高效液相色譜—紫外檢測法測定糕點中納他霉素的含量

朱聿元　李紅梅　周露

摘要：建立了高效液相色譜-紫外檢測法測定糕點中納他霉素含量的實驗方法。色譜柱采用Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40為流動相，采用紫外檢測器測定了糕點中納他霉素的含量。納他霉素的線性范圍分別為5～100 μg/mL，檢出限為0.5 μg/mL，加標回收率為97.2%～100.3%，相對標準偏差0.98%。結果表明：該方法簡單、快速、準確、重現性好，適用于糕點中納他霉素的定量分析。

關鍵詞：納他霉素；糕點；高效液相色譜；紫外檢測器

中圖分類號：TS207.4

文獻標識碼：A文章編號：16749944（2017）20019602

1引言

納他霉素[1，2]分子式為C33H47NO13，分子量為665.73。微溶于水、甲醇，溶于稀酸、冰醋酸及二甲苯甲酰胺，難溶于大部分有機溶劑，納他霉素是很好的真菌抑制劑，既能抑制真菌，又能抑制真菌毒素的產生。納他霉素安全性能好，因為其難以被人體消化道吸收，微生物不容易產生抗體，通常噴霧方式用于食品表面的防霉變防腐。1997年我國衛生部正式批準納他霉素作為食品防腐劑。在GB 2760-2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中規定糕點中納他霉素的限量值為0.5 g/kg。目前，納他霉素在文獻中報道的分析方法有導數光譜法[3]、紫外分光光度法[4，5]、生物檢測法[6]、液相色譜法[7～13]、液質聯用法[14～16]等。筆者應用高效液相色譜-紫外檢測器檢測方法對糕點中納他霉素含量的測定進行了研究。

2材料與方法

2.1材料和儀器

實驗材料：納他霉素（Dr.Ehrenstorfer）、糕點（市場購買）；甲醇（色譜純），aladdin公司。

實驗儀器：E2695/2489液相色譜-紫外檢測器，Waters公司；超純水機，美國MILLIPORE公司；BSA224S電子天平，瑞士萬通公司。

2.2實驗方法

2.2.1色譜條件選擇

色譜柱： Waters C8柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）， Waters C18柱（250 mm×4.6 mm ，5 μm）；流動相：甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40；紫外檢測器：305 nm；進樣量10 μL；流速1.0 mL/min。

選擇流動相，甲醇+乙酸水溶液（10%）選擇了20∶40；40∶60；60∶40三種比例，慢慢增加甲醇的比例，發現在甲醇+乙酸水溶液（10%）=60∶40時候，標準品達到很好的基線分離。

2.2.2標準溶液配制

稱取納他霉素標準品1 mg，用甲醇溶解后定容至10 mL 容量瓶中，搖勻，該溶液作為標準儲備溶液。準確移取上述溶液0.5、1、2.5、5、10 mL 分別置于10 mL 容量瓶中，用流動相定容，搖勻，經0.45 μm 濾膜過濾，取濾液備用，配成5、10、25、50、100 μg/mL標準品溶液。

2.2.3樣品溶液配制

準確稱取5 g左右制備樣，加入甲醇30 mL超聲30 min，加水10 mL，通過離心機4000 r/min離心10 min，取上清液過0.22 μm濾膜后供液相色譜測定用。

3結果與討論

3.1線性關系的考察

精密吸取納他霉素標準溶液10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。納他霉素標準品的回歸方程為：y=1.33E+005x-1.24E+005，R2=0.999002。結果表明納他霉素在5～100 μg/mL之間線性關系良好。信噪比等于3為標準，計算納他霉素的檢出限為0.5 μg/mL。見圖1。

3.2精密度試驗

精密吸取標準品溶液10 μL重復進樣6次，記錄色譜圖峰面積，并測定峰面積的平均值和相對標準偏差，測定結果見表1。結果顯示相對標準偏差為0.76%，本檢測方法具有良好的準確度。

3.3重復性實驗

取同一糕點樣品，按照供試樣品溶液制備方法重復測定6次，記錄色譜圖，測定結果見表2。結果表明，重復性實驗相對標準偏差為0.61%。

3.4回收率實驗

在上述優化好的條件下，分別在糕點樣品中添加納他霉素標樣，進行加標回收率和精密度實驗。由表3中可知回收率在97.2%～100.3%之間，表明高效液相色譜-紫外檢測法檢測糕點中納他霉素含量具有良好的準確性。

3.5樣品測定

取6批糕點按2.2.3方法制備樣品溶液，樣品溶液與標準品溶液分別注入高效液相色譜儀，外標法定量，見表4，樣品中納他霉素平均含量為0.547 μg/mL，相對標準偏差為1.31%。納他霉素標準品及樣品色譜圖見圖2，圖3，納他霉素的出峰時間5.3 min左右，結果令人滿意。

4結論

本文采用高效液相色譜-紫外檢測法來測定糕點中納他霉素含量，對實驗條件進行了優化，色譜柱采用Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），以甲醇+乙酸水溶液（10%） =60∶40為流動相分離效果好，本試驗方法適用于糕點中納他霉素的含量測定。

參考文獻：

[1]

魏寶東， 鄭鳳娥， 孟憲軍，等. 發酵液中納他霉素含量快速檢測方法研究[J]. 食品研究與開發， 2007，28（2）：132～137.

[2]謝鵬， 梁淑娃， 黃宜輝. 快速測定生產中納他霉素含量的方法探討[J]. 中國食品添加劑， 2010（3）：232～236.

[3] 周玉虎， 趙慧芬. 導數光譜法測定酸奶中的納他霉素[J]. 中國乳品工業， 2008， 36（3）：54～55.endprint

[4] 梁景樂， 呂忠良， 趙愛華，等. 雙波長紫外分光光度法快速測定發酵液中納他霉素含量[J]. 食品與發酵工業， 2007， 33（4）：126～129.

[5]周玉虎， 常碩， 慧芬. 超聲萃取-紫外分光光度法測定酸奶中的納他霉素[J]. 國外電子測量技術， 2009， 28（7）：78～79.

[6]喬春明， 劉坤， 葛菁萍，等. 發酵液中納他霉素的生物檢測法[J]. 食品科學， 2009， 30（7）：159～161.

[7] 陳永艷， 李彩瑞， 楊秀敏，等. 高效液相色譜法測定果醬中的納他霉素[J]. 中國食品學報， 2008， 8（1）：115～118.

[8]李乃潔， 張凱， 趙檢，等. 高效液相色譜法測定食品中納他霉素[J]. 理化檢驗-化學分冊， 2008， 44（12）：1221～1222.

[9]鞏強， 李波， 田夏. 高效液相色譜法檢測酸牛乳中納他霉素含量的幾種前處理方法比較[J]. 食品工程， 2012（2）：46～54.

[10]劉月， 婭莉， 張惠敏，等. 高壓液相色譜法測定那他霉素的含量[J]. 煤炭與化工， 2013， 36（8）：129～130.

[11]霍艷敏， 段文增， 王駿. 高效液相色譜法同時測定乳制品中7種防腐劑[J]. 理化檢驗-化學分冊， 2013， 49（5）：580～583.

[12]魏紅燕. HPLC法測定那他霉素含量及有關物質[J]. 齊魯藥事， 2009， 28（3）：150～152.

[13]馬君剛， 任水英， 勞斐. UPLC法測定乳制品中的納他霉素[J]. 食品研究與開發， 2014， 35（13）：119～122.

[14]于瀛， 張晶， 劉洪濤，等. 超高效液相色譜-質譜法測定果醬中納他霉素殘留[J]. 新疆中醫藥， 2009， 21（6）：489～493.

[15]許錦華. 高效液相色譜-串聯質譜法測定餅干中納他霉素的含量[J]. 福建輕紡， 2012（5）：38～41.

[16]李媛媛， 王偉， 關樹文，等. 高效液相色譜-串聯質譜法測定酸奶中納他霉素的含量[J]. 中國衛生檢驗雜志， 2010， 20（4）：761～762.

Separation and Identification of Pimaricin in Cakes by High Performance Liquid Chromatography- Ultraviolet Absorption Detector

Zhu Yuyuan， Li Hongmei， Zhou Lu

（Baoying Organic Food Quality Supervision and Inspection Institute， Baoying， Jiangsu， 225800， China）

Abstract： This paper established ahigh performance liquid chromatography method for separation and determination of Pimaricin in cakes. The analytical column was Waters C18 （ 250mm×4.6mm， 5μm）. The mobile phase was methanol-acetic acid solution （10%） =（60：40， V/V）. The samples were determined by an ultraviolet absorption detector. The calibration curves had good linearity in the range of 5～100μg/mL for Pimaricin； the detection limit for Pimaricin was0.5 μg/Ml； the average recoveries of Pimaricin were 97.2%～100.3% and RSD is 0.98%（n=6）. The method was a convenient， rapid and effective method for qualitatively analysis of Pimaricin in cakes.

Key words： Pimaricin； cakes； HPLC； ultraviolet absorption detectorendprint