外周血Th22在膿毒癥患者中的水平變化及臨床意義

劉 爽，陳 娟，金 蘭，朱 薇，周 詣

(重慶市中醫(yī)院體檢中心 400421)

論著·臨床研究

外周血Th22在膿毒癥患者中的水平變化及臨床意義

劉 爽，陳 娟，金 蘭，朱 薇，周 詣△

(重慶市中醫(yī)院體檢中心 400421)

目的探討外周血Th22在膿毒癥患者中的水平變化及其臨床意義。方法選取2014年4月至2017年4月在該院就診的膿毒癥患者180例為研究對象，根據病情嚴重程度將其分為普通膿毒癥組81例、嚴重膿毒癥組68例和膿毒癥休克組31例，另選取60例健康體檢者為對照。檢測各組外周血Th22、白細胞介素(IL)-22、IL-6及降鈣素原(PCT)水平，記錄急性生理與慢性健康狀況(APACHE Ⅱ)評分情況，采用受試者工作特征(ROC)曲線評估外周血Th22對膿毒癥早期診斷的價值。結果膿毒癥患者外周血Th22和IL-22水平明顯高于對照組(Plt;0.05)。普通膿毒癥組、嚴重膿毒癥組及膿毒癥休克組患者外周血Th22、IL-22、APACHE Ⅱ評分及PCT水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。相關性分析顯示，外周血Th22與PCT、APACHE Ⅱ評分呈正相關(r=0.80、0.66，Plt;0.01)。外周血Th22=1.9%時，其敏感性和特異性分別為83.1%和85.2%，明顯優(yōu)于PCT。結論外周血Th22及其相關細胞因子對膿毒癥患者早期診斷及病情嚴重程度的評估具有重要的臨床價值。

膿毒癥；診斷；白細胞介素-22；Th22細胞

膿毒癥是嚴重感染、創(chuàng)傷、燒傷等引發(fā)的全身炎癥反應，患者表現(xiàn)為不同程度的微循環(huán)障礙，其可導致器官組織灌注不足，嚴重者可引起感染性休克和多器官功能衰竭，甚至危及生命[1]。近年來，有相關研究報道膿毒癥患者的發(fā)病率和病死率呈現(xiàn)逐年升高趨勢，其普遍病死率高達15%～30%，尤其是同時合并器官損傷的患者，其病死率可進一步升高[2]。因此，針對膿毒癥及其病情危重程度的早期診斷與治療，對于提高患者臨床治療效果及預后至關重要。目前，臨床缺乏有效的早期診斷及評估病情變化的檢測指標，而臨床病原學檢查耗時長，常需3～5 d，易延誤病情。相關研究證實，膿毒癥的發(fā)病過程可能與自身免疫功能的紊亂密切相關，不同的CD4+T淋巴細胞參與了膿毒癥的發(fā)病過程[3]。Th22是近年來新發(fā)現(xiàn)的輔助型T淋巴細胞亞群，其特征性分泌白細胞介素(IL)-22，在多種炎癥性疾病、自身免疫性疾病、惡性腫瘤的發(fā)病中扮演著重要的角色[4]。IL-22通過與其受體特異性結合，激活下游通路如JAK-STAT信號通路，發(fā)揮促炎作用[5]。然而，有關膿毒癥患者體內Th22及IL-22的變化情況，目前尚無相關文獻報道。本研究通過檢測膿毒癥患者外周血Th22及相關細胞因子的變化，評估其在膿毒癥早期診斷及病情變化中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2014年4至2017年4月本院收治的膿毒癥患者180例作為研究對象，其中男108例，女72例，年齡24～76歲，中位年齡51.4歲，所有患者均符合膿毒癥與感染性休克國際共識指南[6]。排除標準：合并自身免疫系統(tǒng)疾病；存在嚴重慢性疾病；近期(3個月內)使用免疫抑制劑。根據入選患者病情嚴重程度分為普通膿毒癥組(81例)、嚴重膿毒癥組(68例)和膿毒癥休克組(31例)。膿毒癥引起多個(2個以上)器官功能障礙，組織灌注不足，納入嚴重膿毒癥組；膿毒癥引起組織低灌注，出現(xiàn)休克，給予足量液體復蘇仍無法糾正出現(xiàn)的休克表現(xiàn)，納入膿毒癥休克組；其余為普通膿毒癥組。另選取門診60例健康體檢者作為對照。膿毒癥組和對照組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，患者及家屬知情同意。

1.2主要儀器與試劑 RPMI 1640細胞培養(yǎng)液、佛波酯、淋巴細胞分離液、離子霉素、莫能菌素、細胞固定液及細胞破膜劑均購自美國Sigma公司；鼠抗人CD4單抗及鼠抗人IL-22單抗購自美國eBioscience公司；IL-22、降鈣素原(PCT)及IL-6 ELISA試劑盒購自武漢博士德生物技術公司；流式細胞分析儀購自美國BD公司。

1.3方法

1.3.1收集患者一般臨床資料，對常規(guī)及原發(fā)病針對性治療，病情嚴重的患者在常規(guī)治療的基礎上給予連續(xù)性血液凈化治療。入院24 h內對所有膿毒癥患者進行急性生理與慢性健康狀況(APACHE Ⅱ)評分，評估病情危重程度。

1.3.2流式細胞術檢測外周血Th22水平 分別抽取對照組、膿毒癥組患者清晨空腹靜脈血4 mL，經肝素抗凝后加入淋巴細胞分離液，提取外周單核細胞，接種于含等體積RPMI 1640培養(yǎng)基的培養(yǎng)板，加入50 μL佛波酯(1 μg/mL)、16 μL離子霉素(50 μg/mL)及16 μL莫能菌素(0.1 mg/mL)，吹打混勻，常溫孵育4～6 h。離心收集細胞，加入抗人CD4單抗5 μL，室溫避光孵育30 min，加入100 μL細胞固定液，離心，棄上清，加入破膜液和5 μL IL-22單抗，最后加入染色固定液300 μL，處理完畢后于流式細胞儀進行檢測。

1.3.3外周血IL-22、IL-6、PCT及CRP水平 取健康體檢者清晨空腹靜脈血2 mL及膿毒癥患者清晨空腹靜脈血8 mL，肝素抗凝，全血離心后收集血清，采用ELISA檢測兩組外周血IL-22水平。膿毒癥患者血清用于檢測IL-6、PCT及CRP水平，其中CRP水平采用快速免疫比濁法進行檢測。

2 結 果

2.1兩組外周血Th22及IL-22水平比較 與對照組相比，膿毒癥組患者外周血Th22及IL-22水平明顯升高(Plt;0.05)。見表1、圖1。

表1 兩組外周血Th22及IL-22水平比較

a：Plt;0.05，與對照組比較

圖1 兩組外周血Th22比較

2.2不同病情嚴重程度患者外周血Th22及相關臨床指標的比較 普通膿毒癥組、嚴重膿毒癥組及膿毒癥休克組患者外周血Th22、IL-22、APACHE Ⅱ評分及PCT水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(Plt;0.05)。與普通膿毒癥組比較，嚴重膿毒癥組和膿毒癥休克組患者外周血IL-6和CRP明顯升高(Plt;0.05)，但在嚴重膿毒癥組和膿毒癥休克組間差異無統(tǒng)計學意義(Pgt;0.05)。見表2。

表2 不同病情嚴重程度患者外周血Th22及相關臨床指標比較

a：Plt;0.05，與普通膿毒癥組比較；b：Plt;0.05，與嚴重膿毒癥組比較

2.3相關性分析 膿毒癥患者外周血Th22分別與PCT、APACHE Ⅱ評分呈正相關性(r=0.80、0.66，Plt;0.01)。見圖2。

圖2 膿毒癥患者外周血Th22與PCT、APACHE Ⅱ 評分的相關性分析

2.4外周血Th22對膿毒癥的早期診斷價值 通過以外周血Th22來評估膿毒癥早期診斷價值，繪制ROC曲線，AUC為0.846(95%CI：0.753～0.901)，最佳工作點(OOP)為1.9%，外周血Th22=1.9%，此時早期診斷膿毒癥的精確率較高(敏感性83.1%、特異性85.2%)。外周血PCT水平對早期診斷膿毒癥的AUC為0.801(95%CI：0.712～0.859)，明顯低于外周血Th22對膿毒癥早期診斷的準確性。見圖3。

圖3 外周血Th22對膿毒癥早期診斷的ROC曲線

3 討 論

近年來，膿毒癥的發(fā)病率正呈現(xiàn)逐年升高趨勢，雖然相關研究已對膿毒癥的發(fā)病機制及相關治療取得了一定進展，但其病死率仍居高不下，特別是對合并多器官功能障礙或休克的患者，其病死率可進一步升高。如何有效的早期診斷及評估膿毒癥病情變化，對于個體化干預和降低其病死率具有重要的意義。相關研究顯示，患者機體免疫功能紊亂是膿毒癥發(fā)生、發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。Th22細胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類輔助型T細胞亞群，該細胞參與了多種自身免疫性疾病、炎癥性疾病及惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[7]，其可能也在膿毒癥早期診斷及病情變化的評估過程中具有重要的臨床價值。

Th22在促炎因子如IL-6、TNF-α的刺激作用下，可由CD4+T淋巴細胞轉化而來，可以特異性的分泌IL-22，促進炎性細胞如中性粒細胞、單核細胞向感染部位募集[8]。IL-22作為Th22分泌的促炎細胞因子，可進一步誘導大量促炎細胞因子和趨化因子的表達，從而起到協(xié)同作用，放大機體炎癥反應[9]。相關研究顯示，Th22參與介導了自身免疫性疾病、惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程[10]。Th22是否參與了膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展過程，其體內Th22及IL-22表達水平如何，目前尚無資料證實。本研究結果發(fā)現(xiàn)，膿毒癥患者外周血Th22、IL-22水平較對照組明顯升高，表明膿毒癥患者存在較強的免疫反應，其可能參與并促進了膿毒癥的發(fā)生過程。進一步研究結果顯示，隨著患者病情嚴重程度的增加，其外周血Th22、IL-22、PCT水平及APACHE Ⅱ評分明顯升高。通過相關性分析，結果顯示膿毒癥患者外周血Th22與PCT水平、APACHE Ⅱ評分呈正相關。ROC曲線顯示，以外周血Th22診斷截點為1.9%時，其早期診斷膿毒癥的敏感性為83.1%，特異性為85.2%，明顯高于PCT。有研究顯示，PCT對于膿毒癥早期診斷及病情嚴重程度的評估敏感性和特異性均明顯高于CRP、IL-6等[11]，在膿毒癥患者外周血中，PCT水平與患者病情嚴重程度相關，但嚴重膿毒癥與膿毒癥休克患者間，CRP和IL-6水平無明顯差異。提示外周血PCT水平對于膿毒癥嚴重程度的評估有效性優(yōu)于CRP和IL-6。由此間接說明外周血Th22對早期診斷及嚴重程度評估的有效性優(yōu)于PCT、CRP及IL-6。已有研究表明，通過有效地抑制腫瘤患者體內Th22的激活，可以明顯抑制中性粒細胞、單核細胞的活化和聚集，從而降低腫瘤細胞的增殖、分化[12]。因此檢測外周血Th22具有重要的臨床價值，其不僅可作為評估膿毒癥患者早期診斷和病情嚴重程度的可靠指標，還可能成為其治療的有效靶標。

綜上所述，外周血Th22與膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關，但有關Th22在膿毒癥中的免疫調節(jié)機制還有待于進一步研究。本研究存在一定的局限性，樣本量偏少，未對外周血Th22在膿毒癥患者預后中的評估作進一步的研究。

[1]Norman BC,Cooke CR,Ely EW,et al.Sepsis-Associated 30-Day Risk-Standardized readmissions:analysis of a nationwide medicare sample[J].Crit Care Med,2017,45(7):1130-1137.

[2]Chen X,Zhu W,Tan J,et al.Early outcome of early-goal directed therapy for patients with sepsis or septic shock:a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials[J].Oncotarget,2017,8(16):27510-27519.

[3]欒櫻譯，秦慶華，呂奔，等．調節(jié)性T細胞對膿毒癥中T淋巴細胞凋亡的影響[J]．臨床急診雜志，2016(8)：585-589．

[4]Fard NA,Azizi G,Mirshafiey A.The potential role of T helper cell 22 and IL-22 in immunopathogenesis of multiple sclerosis[J].Innov Clin Neurosci,2016,13(7/8):30-36.

[5]Liu X,Yang J,Deng W.The inflammatory cytokine IL-22 promotes murine gliomas via proliferation[J].Exp Ther Med,2017,13(3):1087-1092.

[6]黃偉．第三版《膿毒癥與感染性休克定義國際共識》解讀[J]．中國實用內科雜志，2016，36(11)：959-962．

[7]滿琦，張安，張源，等．腦膠質瘤患者外周血中Th17,Th22細胞的表達及意義[J]．山東大學學報(醫(yī)學版)，2016，54(10)：55-59．

[8]Yoon J,Leyva-Castillo JM,Wang G,et al.IL-23 induced in keratinocytes by endogenous TLR4 ligands polarizes dendritic cells to drive IL-22 responses to skin immunization[J].J Exp Med,2016,213(10):2147-2166.

[9]Shen E,Wang M,Xie H,et al.Existence of Th22 in children and evaluation of IL-22+CD4+T,Th17,and other T cell effector subsets from healthy children compared to adults[J].BMC Immunol,2016,17(1):20.

[10]Di Lullo G,Marcatti M,Protti MP.Non-redundant roles for Th17 and Th22 cells in multiple myeloma clinical correlates[J].Oncoimmunology,2016,5(4):e1093278.

[11]Ríos-Toro JJ,Márquez-Coello M,García-lvarez JM,et al.Soluble membrane receptors,interleukin 6,procalcitonin and C reactive protein as prognostic markers in patients with severe sepsis and septic shock[J].PLoS One,2017,12(4):e0175254.

[12]Sun D,Lin Y,Hong J,et al.Th22 cells control colon tumorigenesis through STAT3 and Polycomb Repression complex 2 signaling[J].Oncoimmunology,2016,5(8):e1082704.

ChangesandsignificanceofperipheralbloodTh22levelinpatientswithsepsis

LiuShuang,ChenJuan,JinLan,ZhuWei,ZhouYi△

(PhysicalExaminationCenter,ChongqingMunicipalHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chonqging400021,China)

ObjectiveTo investigate the change of peripheral blood Th22 cells level in the patients with sepsis and its clinical significance.MethodsA total of 180 patients with sepsis in this hospital from April 2014 to April 2017 were selected as the research subjects and divided into the common sepsis group (81 cases),severe sepsis group (68 cases) and septic shock group (31 cases) according to the sepsis severity.The levels of IL-22,IL-6 and PCT in peripheral blood Th22 cells were measured in each group.The Acute Physiology and Chronic Health Evaluation Ⅱ (APACHE Ⅱ) scores were recorded.The efficiency of peripheral blood Th22 cells in the early diagnosis of sepsis was evaluated by adopting the receiver operating characteristic(ROC) curve.ResultsThe levels of peripheral blood Th22 cells and IL-22 in the patients with sepsis were significantly than those in the control group (Plt;0.05).The levels of Th22 cells,IL-22 and PCT and APACHE Ⅱ scores had statistical differences among the common sepsis group,severe sepsis group and septic shock group (Plt;0.05).The correlation analysis showed that peripheral blood Th22 cells level was positively correlated with PCT level and APACHE Ⅱ scores respectively (r=0.80,0.66,Plt;0.01).With peripheral blood Th22 cells level=1.9% as the boundary for early diagnosis of sepsis,its sensitivity and specificity were 83.1% and 85.2% respectively,which was significantly better than the PCT index.ConclusionPeripheral blood Th22 cells and related cytokines have the important clinical application value for the early diagnosis of sepsis and assessment of disease severity.

sepsis;diagnosis;interleukin-22;Th22 cells

劉爽(1984-)，醫(yī)師，本科，主要從事重癥醫(yī)學研究。△

，E-mail:xyzy03@163.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.33.017

R446

A

1671-8348(2017)33-4656-03

2017-05-14

2017-07-18)