別處理8 w后，測定大鼠空腹血糖(FBG)、血清丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性，左室重量指數(LVMI)和心臟重量指數(HWI)，光鏡及透射電鏡觀察心肌細胞形態結構。結果與正常對照組比較，DCM組FBG、MDA水平明顯升高，SOD活性明顯下降，LVMI和HWI明顯增大(均Plt;0.01)，心肌細胞肌原纖維排列紊亂、斷裂、溶解，線粒體腫脹變性，嵴、膜斷裂、缺失。與DCM組比較，通絡玉液湯組FBG、MDA水平明顯下降，SOD活性明顯上升,LVMI和HWI明顯下降(均Plt;0.01)，病理改變明顯減輕。結論通絡玉液湯可降低血糖，對抗脂質過氧化反應、改善DCM心肌損傷。

通絡玉液湯；2型糖尿病；心肌病；氧化指標

糖尿病心肌病(DCM)作為一種特異的糖尿病心血管并發癥，是一種獨立于冠心病、高血壓、先心病和其他種類心臟病之外的特異性心臟病變，是導致糖尿病患者心力衰竭的重要原因〔1，2〕。本研究探討通絡玉液湯對DCM的治療作用及可能機制。

1 材料與方法

1.1材料 通絡玉液湯(生曬參、生黃芪、生山藥、麥冬、知母、花粉、葛根、五味子、雞內金等)中藥飲片均購自滄州同仁堂藥店。浸泡、煎煮、濃縮成2.5 g生藥/ml的液體；鏈脲佐菌素(STZ)，購自美國 Sigma 公司；空腹血糖(FBG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒均購自南京建成生物制品研究所。

1.2模型建立與藥物干預 SPF級健康雄性SD大鼠〔中國人民解放軍軍事醫學科學院衛生學環境醫學研究所動物實驗中心提供，合格證號：SCXK-(軍)2009-003〕36 只，體重150～180 g。適應性喂養1 w后，參考董世芬等〔3〕方法，并根據預實驗結果，分為正常對照組和DCM組。DCM組先用高脂高糖飼料(20%蔗糖、10%豬油、2.5%膽固醇和67.5%基礎飼料)喂養4 w，然后一次性腹腔注射 1% STZ 30 mg/kg，72 h后測大鼠FBG，大于11.1 mmol/L認為是2型糖尿病模型成功大鼠，持續高脂高糖飼料喂養6 w，即成DCM模型。正常對照組大鼠一直采用基礎飼料喂養，等量檸檬酸鈉緩沖液(pH4.4)代替STZ腹腔注射，不采血。選擇成模大鼠24只，隨機分為DCM組和通絡玉液湯組。通絡液湯組灌服通絡玉液湯煎劑25 g·kg-1·d-1；正常對照組和DCM組每日灌服相應劑量的生理鹽水，連續灌服8 w。

1.3血生化指標測定 實驗結束后各組動物禁食12 h由頸總動脈取血2 ml，制備血清-20℃保存以備檢測各生化指標。葡萄糖氧化酶法測定FBG，全自動生化分析儀測定MDA、SOD。

1.4左室重量指數(LVMI)和心臟重量指數(HWI)的測定 LVMI=左心室重量(mg)/體重(g)，HWI=心臟重量(mg)/體重(g)。大鼠開胸快速取出心臟，剪去血管和心臟周圍結締組織，4℃預冷生理鹽水沖洗后冰上分解心臟，用電子秤稱量心臟和左心室(含室間隔部分)重量。

1.5心肌組織形態學檢查 大鼠處死后迅速切取心尖部的組織，制成1 mm3小塊，4%戊二醛前固定，1%鋨酸后固定，用Leica超薄切片機切片，經醋酸鈾、檸檬酸鉛雙重電子染色，日立H-7500型透射電鏡觀察心肌超微結構的變化；另取一部分左心室心肌組織以4%多聚甲醛固定，石蠟切片，常規HE染色，光鏡下觀察心肌組織的病理變化。

1.6統計學方法 采用SPSS16.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1各組一般情況 正常對照組精神狀態佳，毛色光亮，體重增加，對外界刺激反應迅速；DCM組精神萎靡，毛色枯燥、暗淡，體型明顯消瘦，活動量少，對外界刺激反應差遲鈍或無反應；通絡玉液湯組精神狀態尚可，毛色稍暗，體型一般或中等，對外界刺激反應較迅速。

2.2各組FBG、SOD活性、MDA含量比較 與正常對照組比較，DCM組FBG、MDA含量明顯升高(Plt;0.01)，SOD活性明顯下降(Plt;0.01)；經用藥干預后，通絡玉液湯組FBG、MDA含量明顯降低，SOD含量明顯升高(Plt;0.01)。見表1。

2.3各組LVMI 及 HWI比較 與正常對照組比較，DCM組LVMI及HWI明顯升高(Plt;0.01)；經用藥干預后，通絡玉液湯組LVMI及HWI明顯降低(Plt;0.01)。見表2。

表1 各組FBG、SOD活性、MDA含量比較

與正常對照組比較：1)Plt;0.01；與DCM組比較：2)Plt;0.01，下表同

表2 各組大鼠LVMI 及 HWI的比較

2.4各組心肌細胞形態結構比較 光鏡下觀察：正常對照組心肌纖維排列整齊，結構清晰，形態正常，細胞外間質較少，可見少量成纖維細胞；DCM組心肌纖維排列紊亂、斷裂，心肌細胞腫脹、變性，局灶性壞死，細胞間隙增大，可見成纖維細胞增生，并有炎細胞浸潤；通絡玉液湯組心肌細胞邊界清楚，結構基本正常，纖維紊亂和細胞腫脹明顯減輕。見圖1。電鏡下觀察正常對照組肌原纖維無水腫，排列整齊，肌小節結構正常，線粒體無腫脹，嵴突發達、致密，心肌內單毛細血管內皮形態結構正常；DCM組：肌原纖維腫脹，肌膜下大面積灶性變性壞死，肌小節破壞，肌原纖維明顯溶解、斷裂，線粒體腫脹，大部分嵴和少部分膜融合、模糊不清，部分嵴和膜有斷裂和缺失現象，單細胞毛細血管內皮腫脹，心肌間質水腫，可見膠原纖維增生；通絡玉液湯組：大多數肌原纖維排列整齊，少數肌原纖維水腫、空泡變性，肌小節結構尚正常，線粒體輕度腫脹、小部分嵴融合模糊不清，心肌間質輕度水腫，未見膠原纖維增生。見圖2。

圖1 各組心肌組織光鏡觀察(HE，×400)

圖2 各組心肌組織電鏡觀察

3 討 論

研究表明高血糖、胰島素抵抗、高胰島素血癥、脂肪酸代謝異常、心肌細胞凋亡、心臟自主神經病變和局部腎素-血管緊張素-醛固酮系統過度激活等因素參與了DCM的發生發展〔4〕。而糖尿病時高血糖誘導的氧化應激是糖尿病心血管并發癥發病機制中的主要危險因素〔5,6〕。DCM首先表現為單純性的心肌細胞結構改變或者伴隨左心室擴大、肥厚及重量增加，舒張功能障礙；進一步發展出現心肌細胞肥大、凋亡、壞死和纖維化，逐漸加重，出現心臟收縮舒張及射血功能明顯下降，導致心肌缺血及心力衰竭。本實驗說明DCM與氧化應激有關，與文獻報道相符〔7〕。通絡玉液湯是在玉液湯、生脈散原方基礎上加減化裁而成，具有益氣養陰、活血通絡之效。本實驗說明通絡玉液湯可通過清除氧自由基、對抗脂質過氧化反應來減輕DCM心肌損傷。

1Roger VL,Go AS,Lloyd-Jones DM,etal.Heart disease and stroke statistics-2011 update:a report from the American Heart Association〔J〕.Circulation,2011;123(4):e18-e209.

2張偉偉,王 東,周力學,等.OLETF糖尿病大鼠心肌光鏡與透射電鏡病理改變的觀察〔J〕.復旦學報(醫學版),2008;35(1):11-3.

3董世芬,洪 纓,樊江波,等.實驗性2型糖尿病心肌病大鼠模型的建立與評價〔J〕.中國實驗動物學報,2009;17(4):245-51.

4Acar E,Ural D,Bildirici U,etal.Diabetic cardiomyopathy〔J〕.Anadolu Kardiyol Derg,2011;11(8):732-7.

5Huynh K,Bernardo BC,McMullen JR,etal.Diabetic cardiomyopathy:mechanisms and new treatment strategies targeting antioxidant signaling pathways〔J〕.Pharmacol Ther,2014;142(3):375-415.

6Joshi M,Kotha SR,Malireddy S,etal.Conundrum of pathogenesis of diabetic cardiomyopathy:role of vascular endothelial dysfunction,reactive oxygen species,and mitochondria〔J〕.Mol Cell Biochem,2014;386(1-2):233-49.

7董洪亮.白藜蘆醇對2型糖尿病大鼠心肌病變的保護作用〔J〕.現代中西醫結合雜志,2013;22(14):1498-501.

〔2016-11-06修回〕

(編輯 曹夢園)

R285.5

A

1005-9202(2017)22-5566-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.035

李淑貞(1971-)，女，碩士，副教授，主要從事中醫藥防治糖尿病心肌病的研究。