貴州一動物園黑葉猴支原體及繼發鏈球菌感染的診治

石遠菊胡玲玲湯德元* 曾智勇王 彬黃 濤李 達韋冠東龍冬梅李 波

(1.貴州大學動物科學學院，貴陽，550025；2.貴州省貴陽市黔靈山公園動物園，貴陽，550003；3.遵義市紅花崗區農牧局，遵義，563000)

貴州一動物園黑葉猴支原體及繼發鏈球菌感染的診治

石遠菊1胡玲玲1湯德元1*曾智勇1王 彬1黃 濤1李 達1韋冠東1龍冬梅1李 波3

(1.貴州大學動物科學學院，貴陽，550025；2.貴州省貴陽市黔靈山公園動物園，貴陽，550003；3.遵義市紅花崗區農牧局，遵義，563000)

黑葉猴；支原體；鏈球菌；治療

貴州一動物園飼養有國家Ⅰ級保護動物黑葉猴發生氣喘、咳血等癥狀，且已病死2只。為查明病因，通過臨床癥狀觀察、病理剖檢、細菌分離培養、生化鑒定和PCR檢測等方法進行診斷。結果表明該黑葉猴為支原體和鏈球菌感染；且根據細菌藥敏試驗結果，制定出相應的防治措施。

2016年8月下旬，貴州省一動物園國家I級保護動物黑葉猴(Trachypithecusfrancoisi)12只(1～12歲不等，平均體重3 kg)均出現有流涎、喘氣、全身無力等癥狀，其中2只發病1 d后死亡。該黑葉猴沒有接種過任何疫苗。于是送檢黑葉猴(10歲左右)1只到貴州大學動物醫院進行診斷。根據臨床癥狀、病理剖檢和實驗室診斷，確診黑葉猴為支原體感染及繼發鏈球菌感染而死?，F將診治結果報道如下。

1 臨床癥狀

黑葉猴發病前未見明顯異?，F象，發病后心跳為101次/min、呼吸次數為81次/min，伴有喘氣、食欲下降、口鼻有半透明黏稠液體流出、同時出現輕度拉稀現象，隨著病情的發展發病黑葉猴出現全身無力、心力衰竭和呼吸衰竭死亡。

2 剖檢變化

剖檢發現病死黑葉猴(10歲左右)腹腔有積液，胃腸充氣，有較厚的腸系膜脂肪覆蓋，胃腸黏膜輕度充出血；氣管及鼻腔中有大量黏稠液體；肺臟出現不同程度壞死灶(圖1)；肝臟表面有嚴重瘀斑(圖2)，且變脆，邊緣部分出現壞死灶；脾臟色澤變深、變硬；心臟包囊有積液，也有少許瘀斑。

圖1 肺臟嚴重壞死病變Fig.1 The lung serious necrosis

圖2 肝臟嚴重瘀斑、變脆Fig.2 The liver serious ecchymosis and brittle

3 實驗室診斷

3.1 細菌分離培養

對死亡黑葉猴的心、肝、脾、肺、腎、血液進行細菌分離培養，接種于血瓊脂培養基中，37 ℃ 、5% CO2恒溫箱中厭氧/需氧培養 24～48 h觀察細菌的生長狀態和菌落特征，然后挑取單個菌落進行純培養。結果在需氧和厭氧環境下，血瓊脂培養基中均有菌落生成，判定分離菌為兼性厭氧菌，培養24 h后能觀察到灰白色、露滴狀、表面光滑，邊緣整齊的菌落，菌落周圍有明顯的溶血環。革蘭氏染色鏡檢可見，藍紫色圓形、鏈狀革蘭陽性球菌(圖3)。

圖3 10×100油鏡下的革蘭氏陽性鏈狀球菌Fig.3 Oil immersion lens(10×100)G+chain aureus

3.2 細菌的生化特性鑒定

分離菌經 24 h 純培養后，得到的純培養物接種于微量生化鑒定管中，37℃，5%CO2恒溫培養箱培養24～48 h，結果顯示：該分離菌株能發酵葡萄糖、山梨糖、乳糖、麥芽糖、木糖、蔗糖、淀粉，不能利用6.5%氯化鈉、甘露醇、肌醇、0.1%美蘭牛乳，不液化明膠，生化試驗結果顯示與標準菌株相比具有典型的鏈球菌的生化特性，再結合細菌培養特性，判斷該分離菌為鏈球菌。

3.3 藥敏試驗

藥敏試驗結果顯示：對慶大霉素、林可霉素、阿莫西林、頭孢曲松、氨芐西林抑菌圈直徑<10.00 mm屬低敏；卡那霉素和青霉素抑菌圈均>13.00 mm屬中度敏感；而氧氟沙星抑菌圈為17.50 mm屬高敏。

3.4 支原體PCR檢測

解剖采集黑葉猴的肺臟，適量取樣研磨后反復凍融3次，勻漿器磨20 min后收集勻漿，12 000 r/min離心10 min，取上清提取DNA(按支原體PCR檢測核酸提取試劑盒使用說明書)。用支原體PCR 檢測試劑盒(購自北京世紀元亨動物防疫技術有限公司)進行 PCR 核酸檢測。反應體系為(總體積20 μL)：16 μL PCR反應液，2 μLTapDNA 聚合酶，2 μL 模板 DNA。PCR擴增程序為：94 ℃ 3 min；94 ℃ 30 s，50 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s，35個循環；72 ℃ 延伸10 min。反應結束后取5 μL PCR產物于1%的1×TAE瓊脂糖凝膠中電泳檢測(90 V，30 min)，凝膠成像系統拍照記錄。其結果病料中檢測出支原體特異性陽性條帶(圖4)，說明黑葉猴為支原體感染。

圖4 PCR檢測結果Fig.4 PCR Test results注： M.DL2000 Marker；1.黑葉猴支原體PCR檢測結果Note：M.DL2000 Marker；1.Francois’ langurs Mycoplasma PCR Test results

4 確診

根據臨床癥狀、病理解剖診斷、細菌染色鏡檢、生化鑒定及支原體核酸PCR檢測，確診該動物園黑葉猴為支原體感染及繼發鏈球菌感染。

5 防治

首先對有臨床癥狀的黑葉猴立即進行針對性的隔離救治。藥物治療是控制動物支原體病的一個重要手段。由于支原體無細胞壁，因此應選擇作用于細菌蛋白質合成的相關藥物，如環丙沙星、氧氟沙星、土霉素、四環素抗菌藥等治療效果較好。具體治療方法為：左氧氟沙星1片/次，2次/d；卡那霉素，3～5 mL/次，2次/d；連用5 d。結合中藥處方治療，用白礬散加減：白礬5 g、白芷5 g、浙貝母5 g、葶藶子5 g、黃連5 g、黃芩5 g、大黃4 g、郁金5 g、甘草5 g、桔梗5 g、紫苑5 g、冬花5 g，水煎后加蜂蜜25 g，每天3次灌服，連用3劑，用藥時應使用足夠劑量與療程。對已死亡黑葉猴尸體進行嚴格深埋消毒，并對被糞便、血液等的污染物及棄尸地進行消毒，圈舍、用具等用10%石灰乳或5%氫氧化鈉液嚴格消毒。墊草等污染物焚燒處理。糞便堆積后用5%氫氧化鈉液表面消毒后生物熱處理。

其次對黑葉猴進行免疫接種，能有效地預防和控制支原體肺炎的發生；在幼猴1月齡時進行滅活苗的免疫，肌肉注射，每頭接種0.5 mL，14 d后加強免疫1 mL，能起到很好的防治效果。同時將可疑黑葉猴全部隔離飼養，患病黑葉猴群則隔離治療并進行帶猴消毒。經以上方法治療和防護后，根據近2月的觀察未發現黑葉猴新病例。

Francois’ langurs；Mycoplasma；Streptococcus；Treatment

Diagnosis and Treatment of Mycoplasma and Secondary Streptococcus Infection in Francois’ Langurs(Trachypithecus francoisi) at a Zoo in Guizhou Province

Shi Yuanju1Hu Lingling1Tang Deyuan1*Zeng Zhiyong1Wang Bin1Huang Tao1Li Da2Wei Guandong1Long Dongmei1Li Bo3

(1.College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang，550025，China；2.Qianlingshan Park，Guizhou Province，Guiyang，550003，China；3.Agriculture Bureau of Animal Husbandry in Honghuagang District，Zunyi，563000，China)

Francois’ langur(Trachypithecusfrancoisi)，a first-class nationally protected species，exhibited symptoms of asthma，hemoptysis and other symptoms，and two langurs died at a zoo in Guizhou Province.To identify the cause，we conducted clinical observation，pathological autopsy，bacterial isolation and culture，biochemical identification and PCR detection and other methods for diagnosis.The results showed that the langurs were infected with mycoplasma and streptococcus；and according to the results of bacterial susceptibility test，the corresponding control measures were worked out.

稿件運行過程

2017-03-06

修回日期：2017-04-19

發表日期：2017-11-10

S858.9

A

2310-1490(2017)04-654-03

2017年貴州省教育廳《生物多樣性及其保護生物學》一流課程建設教改項目資助

石遠菊，女，24歲，碩士研究生；主要從事動物傳染病病原分子生物學的科研學習。

*通訊作者：湯德元，E-mail：tdyuan@163.com