畜產品獸藥殘留種類及檢測技術研究

孫宇++張亮

近幾年來，隨著畜牧業規模的擴大以及動物疾病的頻發，常常使用獸藥提高生產效率、防治動物疾病、改善畜產品品質，而不合理地使用和濫用獸藥及飼料藥物添加劑的現象也越來越嚴重，導致畜產品中獸藥殘留。畜產品中獸藥殘留不僅造成環境的污染，破壞生態平衡，給人類的健康帶來極大的危害，而且在國際貿易中，不僅影響畜產品品質，給我國造成巨大的經濟損失，影響我國畜牧業的發展和出口創匯，更重要的是損害了我國畜產品在國際上的聲譽，影響我國畜產品在國際上的地位。

殘留獸藥的分類

目前，隨著現代養殖業的規模化發展，獸藥的種類和應用規模逐年遞增，食品法典委員會（CAC）按照功能將獸藥分為糖皮質激素，生長促進劑，輔助生產劑，腎上腺受體激動劑，β-受體阻斷劑，抗腸蟲劑，殺菌劑，殺蟲劑，抗原蟲劑，殺錐蟲劑，鎮靜劑等；根據殘留毒理學意義較大的獸藥按其用途分類主要包括：抗生素類，如鏈霉菌產生的廣譜抗生素——四環素，對革蘭氏菌具有較強抑制能力的大環內酯類抗生素以及β-內酰胺類、氯霉素、氨基糖苷類等；合成抗菌素類，如目前最為常見的磺胺類藥物以及廣譜抗菌藥物——喹諾酮類等。抗寄生蟲類藥和殺蟲劑，如苯并咪唑類、阿維菌素類、咪唑并噻唑類等；生長促進劑，如克侖特羅、萊克多巴胺和沙丁胺醇、雌二醇等。

獸藥殘留檢測方法

現階段，我國畜產品中獸藥殘留問題十分嚴重，因此，畜產品中獸藥殘留的檢測是保障我國畜產品安全極為重要的問題。目前，國內外檢測畜產品中獸藥殘留的方法主要有四大類，分別為免疫法、儀器法、生物傳感器法以及微生物法。

儀器檢測法。

（1）高效液相色譜技術（HPLC）及其聯用技術

高效液相色譜法利用不同物質在不同相態中分配系數的不同，以流動相對固定相中的待測物進行洗脫，使柱內各成分被分離，通過檢測器進行檢測，從而實現對被測樣品分析的一種色譜技術。由于具有分離效率高、選擇性好、特異性強、靈敏度高等優點，在畜產品獸藥殘留測定中的廣泛應用。Stoev建立了畜產品中10種常用磺胺類藥物的HPLC-FLD檢測法，最低檢測限可達1～5μg/kg。謝愷舟等將高效液相色譜與熒光檢測技術聯用，對雞蛋中氟苯尼考和氟苯尼考胺殘留量進行檢測，該方法線性關系良好，相關系數達到0.999以上。

（2）氣相色譜技術（GC）及其聯用技術

氣相色譜法是利用各組分在流動相和固定相之間分配系數的差異，進行分離與分析的色譜技術，該方法具有分離效率高、分析速度快、靈敏度高、樣品用量小等優點，自20世紀60年代氣相色譜應用于農藥和藥物殘留分析以來，大大提高了農獸藥殘留量的檢測水平。目前，該法已成為最典型、應用最廣的分析方法。張英宣采用GC法測定雞蛋中氯霉素的藥物殘留量，該方法在1～300ng/ml范圍內氯霉素標準溶液的峰面積與濃度線性關系良好，回收率達93.4%。

（3）薄層色譜法（TLC）

薄層色譜法是利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在移動相流過固定相的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分互相分離的目的。該方法是一種簡便、快速的傳統色譜分析方法，它可同時測定多個樣品、分析成本低，但重現性不好、靈敏度及分辨率不及GC和HPLC，使它在獸藥多殘留分析中的應用受到限制。Gerry J.Reimen等建立了檢測鮭魚中磺胺嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲嘧啶等5種磺胺藥的TLC方法，檢測限可達0.136μg/mL。

免疫學檢測法。免疫學檢測法是利用抗原抗體特異性反應檢測各種物質的技術。該方法在獸藥殘留檢測中具有非常突出的優勢。免疫方法適用于大量樣本的快速分析、靈敏度高、成本低，不需要昂貴復雜的儀器，能夠滿足畜產品獸藥殘留現場快速檢測的需要。近年來，免疫學檢測方法，尤其是酶聯免疫吸附法廣泛應用于農藥和獸藥的快速篩選殘留檢測。

（1）酶聯免疫吸附法（ELISA）

酶聯免疫法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗體或抗原在固相表面進行反應的技術，通過酶與底物發生顏色反應來定量測定抗原或抗體量的一種方法。隨著該技術的不斷完善和成熟，目前ELISA方法在農藥殘留檢測的免疫方法中占到了90%以上。Jester Edward等應用ELISA試劑盒對魚肉樣品中硝基呋喃類藥物殘留進行檢測，并將檢測結果與LC-MS-MS檢測結果進行比較，相對偏差范圍在1.8%～7.6%。兩種分析物在魚肉中的最低檢出限分別達到0.05ng/g和0.2ng/g。蔡勤仁等在制備恩諾沙星的單克隆抗體的基礎上，建立了間接競爭ELISA方法，靈敏度為0.13ng/ml。

（2）膠體金免疫法（CGIA）

膠體金免疫法是待測樣品與固定在試紙條上的膠體金標記抗體相結合產生高特異性、高親和免疫反應，由于膠體金顆粒具有高電子密度的特性，樣品會滯留并富集在檢測區域，出現呈色現象。該方法直接根據顯色結果進行定性分析，無需其他衍生步驟，適宜于藥物殘留的快速初篩。Verheijen等研制了磺胺二甲嘧啶（SM2）膠體金快速檢測試紙條用于檢測SM2標準液和牛尿樣本，制備的試紙條檢測限為10.0ng/mL，對稀釋后的新鮮牛奶進行測定，檢測限為20.0ng/mL。Li SQ等則在納米金顆粒上聯結單抗，制備納米金探針對肉類和飼料樣品中硝基呋喃代謝物AMOZ進行快速篩選和檢測，開發了一種競爭性免疫層析測定方法。

（3）放射性免疫法（RIA）

放射免疫分析法是采用放射性受體競爭的原理快速檢測畜產品獸藥殘留的方法。此法樣品前處理簡便，可以檢測磺胺類總殘留總量，適用于初篩分析。

（4）化學發光免疫分析法（CLIA）

化學發光免疫分析法是基于化學發光強度和被測物含量之間的關系建立起來的一種分析方法。CLIA用于獸藥殘留檢測的方式與ELISA方法類似，采用直接法檢測或間接法檢測。目前，CLIA法能夠檢測動物組織中的克倫特羅、磺胺類等藥物。

微生物檢測法。微生物抑制分析法是根據藥物對特異微生物的抑制作用來定性分析樣品中藥物殘留。該法樣品處理簡便，回收率高，不需特殊設備，適用于獸藥殘留大量分析的篩選，現已作為一種快速有效的獸藥殘留初篩方法被廣泛使用。近年來，我國不少學者相繼以特異性微生物為工作菌，用杯碟法或圓濾紙片法測定畜產品或其組織中的抗生素殘留。但是微生物法靈敏度和精確度較低，缺乏特異性，只適用于抗生素總殘留的測定，且易受到其他抗生素的干擾，故需要借助免疫法和儀器分析法等加以確定。

生物傳感器檢測法。生物傳感器是由固定化的生物敏感材料作識別元件（包括酶、抗體、抗原、微生物、細胞、組織、核酸等生物活性物質）與適當的理化換能器相結合，通過光、熱、聲音、顏色等信號轉變為可定量的電信號從而快速檢測抗原、抗體、維生素、蛋白質等物質的一種新型器件。該方法具有選擇性好、精度高、分析速度快、成本低、并且可實現在線連續監測。Haasnoot等以單克隆抗體為基礎，建立了生物傳感器免疫方法實現對雞血漿中8種磺胺類藥物的檢測。Thompson等利用光學免疫傳感器建立了多種畜產品中硝基咪唑類藥物的多殘留測定方法。

展望

隨著公眾對食品安全關注度的提升，以及國際貿易對食品安全要求的日益嚴格，畜產品中的獸藥殘留問題也愈來愈受到社會各界的關注。獸藥的殘留問題不僅會對人們身體健康造成影響，還會制約畜牧行業的正常發展。因此，必須加大宣傳引導，增強大家的法制觀念，從根本上控制獸藥的亂加濫用，加強對獸藥生產和使用的管理，同時完善獸藥殘留的檢測體系，最終實現獸藥存留問題的有效控制。

基金項目：糧油食品深加工吉林省高校重點實驗室科研項目（2016019）；吉林工商學院科學技術研究項目（ LZ2016007）。endprint