南陽地區RhD陰性獻血者Rh抗原表型分布與不規則抗體檢測分析

沈延平 靖春旭

(南陽市中心血站 檢驗科 河南 南陽 473000)

南陽地區RhD陰性獻血者Rh抗原表型分布與不規則抗體檢測分析

沈延平 靖春旭

(南陽市中心血站 檢驗科 河南 南陽 473000)

目的調查分析南陽地區RhD陰性獻血者Rh抗原表型分布特點及不規則抗體檢測情況，為臨床輸血安全提供依據。方法采用單克隆IgM試劑鑒定RhD陰性獻血者C、c、E和e抗原表型，并用鹽水介質試管法、凝聚胺法、IAT/抗人球蛋白微柱凝膠卡法篩查和鑒定不規則抗體。結果在512例RhD陰性獻血者中，各表型分別為：ccdee 318例(62.11%)、Ccdee 135例(26.37%)、ccdEe 30例(5.86%)、CCdee 17例(3.32%)、CcdEe 12例(2.34%)，其他表型均未檢出；檢出弱D/不完全D共19例，各表型分別為Ccee 9例，ccEe 3例，CCee 3例，CcEe 3例，ccEE 1例；512例RhD陰性獻血者中，檢出不規則抗體23例(4.49%)，分別為抗E 14例，自身抗體3例，冷凝集素2例，抗M 2例，抗C和抗補體C3d 各1例，女性獻血者不規則抗體陽性率高于男性，差異有統計學意義(P<0.05)。結論本地RhD陰性獻血者Rh表型以ccdee和Ccdee為主，其次為CCdee、CcdEe和ccdEe表型，其他血清學表型罕見，Rh陰性獻血者抗原表型和不規則抗體篩查，可減少和避免因輸血而致免疫性抗體產生，確保輸血安全。

獻血者；Rh陰性；血清學表型；不規則抗體

Rh血型系統是目前輸血醫學中已確認的除ABO血型系統以外最具免疫原性和多態性的血型系統，其所占比例為0.2%～0.5%，可引起新生兒溶血病、溶血性輸血反應及自身免疫性溶血性貧血等。尤其是Rh血型抗原與相應抗體結合后對紅細胞的破壞無需補體的參與，因此由Rh抗體引起的新生兒溶血病往往較依賴補體的ABO系統嚴重；其次是Rh抗原與抗體的結合可以引起血管內和血管外溶血；另外，Rh血型系統存在低效價高免疫活性的抗E/e或抗C/c，此類抗原在輸血前往往不易檢測到，但輸血后迅速達高峰，盡管輸血前交叉配血相容，仍存在相當大的風險和隱患，因而日益引起人們的重視[1]。為提高臨床輸血安全，本研究近年來對本地區RhD陰性獻血者的Rh表型和不規則抗體進行了調查、分析，現將結果報道如下。

1 材料與方法

1.1臨床資料選取南陽市中心血站2014年10月至2016年9月512例RhD陰性獻血者的血液標本為本文研究對象，其中男217例，女295例，年齡為18～55歲，中位年齡為39歲。

1.2儀器與試劑單克隆抗-D(IgG)、抗-D(IgM)、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e為上海血液生物醫藥有限責任公司產品；抗-D(IgG+IgM)為英國Millipore公司提供；單克隆抗人球蛋白(抗IgG，C3d)抗體由法國DIAGAST公司提供；凝聚胺介質試劑由珠海貝索生物技術有限公司提供；人源抗-D由本實驗室留存AB型抗-D血清；Baso 2002-2型微電腦控制血庫專用離心機為臺灣貝索企業有限公司產品。

1.3Rh陰性篩選及確認試驗RhD陰性獻血者的初篩應用單克隆抗-D(IgM)試劑鹽水介質微量板法。RhD陰性獻血者的確認應用間接抗人球蛋白試驗(IAT)。初篩和確認均陰性者判為Rh陰性，初篩陰性確認試驗陽性者不再細分，籠統歸類為弱D/不完全D。

1.4Rh血清學表型鑒定用單克隆IgM抗-D、抗-C、抗-c、抗-E、抗-e試劑，鹽水試管法。

1.5不規則抗體篩查與鑒定按抗體篩選紅細胞試劑盒說明書要求分別采用鹽水介質試管法、凝聚胺法、IAT/抗人球蛋白微柱凝膠卡法。抗體鑒定方法同抗體篩查。

1.6統計學方法將本文數據導入SPSS 13.0軟件包進行數據處理，不規則抗體陽性率比較用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1RhD陰性獻血者ABO血型分布情況在512例RhD陰性獻血者中，A型143例(27.93%)，B型163例(31.83%)，O型133例(25.98%)，AB型73例(14.26%)。見表1。

2.2弱D/不完全D獻血者Rh表型分布情況本文共檢出弱D/不完全D 19例，其中Ccee 9例，ccEe 3例，CCee 3例，CcEe 3例，ccEE 1例。見表2。

表1 RhD陰性獻血者ABO血型分布情況[n(%)]

表2 24例弱D/不完全D獻血者抗原表型分布[n(%)]

2.3不同地區RhD陰性獻血者表型分布南陽地區RhD陰性獻血者與其他地區RhD陰性表型分布情況比較。見表3。

表3 不同地區RhD陰性獻血者表型分布情況(n)

2.4不規則抗體檢出情況512例RhD陰性獻血者中，共檢出不規則抗體23例(4.49%)，分別為抗E 14例，自身抗體3例，冷凝集素2例，抗M 2例，抗C和抗補體C3d 各1例；女性獻血者不規則抗體陽性率高于男性，差異有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同性別獻血者不規則抗體檢出情況[n(%)]

3 討論

Rh血型系統經國際輸血協會確認的已有54個抗原，其中以D、C、c、E和e最重要，目前國內用抗-D、抗-C、抗-c、抗-E和抗-e 5種單克隆試劑可分出18種表型[2]。本研究對512例Rh陰性獻血者表型檢測，結果顯示，ccdee 表型所占比例最高，為318例(62.11%)，其次是Ccdee型135例(26.37%)，ccdEe、CCdee和CcdEe表型相對較少，分別占5.86%、3.32%和2.34%，其他表型本文均未檢出；ccdee和Ccdee兩種表型共計512例，為Rh陰性患者的88.48%，與研究報道的湛江地區的87.72%，佛山地區的95.35%，湖北地區的89.71%結果[3-5]相近。

本研究512例RhD陰性獻血者中檢出19例弱D/不完全D。D抗原在不同表型RBC上表達的強度依次為：超強D>正常D陽性>弱D/不完全D>DEL型。D抗原強度與CE單倍型表現為：DcE/DcE>DCe/DcE>DCe/DCe>DcE/Dce>DCe/cde，劑量效應常表現為：DCe/DCe(R1R1)>DCe/dce(R1r)[6]。因此，在日常工作中抗-D效價測定多用純合子。弱D曾稱為Du，紅細胞上D抗原表達明顯減少至正常D的5%～10%，但真正的弱D表型頻率很難估算、證實，受所用的抗-D試劑與方法影響較大。在輸血實踐中應防止不完全D誤定為Rh陽性，不完全D型患者經輸注D陽性紅細胞后可產生抗-D抗體，因此患者為不完全D型應作為Rh陰性，而供血者不完全D型應作為Rh陽性[7]。弱D獻血者或患者被誤定為RhD陰性，臨床意義不大，因為：①弱D輸給RhD陰性，免疫原性很差；②弱D接受RhD陰性血液，無不良反應；③弱D圍產期婦女誤定為RhD陰性，給予IVIgG抗-D，無不良反應[8]。近年來發現弱D引起輸血免疫的比例并不如想象中的低，故涉及此類輸血仍需謹慎。

本研究對RhD陰性獻血者進行了不規則抗體篩查，共檢出不規則抗體23例(4.49%)，分別為抗E 14例，自身抗體3例，冷凝集素2例，抗M 2例，抗C和抗補體C3d 各1例；女性獻血者不規則抗體陽性率高于男性，可能與女性獻血者受妊娠、輸血兩種因素刺激作用有關。Rh系統存在有天然抗體和免疫性抗體，天然抗體抗-E在Rh陽性中的比例約為0.1%，通常僅能通過酶處理細胞檢測到，抗-D偶然可見，抗-C、抗-Cw、抗-Cx、抗-Rh30和抗-Rh32非常罕見；免疫性抗體中抗-D大多數為IgG，少數含IgM，且伴隨IgG出現，偶然可見IgA，且血清中主要為IgG，一般IgG型抗-D不直接凝集正常Rh表型，可凝集D抗原超強表達的紅細胞[8]。抗-D IgG又分亞類，最常見的為IgG1、IgG3，少數IgG2、IgG4，且多伴隨IgG1出現，孕婦中常為單一亞類，輸血免疫男性患者多伴有幾種亞類[9-10]。

通過檢測Rh表型及M、N、P1等ABO系統外臨床輸血中比較重要的抗原，建立RhD陰性獻血者的表型庫，不僅可為臨床搶救危重患者提供更為安全的血液，爭取寶貴的時間，并且為某些慢性需長期反復輸血患者提供配合性更高的血液，提高了臨床治療效果和患者的生存質量[11]。同時，本研究也為輸血政策制定部門提供參考依據，目前國內發展不平衡，部分沿海地區政策和經費都比較寬松，采供血機構和臨床醫療機構都已經做了大量工作。在此也建議采供血機構盡快升級在用的《安全輸血標準化系統》，增加表型庫模塊，連接稀有血型庫；建議由國家出資，各血站承擔起所有獻血者血液抗原表型檢測及不規則抗體的篩查工作，患者的抗原表型檢測及不規則抗體的篩查工作，可由政府牽頭，結合各社區醫療服務中心為轄區居民體檢、辦理健康檔案工作合并完成，建立、充實、共享大數據。

綜上所述，對RhD陰性獻血者進行表型分析和不規則抗體檢測，并逐步建立本地區Rh陰性獻血者表型資料庫，對確保臨床輸血安全非常必要。

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[2] 趙毓宏,白登科,鄧永樂,等.臨床Rh表型血清學檢測及其同型輸注必要性分析[J].臨床檢驗雜志,2015,33(9):715-716.

[3] 龐婷婷,志蓮,龐小桃.湛江市391名RhD陰性無償獻血者的抗原表型與不規則抗體調查[J].齊齊哈爾醫學院學報,2015,36(31):4770-4771.

[4] 黃秀瓊,陳文珠.43例住院病人Rh(D)陰性血型調查[J].國際醫藥衛生導報,2012,18(9):1326-1328.

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R 446.6

10.3969/j.issn.1004-437X.2017.21.015

2017-04-03 )