三七藥材霉變菌的分離培養及鑒定

王炳艷++孫玉琴++楊莉++朱琳++趙愛++高明海++王朝梁

摘要 為研究三七藥材在貯藏期間的霉變問題，對收集到的12份霉變三七進行分離、純化、鑒定。結果表明，從霉變三七上分離出14種霉菌種類，其霉菌菌落營養生長的最適溫度都為25 ℃，不同的霉變菌落生長速度有差異；通過形態學鑒定為黃曲霉柱頭變種、肇慶曲霉、多育曲霉、溜曲霉、兩形頭曲霉、毒曲霉、合陽曲霉、寄生曲霉、粒落曲霉、聚多曲霉、炭黑曲霉、日本曲霉原變種、米曲霉舒展變種和塔賓曲霉等。

關鍵詞 三七；霉變菌；分離；鑒定

中圖分類號 S567.5 文獻標識碼 A 文章編號 1007-5739（2017）20-0066-02

Isolation and Identification of Mold in Panax notoginseng

WANG Bing-yan 1 SUN Yu-qin 1 YANG Li 1 ZHU Lin 1 ZHAO Ai 1 GAO Ming-hai 2 WANG Chao-liang 1 *

（1 Sanqi Research Institute，Wenshan University，Wenshan Yunnan 663000； 2 Wenshan Huaxin Sanqi Co.，LTD）

Abstract In order to in study the mildew of Panax notoginseng in the storage stage，12 samples were separated，purified and identified. The results showed that 14 kinds of mold were separated，the optimum temperature for all colonies growth was 25 ℃，there are differences in growth rate among different kinds of colonies. Based on the morphology identification，the species of mold in Panax notoginseng were Aspergillus flavus var. columnaris，A. zhaoqingensis，A. proliferans，A. tamarii，A. janus，A. toxicarius，A. heyangensis，A. parasiticus，A. granulosus，A. sydowii，A. carbonarius，A. japonicas var. japonicas，A. oryzae var. effuses and A. tubingensis.

Key words Panax notoginseng；mold；isolation；identification

三七為五加科人參屬植物，以干燥根及根莖入藥[1]。近年來，隨著三七產業的快速發展，其種植面積和產量均占全國的98%以上，是云南獨具特色的生物資源[2]。長期以來，由于貯藏設施落后，管理粗放，絕大多數都分散在民宅貯藏，導致三七藥材在貯藏期間常常遭受多種霉菌的侵害而發生霉變。

現階段由于三七藥材的貯藏規模和貯藏數量越來越大，為深入探索三七藥材貯藏期引起的霉變和防止霉變措施已成為當前亟需解決的課題。目前，國內研究絕大多數都集中在栽培技術及初加工等方面，而對三七藥材貯藏期的霉變研究相對比較滯后，尚未有這方面的報道。

為此，在三七產區收集了12份霉變三七進行分離培養及鑒定，以期為三七藥材的科學合理貯藏及防止霉變提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料：采自于主產區貯藏在農戶、三七交易市場、企業倉庫內發生霉變的三七藥材。

供試培養基：供試基礎培養基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基（PDA）和沙氏培養基。

1.2 試驗方法

1.2.1 霉變三七水分含量測定。按GB/T14769的方法測定水分。

1.2.2 霉變菌的分離培養及菌落形態觀察。無菌條件下用解剖針挑取三七藥材上的少許霉菌接種到培養基上，置于培養箱中25 ℃恒溫培養，2～3 d霉菌長出菌落后，挑取菌落邊緣的少許菌絲移入培養基上分離純化菌種，觀察記錄霉變菌落的生長及形態。

1.2.3 霉變菌的鑒定。根據霉變菌落、分生孢子梗和分生孢子形態觀察結果，參考《常見與常用真菌》[2]和《真菌鑒定手冊》[3]等文獻資料進行霉變菌鑒定。

2 結果與分析

2.1 三七藥材貯藏中霉變發生情況

對三七交易市場、企業倉庫、民宅等區域進行調查，結果表明，所有區域內的三七藥材在貯藏期間均有少量不同程度的霉變發生；通過對霉變三七水分含量測定，其三七藥材內的水分含量均超過15%，有的水分含量甚至超過30%，超過了國家藥典規定的標準。說明水分含量過高是導致三七藥材產生霉變的主要因素之一。

2.2 霉變菌的分離培養及菌落形態觀察

室內分離培養及菌落形態觀察結果表明，霉變菌落營養生長的最適溫度都為25 ℃，不同的霉變菌生長速度有差異。黃曲霉柱頭變種菌落在查氏瓊脂上12 d直徑57～65 mm；肇慶曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑60 mm，12～14 d直徑65 mm；多育曲霉菌落在查氏瓊脂上10～14 d直徑9～15 mm；溜曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑37～55 mm，10～14 d直徑50～60 mm；兩形頭曲霉菌落在查氏瓊脂上生長較慢，7 d直徑10～12 mm，12～14 d直徑25 mm；毒曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑50～60 mm，12～14 d直徑55～65 mm；合陽曲霉菌落在查氏瓊脂上生長較慢，7 d直徑12～17 mm，12～14 d直徑27～30 mm，粒落曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑30 mm，10～14 d直徑45～48 mm；聚多曲霉菌落在查氏瓊脂上7 d直徑約22 mm，10～12 d直徑25～40 mm；炭黑曲霉菌落在查氏瓊脂上生長迅速，7 d直徑40～60 mm；日本曲霉原變種菌落在查氏瓊脂上生長迅速，10 d直徑60～70 mm，少數菌株在50 mm以下；米曲霉舒展變種菌落在查氏瓊脂上7 d直徑30～35 mm，10～12 d長滿全皿；塔賓曲霉菌落在查氏瓊脂上生長迅速，7 d直徑50～75 mm。endprint

2.3 引起三七霉變的霉菌種類

依據霉變菌落、分生孢子梗和分生孢子的形態觀察結果，現已鑒定出引起三七霉變的菌種有黃曲霉柱頭變種（Aspergillus flavus Link var.clumnaris）、肇慶曲霉 （Aspergillus zhaoqingensis）、多育曲霉（Aspergillus proliferans）、溜曲霉（Aspergillus tamarii）、兩形頭曲霉（Aspergillus）、毒曲霉（As-pergillus toxicarius）、合陽曲霉（Aspergillus heyangensis）、寄生曲霉（Aspergillus parasiticus）、粒落曲霉（Aspergillus granulo-sus）、聚多曲霉（Aspergillus sydowii）、炭黑曲霉（Aspergillus carbonarius）、日本曲霉原變種（Aspergillus japonicus Saito var.japonicus、米曲霉舒展變種（Aspergillus oryzae var. effuses）和塔賓曲霉（Aspergillus tubingensis）等14種主要霉變菌種類。由此表明，引起三七藥材霉變的霉變菌種是多種多樣的，只要有霉菌寄生的條件就能夠引起三七產生霉變。

3 結論與討論

中藥材發霉的原因有多種，大多數是由于中藥材未能充分干燥，含水量超出貯藏標準或者中藥材在貯藏過程中吸收外界水分導致受潮，從而引起中藥材發霉[4]。三七藥材傳統貯藏大多是采用塑料編制袋或麻袋盛裝后，置于室內常溫條件下進行貯藏，該種貯藏方式極容易引起霉變或蟲害的發生。研究表明，三七藥材在貯藏過程中水分含量大于15%就會引起發霉，嚴重時會發生腐爛變質，水分含量過高是導致三七藥材產生霉變的主要因素之一。因此，三七藥材貯藏時其水分含量一定要控制在14%以下，保證其充分干燥，這樣才不利于霉菌的生長和繁殖，三七藥材才能夠長時間貯藏。

霉菌廣泛存在于自然界中，特別是空氣和土壤中，由于空氣中有大量的霉菌孢子，散落在藥材的表面，在遇到適宜的條件如溫度25 ℃、濕度（空氣相對濕度在85%以上或藥材含水量超過15%）及足夠的營養物質等條件，即萌發成菌絲（發霉），并產生酵素將藥材中的蛋白質、糖類、脂肪、膠質等成分分解，致使藥材霉壞變質[5]。通過對霉變菌進行分離、純化、鑒定。結果表明，從霉變三七上分離出14種霉菌種類，其霉菌菌落營養生長的最適溫度都為25 ℃，不同的霉變菌落生長速度有差異。說明引起三七藥材霉變的霉變菌種是多種多樣的，只要有霉菌寄生的條件就能夠引起三七產生霉變。

三七采挖后，水分含量較高，若不及時晾干，堆捂就會造成三七霉變腐爛[6-9]，由于三七藥材貯藏期間霉變的研究尚屬空白，本研究主要開展了三七霉變菌的分離培養及鑒定，對引起三七霉變的主要優勢霉變菌和霉變的機理、不同霉變菌對三七有效成分的影響及防止霉變的方法等有待進一步研究[10-11]。

4 參考文獻

[1] 藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[M].北京：中國醫藥科技出版社，2010：10.

[2] 崔秀明，雷紹武.三七GAP栽培技術[M].昆明：云南科技出版社，2002：72.

[2] 中國科學院微生物研究所.常見與常用真菌[M].北京：科學出版社，1973.

[3] 魏景超.真菌鑒定手冊[M].上海：上海科學出版社，1979：9.

[4] 張翠利，李琨，付麗娜，等.中藥材的儲存與有效成分之間關系的研究現狀[J].廣州化工，2015，43（20）：18-20.

[5] 孫婕，梁志剛.引進中藥材霉變的環境因子[J].中草藥，2006，37（增刊1）：362-363.

[6] 孫玉琴，高明海，朱云飛，等.烤房快速干燥對三七品質的影響研究[J].現代農業科技，2016（3）：317-319.

[7] 孫歡，劉勝蘭，胡綱，等.當歸藥材霉變前后質量變化研究[J].藥物研究，2016，25（1）：44-46.

[8] 于莉，吳曉毅，廖永紅，等.貯藏過程中影響中藥材質量的相關因素分析[J].中南藥學，2015，13（5）：547-550.

[9] 吳啟南，錢大瑋.中藥材貯藏過程的質量變化機制探討[J].中國中藥雜志，2010，35（14）：1904-1908.

[10] 盧萍紅.中藥材蟲蛀霉變的原因與對策[J].傳統醫藥，2010，19（24）：68.

[11] 劉秋桃，孔維軍，楊美華，等.儲藏過程在易霉變中藥材的科學養護技術評述[J].中國中藥，2014，40（7）：1223-1229.endprint