結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的意義

曹鷗婕

（云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南 曲靖 655000）

結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)在結(jié)核病診斷中的意義

曹鷗婕

（云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南 曲靖 655000）

目的分析結(jié)核病診斷中結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)的意義。方法選擇本院2015年10月至2017年4月接收的經(jīng)影像學(xué)檢查及組織病理學(xué)檢查確診的結(jié)核病患者117例，分別應(yīng)用結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)、涂片抗酸染色與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）熒光探針檢測(cè)，對(duì)比三種方法診斷準(zhǔn)確率。結(jié)果結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率高于涂片抗酸染色及PCR熒光探針，且PCR熒光探針檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率高于涂片抗酸染色，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。結(jié)論結(jié)核病診斷中，結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)可進(jìn)一步提升檢出率及診斷準(zhǔn)確率，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)；結(jié)核病；診斷；意義

0 引言

在全球范圍內(nèi)，成年人傳染性疾病死亡原因中，首要的即為結(jié)核病。結(jié)核病主要的引發(fā)原因?yàn)榻Y(jié)核分歧桿菌感染，治療該疾病時(shí)，快速、準(zhǔn)確的診斷具有十分重要的作用。現(xiàn)階段，臨床診斷結(jié)核病時(shí)，金標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)菌學(xué)檢查及病理學(xué)檢查，但細(xì)菌學(xué)檢查法需要較長(zhǎng)的時(shí)間，而且高要求實(shí)驗(yàn)室，不適合作為常規(guī)檢驗(yàn)方法[1]。研究表明，結(jié)核病診斷中應(yīng)用結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)方法后，可提升診斷準(zhǔn)確率。本院以經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診的結(jié)核病患者為研究對(duì)象，分析結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇本院2015年10月至2017年4月接收的經(jīng)影像學(xué)檢查及組織病理學(xué)檢查確診的結(jié)核病患者117例，男61例，女56例；年齡32-76歲，平均（48.6±2.8）歲；繼發(fā)型肺結(jié)核70例，結(jié)核性胸膜炎21例，淋巴結(jié)核10例，腎結(jié)核8例，結(jié)核性腹膜炎4例，結(jié)核性腦膜炎4例。納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：（1）符合結(jié)核病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；（2）經(jīng)影像學(xué)檢查、組織病理學(xué)檢查確診；（3）癥狀表現(xiàn)均具有典型性，如咳嗽、咯血、乏力等；（4）患者及家屬均對(duì)本研究知情。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）肝腎伴有嚴(yán)重?fù)p害；（2）近期使用免疫抑制劑；（3）人類免疫缺陷病毒抗毒檢測(cè)結(jié)果顯示為陽性。

1.2 方法

所有患者均接受結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)、涂片抗酸染色與PCR熒光探針檢測(cè)，具體方法如下：

表1 三種檢測(cè)方法診斷準(zhǔn)確率比較[n（%）]

（1）結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)。采集患者靜脈血時(shí)，利用綠色真空采血管，血量至少4 ml。采集后2 h內(nèi)，向本底對(duì)照培養(yǎng)管、測(cè)試培養(yǎng)管、陽性對(duì)照培養(yǎng)管中分別加入全血，于37℃恒溫箱中放置，給予培養(yǎng)，完成后離心10 min，速度3000-5000 r/min，接著開展酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。檢測(cè)吸光度時(shí)，采用酶標(biāo)儀，標(biāo)準(zhǔn)曲線確定后，線性回歸方程計(jì)算出來，計(jì)算出血漿γ-干擾素含量。分析結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果時(shí)，以淋巴細(xì)胞培養(yǎng)分別與干擾素（刺激水平T）、干擾素（基礎(chǔ)水平N）的和、兩個(gè)和的差值為依據(jù)。

（2）涂片抗酸染色檢測(cè)。清晨時(shí)，采集患者濃痰樣本，或胸腹腔積液、尿液等非呼吸道樣本。如采集濃痰標(biāo)本，應(yīng)先讓患者理應(yīng)清水漱口，之后指導(dǎo)患者用力咳嗽，以將呼吸道深部痰液咳出1-2口，收集后放置在收集器中，加蓋，立即送到檢驗(yàn)科中。若采集的為非呼吸道樣本，需離心處理10 min，速度3000 r/min，于兩根試管中分裝標(biāo)本，其中一管上清液全部取出，蒸餾水加入其中后，充分搖勻，另外一根沉淀圖涂片直接進(jìn)行。

（3）PCR熒光探針檢測(cè)。選擇熒光雙標(biāo)記探針與PCR引物一對(duì)，與引物擴(kuò)增區(qū)域中間的一段DNA模板特異性結(jié)合。收集標(biāo)本時(shí)，包含痰液、腦脊液、胸腹水。以試劑盒要求為參照，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行相應(yīng)的處理，向標(biāo)本中加入DNA提取液，離心10 min，速度 3000-5000 r/min，2μl上清液加入PCR反應(yīng)液中，循環(huán)處理利用PCR儀進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察三種檢測(cè)方法結(jié)果的陽性情況，即結(jié)核分歧桿菌感染情況。（1）結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)：N低于8 IU/ml，T-N在0.35 IU/ml之上且比25%N大時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為陽性，否則為陰性；（2）涂片抗酸染色檢測(cè)：油鏡下，若抗酸桿菌可以被觀察到，檢測(cè)結(jié)果為陽性，觀察不到結(jié)果為陰性；（3）PCR熒光探針檢測(cè)：樣本CT=37時(shí)，檢測(cè)結(jié)果為陽性，樣本CT＞37時(shí)給予復(fù)檢，復(fù)檢CT＜40結(jié)果為陽性，＞40為陰性[3-5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)（n）和率（%）表示計(jì)數(shù)資料，利用 檢驗(yàn)，P＜0.05表明差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率高于涂片抗酸染色及PCR熒光探針，且PCR熒光探針檢測(cè)診斷準(zhǔn)確率高于涂片抗酸染色，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），具體見表 1。

3 討論

近年來，我國(guó)明顯的提升結(jié)核病的發(fā)病率，對(duì)居民身體健康及生活質(zhì)量均產(chǎn)生嚴(yán)重影響。及早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病患者及潛伏感染患者后，有利于對(duì)結(jié)核病傳染源有效控制，使其傳播途徑被切斷[6]。目前，臨床診斷結(jié)核病時(shí)，常用方法包含細(xì)菌培養(yǎng)、痰菌涂片抗酸染色法等，痰菌涂片抗酸染色法不需要較高的技術(shù)及特殊的儀器設(shè)備，但漏檢較易發(fā)生，而且鏡檢需連續(xù)多次進(jìn)行，同時(shí)，此種方法的敏感性過低，對(duì)死菌及活菌無法區(qū)分，即使抗酸桿菌未能發(fā)現(xiàn)，并不能說明結(jié)核感染一定不存在；鑒定結(jié)核分枝桿菌時(shí)，細(xì)菌培養(yǎng)方法的準(zhǔn)確率比較高，可對(duì)菌種進(jìn)一步的鑒定，并開展藥敏試驗(yàn)，但檢測(cè)需要長(zhǎng)時(shí)間的進(jìn)行，不利于早期診斷[7]。另外，PCR熒光探針檢測(cè)也為比較常用的方法，盡管提高了陽性檢出率，但假陽性率較高，影響診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性[8]。由于上述方法的檢測(cè)結(jié)果均不理想，國(guó)內(nèi)外一直致力于尋找更為可靠的檢測(cè)方法，以提升結(jié)核病的診斷準(zhǔn)確率。經(jīng)研究，學(xué)者提出，結(jié)核病診斷時(shí)，結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)具有良好的診斷結(jié)果[9]。結(jié)核分歧桿菌感染后，特異性T淋巴細(xì)胞會(huì)在人體中形成，存在于外周血中，與結(jié)合抗原再次接觸后，其被激活，并將γ-干擾素分泌出來，而結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)時(shí)，即是利用上述變化[10]。結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)過程中，使用結(jié)核分歧桿菌特異抗原作為試劑盒，對(duì)待測(cè)全血產(chǎn)生刺激，經(jīng)培養(yǎng)后，特異性T細(xì)胞免疫應(yīng)答產(chǎn)生，如果感染并不是結(jié)核分歧桿菌引起，可將其排除，同時(shí)，對(duì)干擾素釋放水平定量分析后，可對(duì)結(jié)核分歧桿菌感染情況作出判斷，提升診斷的準(zhǔn)確性[11]。本研究結(jié)果顯示，結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)的陽性率明顯高于另外兩種檢測(cè)方法。

綜上所述，臨床診斷結(jié)核病時(shí)，結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)具有較高的診斷準(zhǔn)確率，可盡早的發(fā)現(xiàn)結(jié)核病，及時(shí)做出控制，避免結(jié)核病傳播感染，臨床應(yīng)用價(jià)值較大，應(yīng)廣泛的推廣于臨床當(dāng)中。

[1] 王立紅,付秀華,張桂芝,等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J].中國(guó)防癆雜志,2013,12(12):992-996.

[2] 田洹,胡文斌,毛艷軍.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)對(duì)肺外結(jié)核診斷的臨床意義[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2016,25(01):114-115.

[3] 于丹,劉寧.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在疑似結(jié)核病患者診斷中的價(jià)值[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2016,14(01):45-47+54.

[4] 鄭臻,黃海,鄒毅,等.抗結(jié)核抗體與結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2016,26(10):2232-2234.

[5] 崔魴,楊玲,孟江萍,等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)及結(jié)核抗體在肺外結(jié)核病診斷中的臨床意義[J].西部醫(yī)學(xué),2014,31(01):103-104+107.

[6] 孟燕妮,陳艷萍,李秀龍,等.結(jié)核感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)聯(lián)合纖維支氣管鏡檢在結(jié)核病患兒診斷中的應(yīng)用[J].疑難病雜志,2014,18(09):907-909+912.

[7] 王鳳平,陳蕾,陳蘇芳,等.結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)在肺外結(jié)核診斷應(yīng)用價(jià)值[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué),2014,15(10):1247-1249.

[8] 賈晨光,姚黎明,李秀武,等.結(jié)核感染T細(xì)胞檢測(cè)在骨關(guān)節(jié)結(jié)核中的診斷價(jià)值[J].河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,35(02):148-151.

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Significance of Tuberculosis Infected T-cells Detection in Tuberculosis Diagnosis

CAO Ou-jie
(Qujing City the First People's Hospital of Yunnan, Qujing, Yunnan, 655000)

ObjectiveTo analyze significance of tuberculosis infected T cells detection in tuberculosis diagnosis.MethodsChoose 117 cases tuberculosis patients diagnosed by imaging and histological examination

in our hospital from October 2015 to April 2017, carry on tuberculosis infected T cells detection, smear acid-fast staining and polymerase chain reaction (PCR) fluorescent probe detection, compare accuracy of three diagnosis methods.ResultsAccuracy of tuberculosis infected T cells detection was higher than smear acid-fast staining and PCR fluorescent probe,and diagnostic accuracy of PCR fluorescent probe was higher than smear acid fast staining, difference showed statistical significance(P＜0.05).ConclusionTuberculosis infected T cells detection can improve detection rate and diagnostic accuracy further of tuberculosis diagnosis, which has high clinical value.

T cell detection of tuberculosis infection; Tuberculosis; Diagnosis; Significance

10.19335/j.cnki.2096-1219.2017.15.005

曹鷗婕，女，云南省昆明人，畢業(yè)于昆明醫(yī)學(xué)院，主治醫(yī)師，本科，研究方向：傳染病。