參附注射液防治大鼠心搏驟停心肺復蘇后心功能不全的機制

李立為 王智超 劉明蓉 朱夢莉

(武漢市第一醫院急診科，湖北 武漢 430022)

參附注射液防治大鼠心搏驟停心肺復蘇后心功能不全的機制

李立為 王智超 劉明蓉 朱夢莉

(武漢市第一醫院急診科，湖北 武漢 430022)

目的探討參附注射液在防治大鼠心搏驟停心肺復蘇(CA-CRP)后心功能不全中的機制。方法體外建立大鼠CA-CPR模型，靜脈給予參附注射液；心率、平均動脈壓(MAP)、中心靜脈壓(CVP)用于觀察心功能變化；病理切片用于觀察大鼠心臟形態學變化；酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測血清中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、黃嘌呤氧化酶(XOD)等心肌脂質過氧化相關指標變化。結果大鼠心功能及組織學變化顯示，參附注射液可改善大鼠CPR后心功能情況。同時外周血檢測發現參附注射液可明顯降低MDA、XOD的表達，上調SOD的表達。結論參附注射液治療CA-CPR的機制與清除氧自由基有關。

參附注射液；心肺復蘇；心功能

臨床研究表明心搏驟(CA)停-心肺復蘇(CPR)后心功能不全導致循環衰竭的死亡率占總死亡的1/3以上。參附注射液是紅參、黑附片的提取物，具有強心、改善微循環、擴血管等作用〔1〕。有研究報道休克患者注射參附注射液可以顯著增強心縮力，降低外周阻力，增加心輸出量，減少缺血再灌注損傷引起的心肌細胞凋亡〔2～5〕。參附注射液對CA-CPR后心功能不全的改善效果明顯，不良反應少，但是具體的作用機制尚不完全清楚。本文旨在探討參附注射液對大鼠CPR后早期心肌能量代謝及心肌損傷修復的影響。

1 材料與方法

1.1實驗材料 動物：60只健康SPF級雄性Wistar大鼠，6～8周齡，體質量220～240 g，購于北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號為 scxk湖2009 0002。藥品與試劑：總超氧化物歧化酶(T-SOD)測試試劑盒、丙二醛(MDA)測定試劑盒，購于南京建成生物工程研究所；氯化鉀，購于中國大冢制藥有限公司(批號：5F96K2)；參附注射液，購于華潤三九(雅安)藥業有限公司(批號：15110601001)；鹽酸腎上腺素注射液，購于遠大醫藥(中國)有限公司(批號：151216)。

1.2方法

1.2.1大鼠CA-CPR模型的制備 窒息合并冰氯化鉀停跳液致大鼠CA-CPR模型的制備及心搏驟停標準參考謝偉峰等〔6〕研究方法。

1.2.2分組與給藥 60只SPF級Wistar大鼠隨機分為3組，每組20只。假手術組：直接手術猝死。生理鹽水組：手術猝死后行CPR(劑量等同參附注射液同體積)。參附注射液組：手術猝死后行CRP，同時給予參附注射液尾靜脈滴注，劑量20 ml/kg，滴注速度20 ml/h。

1.2.3取材方法 術后8 h，尾靜脈抽取大鼠靜脈血500 μl，置于含乙二胺四乙酸(EDTA)的抗凝管中。

1.3指標檢測 (1)心功能指標：動物多導聯生理記錄儀記錄心率、平均動脈壓(MAP)、中心靜脈壓(CVP)；(2)形態學檢測：兩組動物均于復蘇后1 h再次麻醉后處死，迅速解剖游離心臟。普通病理取材:蘇木素-伊紅(HE)染色，4%多聚甲醛、常溫固定標本；(3)脂質過氧化相關指標檢測：酶聯免疫吸附(ELISA)法檢測血清中MDA、SOD、黃嘌呤氧化酶(XOD)。

1.4ELISA實驗 用包被緩沖液將已知抗原(MDA、SOD、XOD)稀釋至10 μg/ml，4℃過夜。次日加血清0.1 ml于上述反應孔中，37℃孵育1 h，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1 ml，37℃孵育30 min，加入四甲基聯苯胺(TMB)底物溶液0.1 ml，37℃ 10 min，加入2 mol/L硫酸0.05 ml，在ELISA檢測儀上，于450 nm處，測OD值以判斷。同時按以上方法測蛋白標準品OD值，并繪制蛋白濃度標準曲線；前列環素(PG)L2、內皮素(ET)-1、血管緊張素Ⅱ、血管性血友病因子(vWF)濃度以測量OD值在標準曲線上換算。

1.5統計學方法 應用SPSS17.0軟件進行方差分析。

2 結 果

2.1參附注射液對大鼠心功能的影響 假手術組均無心率、中心靜脈壓，平均動脈壓(15±7)mmHg。相比于生理鹽水組〔心率(456±23)次/min，平均動脈壓(136±18)mmHg，中心靜脈壓3 cmH2O〕，注射參附注射液后，CPR后大鼠心率〔(339±12)min/次〕、平均動脈壓〔(167±8)mmHg〕、中心靜脈壓(6 cmH2O)顯著改善(Plt;0.05)。見表1。

2.2參附注射液對大鼠心肌脂質過氧化相關指標的影響 參附注射液可明顯降低MDA、XOD的表達，但相反上調SOD的表達(Plt;0.05)。見表1。

2.3參附注射液對大鼠心臟形態學的影響 生理鹽水組大鼠心肺復蘇后，可見心肌大量破壞，心肌間質中充填大量炎性細胞；而在注射參附注射液后，大鼠心肌組織逐漸恢復正常輪廓、炎細胞逐漸減少。見圖1。

表1 三組大鼠外周血心肌脂質過氧化相關指標表達的比較

圖1 參附注射液對大鼠心臟形態學的影響(×400)

3 討 論

缺血再灌注損傷是造成心臟驟停后心功能不全的主要因素，CPR后，心肌細胞可產生大量氧自由基。CPR進而損傷心肌細胞〔6〕，這是CPR后患者死亡的主要原因〔1〕。XOD是一種黃素酶，主要催化核苷酸的分解代謝及超氧陰離子的生成〔7〕。缺氧條件下，心臟能量代謝急劇降低，黃嘌呤脫氫酶(XDH)在白細胞釋放的蛋白酶作用下大量不可逆地轉變成XOD〔5〕。MDA 是反映氧自由基產生及引起脂質過氧化反應的標志性指標〔8〕，可促進心肌細胞內蛋白質與核酸脂質發生交聯，進而引起心肌細胞基因突變〔9〕。SOD是生物體內重要的抗氧化酶，可通過歧化反應清除體內有害的氧自由基，從而保護細胞。本實驗結果表明，參附注射結果與辛毅等〔5〕研究結果一致。表明參附注射液在防治大鼠CA-CPR后心功能不全發揮積極作用，以期為臨床應用參附注射液提高CPR成功率提供有效方法和實驗依據。

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7Higashi Y,Maruhashi T,Noma K,etal.Oxidative stress and endothelial dysfunction:clinical evidence and therapeutic implications〔J〕.Trends Cardiovasc Med,2014;24(4):165-9.

8歐 好,楊明施,孫 蓓,等.腎上腺素聯合血管加壓素在窒息家兔心肺復蘇中的應用〔J〕.醫學臨床研究,2006;23(7):1032-5.

9雷豐豐,岳淑琴,孫禮剛,等.紅芪總多糖對衰老大鼠體內自由基清除及抗氧化能力的調節作用〔J〕.山東醫藥,2015；55(1):11-3.

〔2017-04-15修回〕

(編輯 袁左鳴)

R54

A

1005-9202(2017)22-5558-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.22.031

武漢市衛計委資助課題(No.WX16E26)

王智超(1968-)，男，主任醫師，主要從事急診研究。

李立為(1979-)，男，碩士，主治醫師，主要從事急診研究。