EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮內病變分級中的應用

廖志東+鄭少秋+朱文標

【摘要】 目的：探討EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮內病變（SIL）分級中的應用。方法：應用免疫組化SP法標記60例宮頸鱗狀上皮化生、70例低級別宮頸上皮內病變（LSIL）和80例高級別宮頸上皮內病變（HSIL）中EGFR、Ki67和P16的表達。結果：EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表達比較，差異均有統計學意義（P<0.05），且均以HSIL為最高，LSIL次之，鱗狀上皮化生為最低。EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表達模式比較，差異均有統計學意義（P<0.05）。相關性分析顯示，EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與LSIL中蛋白表達兩兩比較，均無明顯相關（P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與HSIL中蛋白表達兩兩比較，均無明顯相關（P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL與HSIL中蛋白表達兩兩比較，均呈正相關（P<0.05）。結論：應用免疫組化SP法標記三種蛋白可作為SIL分級的參考指標，同時結合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假陽性率，提高診斷分級的準確性。

【關鍵詞】 EGFR； Ki67； P16； 宮頸鱗狀上皮內病變； 分級

【Abstract】 Objective：To explore the application of EGFR and Ki67 and P16 staining in hierarchical diagnostic of squamous intraepithelial lesions（SIL）.Method：The SP immunohistochemical method was used to mark the 60 cases of cervical squamous metaplasia，70 cases of low-grade cervical intraepithelial neoplasia（LSIL） and 80 cases of high grade cervical intraepithelial lesions（HSIL） in EGFR，Ki67 and P16 expression.Result：The expression of EGFR，Ki67 and P16 in squamous metaplasia，LSIL and HSIL were compared，the differences were statistically significant（P<0.05），and the highest was HSIL，followed by the LSIL，and the lowest was metaplasia of squamous epithelium.EGFR，Ki67 and P16 in LSIL，compared the expression pattern of HSIL，the differences were statistically significant（P<0.05）.Correlation analysis showed that EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in LSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05），EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL compared with each other，there were no significant correlations（P>0.05）EGFR，Ki67 and P16 of expression pattern in HSIL and LSIL compared with each other，all had positive correlations（P<0.05）.Conclusion：The SP immunohistochemical method is used to mark the three proteins can be used as reference for SIL classification，at the same time，combined with the distribution of LSIL and HSIL，in order to reduce the false positive rate，improve the diagnostic accuracy of classification.

【Key words】 EGFR； Ki67； P16； Squamous intraepithelial lesions； Hierarchical diagnostic

First-authors address：Chinese Medicine Hospital of Meizhou City，Meizhou 514017，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.21.003

隨著宮頸癌的相關研究不斷深入，已被證實從人乳頭狀瘤病毒感染到高、低級別宮頸上皮內病變直至原發性宮頸癌發病為一個連續的發展過程[1-2]，其中高、低級別宮頸上皮內病以宮頸鱗狀上皮內構形不正常及細胞異型增生為特征，是宮頸鱗狀上皮的癌前病變[3-4]。同時，既往研究指出低級別宮頸上皮內病變（LSIL）可給予適當的治療抑制其進展，且消退率較高，而高級別宮頸上皮內病變（HSIL）則較難通過治療使其發生逆轉，所以較大比率病例進展為宮頸癌，故準確的診斷分級對改善患者預后具有重要的意義[5-6]。本研究聯合檢測EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮化生、LSIL及HSIL中的表達情況，旨在探討EGFR、Ki67和P16在宮頸鱗狀上皮內病變分級中的應用，現報道如下。endprint

1 資料與方法

1.1 一般資料 所有組織標本均來自梅州市人民醫院2014年1月-2015年12月首次宮頸活檢手術的石蠟包埋組織，宮頸腫瘤組織學分類標準參照2014年宮頸上皮內病變WHO分級標準[7]，病理診斷由課題組成員分別閱片后共同確診，排除放化療史、免疫治療史及子宮疾病史，其中60例宮頸鱗狀上皮化生、70例LSIL及80例HSIL。60例宮頸鱗狀上皮化生，年齡21～72歲，平均（41.26±7.16）歲；70例LSIL，年齡22～71歲，

平均（42.17±6.35）歲；80例HSIL，年齡24～67歲，平均（39.88±6.98）歲。三組標本的患者的年齡比較，差異均無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法 本組標本用4%福爾馬林固定，脫水，石蠟包埋，切片機切片4 μm，SP法免疫組化染色，EGFR標記采用鼠抗人EGFR單克隆抗體、P16標記采用鼠抗人P16單克隆抗體、Ki67標記采用鼠抗人Ki67單克隆抗體，試劑盒均來自福州邁新生物公司，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗為陰性對照，以已知陽性切片作陽性對照。

1.3 結果判定標準 EGFR定位于細胞膜或細胞漿，P16定位在細胞核和/或胞漿，Ki67定位在細胞核，均以光鏡下觀察顯示棕黃色納入為陽性細胞，均以無陽性細胞或陽性細胞數<5%納入為陰性，陽性細胞數≥5%納入為陽性，同時將陽性組織分為3個等級：5%～25%納入為（+），>25%～50%納入為（++），>50%納入為（+++）。

1.4 統計學處理 所有數據均經SPSS 20.0統計學軟件進行統計學分析，計量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗或F檢驗；計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗或Z檢驗，采用Pearson相關分析方法分析EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理類型宮頸組織之間表達的相關性，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同病理類型宮頸組織中EGFR、Ki67和P16蛋白的表達 EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生中陽性率分別為16.66%、13.33%、15.00%，在LSIL中陽性率分別為30.00%、80.00%、77.14%，在HSIL中陽性率分別為76.25%、80.00%、98.75%。EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表達比較，差異均有統計學意義（P<0.05），且均以HSIL為最高，LSIL次之，鱗狀上皮化生為最低，見表1。

2.2 EGFR、Ki67和P16蛋白在LSIL、HSIL中的表達模式 EGFR、Ki67和P16在LSIL、HSIL中的表達模式比較，差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

2.3 EGFR、Ki67和P16蛋白在不同病理類型宮頸組織中蛋白表達的相關性 相關性分析顯示，EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與LSIL中蛋白表達兩兩比較，均無明顯相關（r=0.11、0.08、0.09，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生與HSIL中蛋白表達兩兩比較，均無明顯相關（r=0.10、0.08、0.08，P>0.05），EGFR、Ki67和P16在LSIL與HSIL中蛋白表達兩兩比較，均呈正相關（r=0.35、0.48、0.47，P<0.05）。

3 討論

人乳頭狀瘤病毒感染是宮頸癌發病的主要致病因素，這與感染后導致宿主癌基因被激活的一系列機制有關，諸如：人乳頭狀瘤病毒的E6、E7基因可整合于宿主的基因組內，分別引起P53、Rb蛋白的異常表達，進而引起Ki67、P16蛋白的異常表達；EGFR是原癌基因c-erb B-1的表達產物，是信號傳導、細胞周期調控的關鍵分子[8-10]。既往研究顯示，P16基因以缺失、突變方式廣泛參與腫瘤形成，如直接參與細胞周期的調控，負調節細胞增殖及分裂，其失活可能導致細胞惡性增殖[11-12]。Ki67是一種核增殖抗體，表達于GO期以外處于其他細胞周期的細胞，可作為細胞增殖標記物用于腫瘤和反應性增生病變的鑒別[13-14]。EGFR與其受體結合可促進細胞的增殖分化并加速細胞的惡性轉化，與腫瘤的組織學分型密切相關，已在為胃癌、乳腺癌的診斷中被應用[15-16]。故本研究選取EGFR、Ki67和P16蛋白作為宮頸鱗狀上皮內病變的標記物。同時，選取EGFR、Ki67和P16蛋白作為宮頸鱗狀上皮化生的標記物，宮頸鱗狀上皮化生在組織學中于SIL相似、易混淆[17-21]，以作對照。

本研究結果表明，EGFR、Ki67和P16在鱗狀上皮化生、LSIL和HSIL中的蛋白表達比較，差異均有統計學意義（P<0.05），且均以HSIL為最高，LSIL次之，鱗狀上皮化生為最低，叢玲華等[20]、姚秀華等[21]的研究有過類似報道，本研究與其持有類似觀點，其指出，三種蛋白在宮頸鱗狀上皮化生等良性病變中幾乎呈陰性，而在LSIL和HSIL中呈陽性，且隨病情進展而陽性強度增高，提示三種蛋白在高表達與宮頸癌的發展密切關系。但這并不足以用于宮頸鱗狀上皮內病變診斷分級。同時，本研究光鏡下觀察到宮頸鱗狀上皮化生中EGFR、Ki67和P16較LSIL及HSIL陽性細胞數目少，LSIL中EGFR較Ki67和P16陽性細胞數目少，LSIL中EGFR、Ki67和P16較HSIL陽性細胞數目少，且主要分布于基底層，HSIL中EGFR、Ki67和P16較本組上述組織陽性細胞數目多，且陽性細胞主要分布于上皮下2/3層以上及呈彌漫性分布。由此，可見LSIL及HSIL中EGFR、Ki67和P16陽性數目隨病情進展而增加，且陽性細胞分布也隨之改變。本研究顯示，EGFR、Ki67和P16在LSIL與HSIL中蛋白表達兩兩比較均呈正相關（P<0.05）。提示，宮頸癌的進展與多基因調控密切相關。故聯合檢測EGFR、Ki67和P16在LSIL和HSIL中的蛋白表達，同時結合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假陽性率，提高診斷分級的準確性。endprint

綜上所述，EGFR、Ki67和P16可能參與到了宮頸癌的發生、發展，應用免疫組化SP法標記三種蛋白可作為SIL分級的參考指標，同時結合LSIL和HSIL的分布特征，以降低假陽性率，提高診斷分級的準確性。

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（收稿日期：2017-06-09） （本文編輯：張爽）endprint