大株紅景天注射液治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛療效及作用機(jī)制研究

王海洋，楊守忠，楊小青

(1.鄭州大學(xué)第一附屬南陽(yáng)醫(yī)院，南陽(yáng)市中心醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

臨床研究

大株紅景天注射液治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛療效及作用機(jī)制研究

王海洋1，楊守忠1，楊小青2

(1.鄭州大學(xué)第一附屬南陽(yáng)醫(yī)院，南陽(yáng)市中心醫(yī)院，河南 南陽(yáng) 473000；2.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003)

目的：觀察靜脈滴注大株紅景天注射液輔助治療冠心病穩(wěn)定型心絞痛(SAP)的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法：112例符合納入標(biāo)準(zhǔn)的SAP患者隨機(jī)分為觀察組(58例)和對(duì)照組(54例)，兩組均采用常規(guī)治療，觀察組在此基礎(chǔ)上靜脈滴注大株紅景天注射液，14天為1個(gè)療程。采用超高效液相色譜儀與成分分析法分析兩組患者治療前后血清代謝差異物；采用ELISA法檢測(cè)兩組患者治療前后血清中超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、C反應(yīng)蛋白(CRP)、Fas和Fas-L表達(dá)。結(jié)果：1)與對(duì)照組相比較，觀察組總有效率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。2)采用正交校正的偏最小二乘判別分析法尋找潛在的生物標(biāo)記物, 共鑒定得到磷酯酰絲氨酸、溶血磷脂(C24H50NO7P)、溶血磷脂(C28H50NO7P)和溶血磷脂(C30H50NO7P)4種代謝差異物。3)對(duì)照組經(jīng)常規(guī)治療后血清中SOD、GSH表達(dá)升高(P<0.05)，CRP表達(dá)下降(P<0.05)，觀察組治療后血清中SOD、GSH、sFas-L表達(dá)更高，MDA、CRP、sFas表達(dá)更低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：大株紅景天注射液可從抗炎、抗氧化、抗凋亡等多個(gè)方面起到輔助治療SAP的作用。

冠心病；穩(wěn)定型心絞痛；氧化應(yīng)激；大株紅景天注射液；炎癥因子；凋亡

冠心病(coronary artery heart disease，CHD)具有發(fā)病率高、致死率高、致殘率高和并發(fā)癥多等特點(diǎn)，在我國(guó)已成為危害公眾健康的主要疾病[1],穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris,SAP)則是由勞力引起的心肌缺血，臨床表現(xiàn)為前胸陣痛，休息后可緩解[2]。藏藥紅景天具有抗氧化、抗疲勞及抗心肌缺血等功效，應(yīng)用歷史悠久[3]。現(xiàn)代藥理學(xué)發(fā)展迅速，藏藥大株紅景天的有效成分已被開(kāi)發(fā)為臨床藥物—大株紅景天注射液(Sofren injection，SI)。本研究觀察了靜脈注射SI治療SAP患者臨床效果、血清代謝組學(xué)變化和氧化應(yīng)激標(biāo)志物超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、C-反應(yīng)蛋白(CRP)和Fas/FasL系統(tǒng)表達(dá)水平變化，為臨床應(yīng)用SI治療SAP提供理論依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取我醫(yī)院收治的SAP患者112例，男64例，女48例；年齡41～86歲，平均(65.98±17.98)歲。均經(jīng)256層螺旋CT或冠狀動(dòng)脈造影術(shù)檢查確診。所有患者采用數(shù)字隨機(jī)表法分為對(duì)照組(54例)和觀察組(58例)。其中對(duì)照組男30例，女24例；年齡41～84歲，平均年齡(66.13±13.28)歲。觀察組男35例，女23例；年齡42～86歲，平均年齡(64.91±18.33)歲。兩組之間年齡、性別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 儀器設(shè)備

甲醇、甲酸(Thermo Fisher，美國(guó));去離子純水儀-Milli-Q;超高效液相色譜儀-Acquity UPLC System;色譜柱-Acquity BEH-C18(Millipore,美國(guó));SOD、GSH、MDA、CRP、Fas及Fas-L ELISA試劑盒(欣博勝，中國(guó))。

1.3 SI應(yīng)用方法

兩組患者均采用常規(guī)治療(口服拜阿司匹林腸溶片，100 mg/次，1次/d;口服阿托伐他汀鈣片，20 mg/次，1 次/d)，觀察組在常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用大株紅景天注射液靜脈滴注，10 ml/次，1次/d，2周為1個(gè)療程。應(yīng)用大株紅景天靜脈滴注期間觀察組患者均無(wú)不良反應(yīng)。

1.4 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

顯效：各種不適癥狀基本消失；有效：疼痛發(fā)作次數(shù)、程度及持續(xù)時(shí)間有明顯減輕；無(wú)效：癥狀無(wú)任何好轉(zhuǎn)或加重。

1.5 色譜及質(zhì)譜分析條件

色譜柱柱溫40℃;流動(dòng)相為(A)含0.1%甲酸的水溶液和(B)甲醇梯度洗脫:1～3 min,8%～85%流動(dòng)相B；3～6 min，85%～100%流動(dòng)相B；6～8 min，100%流動(dòng)相B；8～9 min，100%～8%流動(dòng)相B；9～11 min，8%流動(dòng)相B，流速0.5 ml/min；樣品進(jìn)樣量10 μL。質(zhì)譜分析條件：ESI離子源，采用正、負(fù)離子模式，2.6 kV毛細(xì)管電壓，設(shè)定60 V錐孔電壓，離子源、霧化溫度分別為110℃、470℃，殼氣流速設(shè)定為900 L/h；負(fù)離子模式：2.6 kV毛細(xì)管電壓，設(shè)定錐孔電壓為40 V，離子源、霧化溫度分別為：70℃、160℃，殼氣流速：550 L/h，亮氨酸腦啡肽做為質(zhì)譜內(nèi)標(biāo)，采用甲酸鈉校正質(zhì)量軸。采用Masslynx V4.1軟件進(jìn)行峰提取、峰對(duì)齊及歸一化處理，根據(jù)VIP值(VIP>1.0)和P值(P<0.05) 篩選出治療前后具有差異的生物標(biāo)志物。通過(guò)HMDB及METLIN等精確質(zhì)量檢索數(shù)據(jù)庫(kù)，篩選出最有可能的一種或幾種化合物[4]。將質(zhì)譜、色譜分析所得的數(shù)據(jù)導(dǎo)入Heml軟件[5]，對(duì)結(jié)果進(jìn)行熱圖分析。

1.6 血清SOD、GSH、MDA、CRP、及Fas/Fas-L通路檢測(cè)及方法

所有受試者均在治療前及治療后14天分別采取靜脈血3 ml，將血液樣本裝于促凝管中，以高速離心10 min，留取血清并保存于-80℃冰箱中。待樣本集齊后一次性檢測(cè)。血清SOD、GSH、MDA、CRP、sFas及sFas-L表達(dá)水平均采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)1)配置標(biāo)準(zhǔn)品液；2)計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線；3)加樣；4)洗板；5)孵育；6)洗板；7)暗反應(yīng)；8)計(jì)算吸光值；9)計(jì)算結(jié)果等步驟操作。所有試劑盒均采購(gòu)自欣博勝公司(中國(guó)),嚴(yán)格按照各種試劑說(shuō)明書(shū)操作[6]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 兩組患者臨床療效比較

與對(duì)照組相比較，觀察組總效率明顯高于對(duì)照組，而無(wú)效率低于對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),詳見(jiàn)表1。

表1 兩組臨床療效比較[n(%)]

注：與對(duì)照組相比，*P<0.05。

2.2 主要代謝生物標(biāo)記物的分析

通過(guò)數(shù)據(jù)庫(kù)標(biāo)準(zhǔn)圖譜比對(duì)或標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照驗(yàn)證，觀察組治療后與治療前相比，共確定4種潛在的生物標(biāo)記物，分別為磷酯酰絲氨酸、3種溶血磷脂。治療后磷酯酰絲氨酸的含量升高，其他成分含量下降。對(duì)照組治療前后血清代謝生物標(biāo)記物無(wú)明顯變化。觀察組治療前結(jié)果進(jìn)行熱圖分析,圖中越接近-1端藍(lán)色為低表達(dá)，越接近1端紅色為高表達(dá)，黑色框?yàn)闊o(wú)數(shù)據(jù)表示。詳見(jiàn)表2、圖1～2。

表2 觀察組治療前后血清代謝生物標(biāo)記物

2.3 經(jīng)SI治療后血清中SOD、GSH、MDA、CRP、sFas、sFas-L水平變化

與對(duì)照組治療前相比，治療后SAP患者血清中SOD、GSH表達(dá)升高，CRP表達(dá)降低，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，與對(duì)照組治療后相比，觀察組治療后血清中SOD、GSH、sFas-L表達(dá)更高，MDA、CRP、sFas表達(dá)更低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表3。

表3 治療前后兩組患者血清中SOD、GSH、MDA、CRP、sFas、sFasL水平比較

注:與同組治療前比較，#P<0.05； 與對(duì)照組治療后比較，*P<0.05。

圖1 離子色譜模式下基峰強(qiáng)度

圖2 經(jīng)SI治療前后患者血清中磷酯酰絲氨酸及溶血磷脂表達(dá)差異熱圖

3 討論

SI在臨床用于治療心血管疾病有較好效果，李佳應(yīng)用SI治療急性心肌缺血-再灌注損傷，發(fā)現(xiàn)SI可有效降低心肌缺血-再灌注損傷患者血清中CK-MB、AST和IL-6的表達(dá)，減輕再灌注時(shí)心肌組織的損傷程度[7]。而對(duì)于SI治療SAP的臨床效果，國(guó)內(nèi)尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究觀察冠心病患者經(jīng)SI治療后心絞痛發(fā)作次數(shù)及疼痛程度變化，研究發(fā)現(xiàn)，SI可有效改善冠心病患者心絞痛癥狀，與常規(guī)治療相比，有效率明顯升高，而無(wú)效率降低。

SAP其本質(zhì)是冠狀動(dòng)脈的狹窄，引起心肌細(xì)胞缺血、缺氧，持續(xù)而嚴(yán)重的冠脈狹窄可引起心肌細(xì)胞壞死、凋亡和自噬，死亡的心肌細(xì)胞破裂后，大量磷脂釋放到血液內(nèi)，在磷脂酶的作用下磷脂裂解成溶血磷脂，增加了血液中溶血磷脂的濃度。為了尋找SI作用靶點(diǎn)，本研究應(yīng)用質(zhì)譜-色譜聯(lián)合法對(duì)觀察組與對(duì)照組血清行代謝組學(xué)檢測(cè)，以尋找SI治療后人體血清中最小化學(xué)分子的變化。研究發(fā)現(xiàn)，SI能有效降低對(duì)照組患者血清中3種溶血磷脂的表達(dá)，說(shuō)明SI可改善心肌供血，減少心肌細(xì)胞死亡。

研究報(bào)道,氧化應(yīng)激參與SAP的發(fā)病及發(fā)展過(guò)程，而氧化應(yīng)激下游所引起的炎癥反應(yīng)日益受到人們的重視。氧化應(yīng)激本質(zhì)是大量的ROS破壞生物體正常的生理組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致生物體組織的功能異常[8]。在研究中人們發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，不僅可以直接發(fā)揮細(xì)胞毒性，還可以系統(tǒng)的調(diào)控某些炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，從而引發(fā)動(dòng)脈硬化的形成和發(fā)展[9]。SOD與GSH為體內(nèi)重要的抗氧化因子，國(guó)內(nèi)有研究報(bào)道，血清中SOD與GSH活力的下降，可能是SAP重要的發(fā)病因素[10]。MDA是體內(nèi)主要的氧化指標(biāo)，在體內(nèi)的表達(dá)與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化程度和心絞痛嚴(yán)重程度成正相關(guān)[11]。CRP是少數(shù)可獨(dú)立預(yù)測(cè)冠心病及斑塊破裂的炎癥因子，有研究報(bào)道，檢測(cè)經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)(可致斑塊破裂)患者血清中CRP的表達(dá)，與術(shù)前相比較并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[12]。而另一研究結(jié)果則顯示，CRP在外周血的表達(dá)，與急性心肌梗死的發(fā)病率成正相關(guān)[13]。這表明，CRP在冠心病患者體內(nèi)表達(dá)結(jié)果與不良事件的發(fā)生密切相關(guān)，降低外周血中CRP的表達(dá)，可能對(duì)延緩SAP的疾病進(jìn)程起到一定作用。目前發(fā)現(xiàn)Fas/FasL系統(tǒng)是調(diào)控細(xì)胞凋亡的經(jīng)典途徑之一，且與心血管系統(tǒng)疾病密切相關(guān)[14]。

大株紅景天成分有紅景天苷、丁香酸、酪醇、云杉苷、二氫松柏苷等15種[15]。其中紅景天苷為其主要有效成分。現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)，紅景天苷具有抗氧化、抗疲勞、抗凋亡和抗心肌缺血等作用。國(guó)內(nèi)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，紅景天苷可延長(zhǎng)心肌缺血及亞硝酸中毒小鼠生存時(shí)間[16]。另有學(xué)者在細(xì)胞水平上制備氧化應(yīng)激模型，應(yīng)用紅景天苷干預(yù)治療后，細(xì)胞內(nèi)SOD的活性顯著增高[17]。SI已在臨床開(kāi)始應(yīng)用，羅浩等研究發(fā)現(xiàn)[18]，SI可有效降低急性冠脈綜合征患者血清IL-6及MCP-1的表達(dá)水平，有助于冠脈斑塊的穩(wěn)定，可降低CHD患者惡性事件的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)照組經(jīng)常規(guī)治療后血清中SOD、GSH表達(dá)升高，CRP表達(dá)下降。對(duì)照組SOD和GSH上升，這可能與患者常規(guī)治療中應(yīng)用他汀類藥物有關(guān)，已有文獻(xiàn)報(bào)道，他汀類藥物具有抗氧化與抗炎的作用[19]，而常規(guī)治療并未對(duì)產(chǎn)生影響。同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)，觀察組經(jīng)SI治療后血清中各項(xiàng)指標(biāo)變化較對(duì)照組治療后效果更加明顯，并影響Fas/Fasl系統(tǒng)。說(shuō)明SI不僅有良好的抗氧化性，而且具有抗心肌細(xì)胞凋亡的作用。推測(cè)SI的抗氧化與抗凋亡特性使觀察組患者更多的保留了工作心肌細(xì)胞、血清中溶血磷脂減少，從而改善SAP患者臨床癥狀，至于SI中哪些相關(guān)成分可直接影響Fas/Fasl平衡，還需要進(jìn)一步研究證實(shí)。

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EffectandMechanismofSofrenInjectionintheTreatmentofStableAnginaPetoris

WANG Hai-yang1, YANG Shou-zhong1, YANG Xiao-qing2

(1.NanyangCentralHospital,TheFirstAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Nanyang473000,China; 2.XinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453003,China)

Objective: To explore the mechanism of Sofren injection as an adjunctive therapy in the treatment of stable angina pectoris(SAP), and to provide theoretical basis for its clinical application. Methods: 112 patients with coronary heart disease were randomly divided into the observation group (n=58) and the control group (n=54); conventional treatment was applied to both groups, on which basis, the observation group was also treated with Sofren injection; 14d was taken as one treatment course. Difference of serum metabolites before and after the treatment was analyzed between the two groups by components analysis with HPLC; the levels of SOD, GSH, MDA, and CRP, the expressions of Fas and Fas-L were detected before and after the treatment in the two groups with ELISA method. Results: The total effective rate of the observation group was significantly higher than that of the control group; whereas, the inefficiency of the observation group was lower than that of the control group(P<0.05). Four different metabolites were found, they were identified as phosphatidyl serine, lysophosphatidic C24H50NO7P, lysophosphatidic C28H50NO7P, and lysophosphatidic C30H50NO7P using orthogonal correction of partial least-squares discriminant analysis method. After the treatment, the expressions of SOD and GSH in serum were increased after routine treatment and CRP expression was decreased in the control group(P<0.05); whereas in the observation group, the levels of SOD, GSH,and sFas-L were more higher, and the expressions of MDA, CRP and sFas were more lower, with statistical significant differences(P<0.05). Conclusion: Sofren injection plays a supplementary role in the treatment of SAP with its action of anti-inflammation, anti-oxidation, and anti-apoptosis.

Coronary heart disease; Stable angina pectoris; Oxidative stress; Sofren injection; Inflammatory factors; Apoptosis

R285.6

A

1002-2406(2017)06-0056-05

王海洋(1983-)，男，碩士研究生，主要從事心血管疾病內(nèi)科藥物治療與冠脈支架治療的研究工作。

2016-11-14

修回日期：2016-11-30