Gene—Xpert MTB/RIF在西藏地區結核病診斷中的應用研究

嘎松卓嘎+普芝+巴桑瓊達+小尼瑪

【摘要】 目的 探討Gene-Xpert MTB/RIF在西藏地區結核病診斷中的應用價值。方法 對974例可疑結核病患者的標本同時進行結核涂片抗酸染色鏡檢和Gene-Xpert MTB/RIF檢測。對比兩種檢測結果。結果 974例檢測標本中， Gene-Xpert MTB/RIF檢測陽性率為12%（118/974）， 其中利福平敏感的標本為93例， 利福平耐藥的標本為25例（耐藥率為21%）。抗酸染色陽性標本為15例， 檢測陽性率為2%。Gene-Xpert MTB/RIF檢測陽性率高于抗酸染色， 差異具有統計學意義 （P<0.05）。結論 Gene-Xpert MTB/RIF在西藏地區結核病診斷和治療中具有較好的臨床應用價值， 且方法簡便、快速。

【關鍵詞】 Gene-Xpert MTB/RIF；結核分枝桿菌；利福平；耐藥

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.26.012

【Abstract】 Objective To investigate the application value of Gene-Xpert and MTB/RIF in the diagnosis of tuberculosis in Tibet. Methods Specimens of 974 suspected tuberculosis patients all received acid fast staining microscopy and Gene-Xpert MTB/RIF test by tuberculosis smear， and the two test results were compared. Results Among 974 test specimens， the positive rate of Gene-Xpert MTB/RIF was 12% （118/974）， including 93 rifampicin-sensitive specimens and 25 rifampicin-resistant specimens （resistance rate as 21%）. There were 15Acid-positive specimens， with detection positive rate as 2%. The positive rate of Gene-Xpert MTB/RIF was higher than that of acid-fast staining， and the difference was statistically significant （P<0.05）. Conclusion Gene-Xpert

MTB/RIF shows excellent clinical application value in diagnosis and treatment of tuberculosis in Tibet， and this method is simple and rapid.

【Key words】 Gene-Xpert MTB/RIF； Mycobacterium tuberculosis； Rifampin； Resistance

在中國， 結核病患者高達130萬， 位居世界第二， 是全球22個結核高負擔國家之一[1]。而結核病治療中耐藥成為嚴重影響治療效果的問題， 在我國15歲以下人群結核分枝桿菌（mycobacterium tuberculosis， MTB）的耐藥率達6.8%[2]。西藏自治區結核病發病率高， 是因結核病致貧的重災地區之一， 截止2013年統計， 西藏自治區現有結核桿菌感染者約為80萬人， 傳染性肺結核患者占15642/800000， 81.8%的患者來自偏遠農牧地區， 以青壯年為主， 并每年約有360人死于結核病[3]。結核病的診斷中， 實驗室病原學檢測成為確診的重要依據， 是結核病治療和防治效果評價的技術關鍵， 是確診耐多藥結核病的重要依據。隨著基層醫院條件及技術人員的不斷增強， 引進的新型檢測技術Gene-Xpert MTB/RIF在結核病的診斷和治療， 提高農牧民為主的患者的治愈率， 減輕農牧民患者經濟和精神負擔發揮著重要的作用。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集2016年5～12月西藏自治區人民醫院門診及住院974例疑似結核病患者的痰、尿液、腦脊液、胸腹水等標本。患者年齡12～66歲， 其中男562例， 女412例。標本類型中痰標本822例， 積液標本84例， 尿標本53例， 腦脊液標本8例， 腹水標本3例， 膿液標本2例， 肺泡灌洗液標本2例。

1. 2 儀器與試劑 Gene-Xpert MTB/RIF檢測儀器為美國Cepheid 公司生產的全自動醫用PCR分析系統， 試劑名稱為Gene-Xpert MTB/RIF試劑盒（批號：1000029824）。抗酸染色試劑為貝索公司的抗酸染液（批號：41611）。

1. 3 方法

1. 3. 1 抗酸染色及鏡檢 按照中國結核病防治規劃《痰涂片鏡檢標準化操作及質量保證手冊》中要求進行操作。

1. 3. 2 Gene-Xpert MTB/RIF檢測 將標本（痰、腦脊液、胸腹水等標本）與含氫氧化鈉及異丙醇的處理液常規按1∶2比

例混合， 震蕩， 室溫靜置15 min， 再將混合液轉移至一次性多室塑料反應盒中， 置于Gene-Xpert 檢測儀器進行全自動檢測， 約2 h即可在檢測軟件窗口直接讀取結果。此反應體系中還包含1個球芽孢桿菌特異性探針作為內對照， 以判斷DNA擴增效率及檢測效率。

1. 4 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。endprint

2 結果

2. 1 Gene-Xpert MTB/RIF檢測結果 974例檢測標本中， 結核分枝桿菌聚合酶鏈式反應（PCR）陽性結果為118例， 陽性率為12%；陽性標本中， 痰標本有109例， 積液有3例， 尿標本有6例。118例陽性標本中， 利福平敏感的標本為93例， 利福平耐藥的標本為25例（耐藥率為21%）。

2. 2 抗酸染色結果 974例檢測標本中， 抗酸染色陽性標本為15例， 陽性率為2%。其中13例痰標本， 2例尿液標本。

2. 3 Gene-Xpert MTB/RIF檢測和抗酸染色結果比較 Gene-Xpert MTB/RIF檢測陽性率為12%， 高于抗酸染色的2%， 差異具有統計學意義 （P<0.05）。見表1。

3 討論

西藏自治區作為結核病高發地區， 特別在農牧民地區， 結核病已成為嚴重危害群眾健康重大疾病， 也是導致群眾生活水平下降的重要因素。為此， 提高診斷技術， 精確發現和提供結核耐藥結果， 提高結核治愈率， 減少人際傳播成為阻斷結核病在西藏地區進一步傳播的重要措施之一。

Gene-Xpert MTB/RIF系統采用半巢式實時熒光定量PCR技術， 利福平耐藥相關rpoB基因為靶基因， 采用6種分子信標同時檢測6種探針， 其中5個相互重疊的分子探針選擇性覆蓋rpoB基因利福平耐藥決定區81bp核心區， 以檢測利福平耐藥[4-6]。全自動醫用PCR儀， 不受高海拔低氣壓的影響， 可在高原地區使用。

本研究結果顯示： 974例檢測標本中， Gene-Xpert MTB/RIF檢測陽性率為12%（118/974）， 其中利福平敏感的標本為93例， 利福平耐藥的標本為25例（耐藥率為21%）。抗酸染色陽性標本為15例， 陽性率為2%。Gene-Xpert MTB/RIF檢測陽性率高于抗酸染色， 差異具有統計學意義 （P<0.05）。Gene-Xpert MTB/RIF陽性檢出率明顯高于抗酸染色， 適合涂片陰性的患者。采用Gene-Xpert MTB/RIF檢測方法可以發現94%以上的經培養證實的結核病患者， 包括90%以上涂片陰性的患者， 可以大大提高結核病的實驗室診斷效率[7-10]。

綜上所述， Gene-Xpert MTB/RIF檢測系統操作簡單， 生物安全要求較低， 易于在西藏地區開展。但Gene-Xpert MTB/RIF檢測雖然方便、快捷， 但成本較高， 檢驗費用較高。在西藏地區更適用于區縣級疾病預防控制中心， 以免費用于當地農牧民的結核病的診斷和治療。

參考文獻

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[收稿日期：2017-07-18]endprint