免疫膠體金技術(shù)在食品檢測中研究進(jìn)展

李凌慧++李坤++羅鵬宇++程冰曉++韓瑜

疫膠體金技術(shù)是繼免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)、放射免疫技術(shù)這三大免疫標(biāo)記技術(shù)之后方便快捷被并且廣泛應(yīng)用的免疫標(biāo)記技術(shù)。早在1857年，Michael Faraday首次制備出納米金溶膠，他的研究為膠體金溶膠的發(fā)展與應(yīng)用提供了基礎(chǔ)[1]。1952年，KOLETSKY，S和GUSTAFSON，G提出了膠體金這一概念，研究了放射性膠體金對大鼠肝臟的損害。我國艾克莊在1982年研究多發(fā)性硬化癥腦脊液蛋白的電泳時用到了膠體金曲線測定法。免疫膠體金技術(shù)利用抗原抗體的特異性反應(yīng)，通過金標(biāo)示蹤物的直觀顯色變化而確定實驗結(jié)果。免疫膠體金技術(shù)不需要特殊大型設(shè)備和試劑、穩(wěn)定性強、操作簡單、成本較低、結(jié)果直觀，所以在快速檢測方面具有極大優(yōu)勢。

民以食為天，惡性食品問題事件頻發(fā)，越來越多的人開始關(guān)注食品安全問題，食品安全的隱患最多就是農(nóng)獸藥殘留與食品自身天然存在的有害物質(zhì)如生物毒素、食源性致病菌等，因此探究出一種快速、經(jīng)濟(jì)、準(zhǔn)確的食品安全檢測技術(shù)對人類來說是一個挑戰(zhàn)。本文就免疫膠體金技術(shù)在檢測食品中有害物質(zhì)的研究應(yīng)用展開綜述。

免疫膠體金技術(shù)快速檢測食品中抗生素

抗生素如林可霉素、氯霉素、慶大霉素等若引入食品中其殘留會通過食物鏈進(jìn)入人體中，長期食用含有超標(biāo)抗生素的食品會對人體健康帶來極大的隱患。

劉淑華等用膠體金免疫層析法檢測牛奶中新霉素的殘留含量，檢測結(jié)果重復(fù)性較好，并且表明牛奶樣品不需要進(jìn)行稀釋就可以直接檢測，檢測時間只有3～5分鐘，牛奶中新霉素的檢測限為200μg/L。李利芬等用膠體金法定性檢測牛奶中林可霉素殘留，采用兩種方法進(jìn)行定性檢測，方法一林可霉素的檢出限為40nk/mL，方法二林可霉素檢出限為100nk/mL。陶光燦等用膠體金免疫層析法測定了豬肉、雞肉等動物組織中氯霉素的殘留含量，方法特異性好，與其他抗生素?zé)o交叉反應(yīng)，結(jié)果顯示，所檢測的動物組織中氯霉素的檢測限均為0.3μg/kg。楊俊等應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)建立了快速檢測食品中慶大霉素的方法，實驗結(jié)果表明慶大霉素快速檢測試紙條的靈敏度為0.7μg /mL，檢測時間為10min，穩(wěn)定性和特異性均良好。

免疫膠體金技術(shù)快速檢測食品中農(nóng)獸藥殘留

獸藥殘留愈來愈受到人們的關(guān)注，目前使用不當(dāng)或過度使用農(nóng)藥、獸藥的現(xiàn)象時有發(fā)生，食品安全問題日益顯著，若人類長期食用含有獸藥殘留的食品，很有可能會致畸形、致基因突變和致癌。免疫膠體金越來越凸顯其在獸藥殘留方面檢測的優(yōu)勢，這一檢測技術(shù)使得整個分析過程變得簡便而又快速。

徐銳利用免疫膠體金技術(shù)快速檢測大菱鲆中恩諾沙星殘留量，結(jié)果表明：檢測卡對恩諾沙星標(biāo)準(zhǔn)品和環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)品的最低檢測靈敏度分別在1μg/kg～5μg/kg和20μg/kg～50μg/kg 之間。實際樣本經(jīng)本實驗方法和高效液相的方法同時檢測結(jié)果一致，均呈現(xiàn)陰性結(jié)果，此方法可用于實際樣本的驗證。朱愛榮研制了能夠快速檢測肉制品中氟苯尼考?xì)埩舻哪z體金試紙條，膠體金免疫層析法的檢出限為1.0μg/mL，和液相色譜-質(zhì)譜法相比具有快速簡便等優(yōu)點，更適用于食品中氟苯尼考?xì)埩舻目焖贆z測。吳巧麗等建立了一種膠體金免疫層析法快速檢測動物組織或飼料樣品中沙丁胺醇的殘留，該方法優(yōu)化了檢測試劑，最低檢出限為2 ng/m L，實驗所需時間只有3分鐘且肉眼可直接觀察到結(jié)果。吳茂生等利用膠體金免疫層析技術(shù)檢測魚、蝦中呋喃妥因代謝物的殘留，實驗中所用試紙條對魚、蝦的呋喃妥因代謝物檢出限均為1.0μg/kg，假陽性率不大于5% ，假陰性率為0。霍如林等應(yīng)用膠體金免疫層析法快速定量檢測豬肝中喹乙醇?xì)埩簦搶嶒灲⒘?T/C 比值法進(jìn)行定量檢測豬肝中喹乙醇的殘留，實驗所制備的試紙條可以在15分鐘內(nèi)完成對喹乙醇的定性和定量檢測，當(dāng)豬肝中喹乙醇質(zhì)量濃度在 1～200ng/m L 范圍內(nèi)，該試紙條檢測的最低檢測限為 6.83ng/m L。

免疫膠體金技術(shù)快速檢測食品中真菌毒素

真菌毒素是一些真菌在生長過程中所產(chǎn)生的次級代謝產(chǎn)物，幾乎廣泛地存在于所有的食品和飼料中，危害人類的健康安全。目前研究較多、對人類危害較大的真菌毒素包括黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等，真菌毒素具有毒性強、污染頻率高的特點，可致癌、致畸、致突變。據(jù)報道，全球每年由于霉變、污染真菌毒素引起的農(nóng)產(chǎn)品和工業(yè)原料的損失達(dá)數(shù)百億。據(jù)聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織統(tǒng)計，全世界每年約有25%的谷物受真菌毒素污染。鑒于真菌毒素給糧油食品產(chǎn)業(yè)帶來的巨大損失，建立并應(yīng)用可以批量快速檢測真菌毒素的方法至關(guān)重要，膠體金免疫層析技術(shù)現(xiàn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于檢測真菌毒素。

龐璐等建立了一種用PCR-免疫膠體金試紙條法快速檢測食品中腸出血性大腸桿菌O157：H7 的方法，這種方法具有良好的特異性，靈敏度也極高，使用PCR-免疫膠體金試紙條方法的菌液檢測敏感度為100 CFU/mL，此法檢測結(jié)果準(zhǔn)確，價格低廉，適用于食源性病原微生物臨床檢測、農(nóng)牧業(yè)和食品工業(yè)、海關(guān)檢驗檢疫、環(huán)境檢測等領(lǐng)域。羅曉琴等應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù)建立了一種可以快速檢測牛奶中黃曲霉毒素M1的方法，實驗中所研制的黃曲霉毒素M1快速檢測試紙條的檢測限為0.3μg/L，檢測時間為10 min，假陽性率和假陰性率均為0，這種方法適合現(xiàn)場快速檢測牛奶中殘留的黃曲霉毒素M1。龐璐等建立了PCR-免疫膠體金試紙條法可以快速檢測食品中單核增生李斯特氏菌，實驗共采集乳品樣品131份， 陽性樣品1份， 檢出率1.53%； 肉制品224份， 陽性樣品4份， 檢測率1.79%。王俊雙以多克隆抗體和膠體金合成標(biāo)記技術(shù)為基礎(chǔ)，根據(jù)免疫層析的原理，建立了食品中 DON 膠體金免疫快速檢測方法，目測檢出限1mg/kg，檢測時間為10～15 min，此方法的重復(fù)性良好。

綜上所述，免疫膠體金技術(shù)在快速檢測抗生素、獸藥殘留、真菌毒素方面已經(jīng)有很純熟的方法，食品安全問題不容小覷，快速定性檢測大批量食品中可能對人體健康造成危害的物質(zhì)對人類來說是一個挑戰(zhàn)，免疫膠體金技術(shù)具有成本低，檢測速度快等優(yōu)點，在未來仍然有很大的發(fā)展空間。

展望

免疫膠體金技術(shù)操作方便，檢測速度快，開發(fā)成本低，結(jié)果判定不需要復(fù)雜的儀器，仍然是現(xiàn)階段一種經(jīng)濟(jì)實用的快速檢測技術(shù)。但是同側(cè)流免疫層析檢測相比定量難，靈敏度不高，因此在不損害其本身優(yōu)點的基礎(chǔ)上提高重現(xiàn)性、靈敏度和定量準(zhǔn)確性的意義重大。endprint